食品中磺胺类药物含量检测方案(液相色谱仪)

月旭科技(上海)股份有限公司 磺胺类药物的多种检测方法 磺胺类药物为人工合成的抗菌药，它具有抗菌谱较广、性质稳定、使用简便、生产时不耗用粮食等优点。 根据《GB 31650-2019 食品安全国家标准食品中兽药最大残留限量》中规定磺胺类药物在食品中最大残留量如下： 4.1.93磺胺类 (Sulfonamides) 4.1.93.1 兽药分类：磺胺类合成抗菌药。 4.1.93.2 ADI： 0-50 ug/kg体重。 4.1.93.3残留标志物：兽药原形之和 (sum of parent drug)。 4.1.93.4最大残留限量：应符合表93的规定。 表93 动物种类 靶组织 残留限量ug/kg 所有食品动物(产蛋期禁用) 肌肉 100 脂肪 100 肝 100 肾 100 牛/羊 奶 100(除磺胺二甲嘧啶) 鱼 皮+肉 100 下面列举几种检测方法 参考标准： 《农业部958号公告-12-2007 水产品中磺胺类药物残留量的测定液相色谱法》 提取步骤 虾仁(去壳，搅碎) 精密称取 5g样品于 50mL 离心管中，加入 25mL 乙酸乙酯，再加入5g无水硫酸钠，涡旋2min ，超声 10min， 3000r / min 离心 10min ，收集上清液于 100mL 旋转蒸发瓶中，再重复使用25mL 乙酸乙酯溶液提取1次，合并2次上清液，于30°水浴中减压至近干，用1mL甲醇和2mL1%乙酸水超声溶解残渣，转入50mL离心管中，再用 2mL1%乙酸水溶解残渣，转入离心管。向离心管中加入8mL正己烷，涡旋 lmin， 3000r/ min 离心5min，弃去上层正己烷层，在加入 8mL 正己烷重复操作，向下层加水6mL 混匀待净化。 SPE 净化步骤 SPE柱：月旭Welchrom@BRP规格： 60mg/3mL 声明：除非另有说明，此报告结果仅对该测试样品负责。本报告未经公司许可，不可复制。 Add：上海市松江区明南路85号启迪漕河泾(中山)科技技.紫荆园10号楼 Tel：400-810-6969 活化：3mL甲醇，6mL水平衡，弃去 上样：待净化液全部上样，弃去 淋洗：3mL水，2mL5%甲醇水，弃去 洗脱：15mL甲醇洗脱，压干收集 浓缩：合并收集液于旋蒸瓶中，30°C下旋近干，并用5%甲醇水复溶，定容到1mL，过0.22um有机滤头，上机 色谱条件 色谱柱：月旭 Ultimate@ODS-34.6×250mm，5um 流动相：A-乙腈，B-甲醇， C-2%乙酸水(梯度) 流速：0.6mL/min 柱温：40℃ 进样量：20uL 检测波长：270nm 时间 %A %B %C 0.000 5.0 10.0 85.0 15.000 5.0 10.0 85.0 30.000 20.0 10 70.0 45.000 20.0 10 70.0 45.100 5.0 10.0 85.0 55.000 5.0 10.0 85.0 图1、 虾仁样加标 50ug/kg图谱 表1.加标回收率表 名称 加标标平pg/kg| 平均回收率% RSD%(n=2) 磺胺嘧啶 50 99 3.72 磺胺噻唑 86 3.86 磺胺甲基嘧啶 89 2.35 磺胺5-甲氧嘧啶 72 4.35 磺胺二甲基嘧啶 75 4.51 磺胺甲氧哒嗪 91 2.89 磺胺6-甲氧嘧啶 82 5.35 磺胺甲基异恶唑 81 4.92 磺胺多辛 64 4.71 磺胺异恶唑 84 4.54 声明：除非另有说明，此报告结果仅对该测试样品负责。本报告未经公司许可，不可复制。 Add：上海松松江区明南路85号启迪漕河泾(中山)科技技.紫荆园10号楼 邮编：201600 Add：浙江省金华市婺城区双林南街168号 磺胺二甲氧哒嗪 93 3.66 参考标准：《GB29694-2013动物性食品中13种磺胺类药物多残留的测定》 提取步骤 分别称取鸡肝(搅碎)、猪肉(搅碎)5g±0.05g，于50mL聚四氟乙烯离心管中，加乙酸乙酯20 mL，涡动2 min， 4000 r/min 离心5 min， 取上清液于100mL鸡心瓶中，残渣中加乙酸乙酯20mL，重复提取一次，合并两次提取液。 鸡心瓶中加 0.1 mol/L 盐酸溶液 4 mL， 下40℃下旋转蒸发浓缩至少于3mL， 转至15mL离心管中。