茶叶中5种合成着色剂检测方案(液相色谱仪)

SSL-CA22-136Excellence in Science Excellence in ScienceLC-293 岛津企业管理(中国)有限公司-分析中心Shimadzu (China) Co.， LTD.-Analytical Applications CenterTel： 86(21)34193996Email： sshzyan@shimadzu.com.cnhttp：//www.shimadzu.com.cn 液相色谱法测定茶叶中5种合成着色剂含量 LC-293 摘要：本文使用液相色谱仪建立了茶叶中5种合成着色剂含量的分析方法，并对方法的线性、重现性及加标回收率进行了考察。结果显示，合成着色剂在 0.1-10 ug/mL内线性关系良好；对照品溶液连续进6针，保留时间和峰面积的 RSD% 均小于2%，重复性好，稳定性强；对样品进行加标，加标浓度为0.5、2、5 ug/g，回收率为 80%~105%，方法可靠，本应用建立的方法准确、灵敏、重复性好，可为测定茶叶中合成着色剂的含量提供参考。 关键词：液相色谱法茶叶合成着色剂 茶叶是世界人民喜闻乐见的健康饮品，品类繁多，具有安神明目、清热解毒、消食利水等功效；且在医疗领域、人文领域都有不菲的价值。市面上售有的茶叶含天然着色剂，属正常，无毒。但部分不法商家会添加合成着色剂，以润色旧茶，达到以次充好、滥竽充数的目的。 突性(基因突变)与致癌作用。因此为提高产品安全性，应对其进行质量控制。。合成着色剂常见的检测方法有紫外-可见分光光度法、液相色谱法等。液相色谱法具有专属性强、灵每度高、操作自动化等特点，适合合成着色剂的检测。 合成着色剂具有偶氮类、氧蒽类、二苯甲烷类结构，性质稳定。少量的合成着色剂对人体几乎无害，但部分着色剂过量可能会造成包括一般毒性、致泻性、致 本文采用液相色谱法测定茶叶中合成着色剂的含量，包括柠檬黄、苋菜红、胭脂红、日落黄、亮蓝等，操作性和实用性强，，可供相关检测参考。 实验部分 1.1仪器 本文使用岛津 LC-16 液相色谱仪，配置信息如下 系统控制器： CBM-20Alite自动进样器： SIL-16柱温箱： CTO-16L输液泵： LC-16脱气机： DGU-20A检测器： SPD-16 1.2分析条件 色谱柱： Shim-pack GIST C18-AQ 250 mm×4.6mml.D.，5um， 岛津(：(上海)实验器材有限公司， P/N： 227-30742-08 净化柱： SHIMSEN Styra PGM 150 mg/6mL，岛津(上海)实验器材有限公司，P/N：380-00852-02 柱温：35℃检测波长：波长切换，起始波长为 425 nm流