用 0.1 mol/L 盐酸溶液 2 mL 洗鸡心瓶，转至同一离心管中。再用正己烷3 mL洗鸡心瓶，将正己烷转至同一离心管中，涡旋混合 30 s， 3000 r/min 离心 5 min，弃正己烷。再次用正己烷3 mL 洗鸡心瓶，转全同一离心管中，涡旋混合30s， 3000 r/min 离心5 min， 弃正己烷，取下层净化液备用。 SPE净化步骤净化 SPE柱：月旭 Welchrom@P-SCX规见：60mg/3mL 活化：甲醇2mL， 0.1 mol/L 盐酸溶液2mL， 弃去； 上样：净化液全部上样，弃去； 淋洗：0.1mol/L盐酸溶液1 mL， 50%甲醇乙腈溶液2 mL， 弃去； 洗脱：4mL5%氨水甲醇，压干，接收。 洗脱液在40℃下氮吹至干，准确加入 1mL0.1%甲酸乙腈溶液 1.0 mL，涡旋溶解，过 0.22um有机微孔滤膜，待测。 色谱条件 色谱普：月旭Ultimate@ODS-3 4.6*250mm， 5pm 流动相：A-乙腈，B-0.1%甲酸水(梯度) 流速：1.000mL/min 柱温：30℃ 进样量：20uL 检测波长：270nm 时间 %A %B 0.000 17.0 83.0 声明：除非另有说明，此报告结果仅对该测试样品负责。本报告未经公司许可，不可复制。 邮编：201600 Add：浙江省金华市婺城区双林南街168号 邮编：321000 5.000 17.0 83.0 10.000 20.0 80.0 22.300 40.0 60.0 22.400 90.0 10.0 30.000 90.0 10.0 31.000 17.0 83.0 48.000 17.0 83.0 图2.鸡肝样品样加标 50pg/kg图谱 名称 平均回收率 Rsd(N=2) 磺胺醋酰 75.97% 1.94% 声明：除非另有说明，此报告结果仅对该测试样品负责。本报告未经公司许可，不可复制。 Add：上海松松江区明南路85号启迪漕河泾(中山)科技技.紫荆园10号楼 邮编：201600 邮编：321000 磺胺吡啶 98.86% 3.90% 磺胺甲基嘧啶 94.10% 3.17% 磺胺甲氧哒嗪 95.89% 0.82% 磺胺间甲氧嘧啶 97.65% 1.87% 磺胺氯哒嗪 96.10% 4.88% 磺胺甲基异恶唑 89.06% 2.66% 磺胺异恶唑 89.26% 2.17% 苯甲酰磺胺 88.40% 3.12% 磺胺二甲基嘧啶 96.16% 1.93% 表2.样加标 50ug/kg回收率表 图3、猪肉样加标 40pg/kg图谱 表3.加标回收率表 名称 加标水平ug/kg 平均回收率% RSD% (n=2) 磺胺甲基嘧啶 40 91 3.68 磺胺二甲基嘧啶 94 2.45 磺胺甲氧哒嗪 88 0.92 磺胺间甲氧嘧啶 92 3.45 磺胺氯哒嗪 82 3.47 磺胺异恶唑 73 4.18 磺胺二甲氧哒嗪 89 2.04 以上几种方法，都能满足《GB31650-2019 食品安全国家标准食品中兽药最大残留限量》要求，且加标回收率在64%~99% 邮编：编：dd：浙江省金华市婺城区双林南街E-mail：lingyuyu @welchmat.com 声明：除非另有说明，此报告结果仅对该测试样品负责。本报告未经公司许可，不可复制。Add：上海松松江区明南路启迪漕河泾(中山)科技技.紫荆园楼邮编：编：dd：浙江省金华市婺城区双林南街E-mail：lingyuyu @welchmat.comTel： 提取步骤 虾仁（去壳，搅碎） 精密称取 5g样品于 50mL离心管中,加入 25mL乙酸乙酯，再加入 5g无水硫酸钠，涡旋 2min,超声 10min，3000r/min离心 10min,收集上清液于 100mL旋转蒸发瓶中,再重复使用 25mL乙酸乙酯溶液提取 1次,合并 2次上清液，于 30°水浴中减压至近干，用 1mL甲醇和 2mL1%乙酸水超声溶解残渣，转入 50mL离心管中，再用 2mL1%乙酸水溶解残渣，转入离 心管。向离心管中加入 8mL正己烷，涡旋 1min，3000r/min离心 5min，弃去上层正己烷层， 在加入 8mL正己烷重复操作，向下层加水 6mL混匀待净化。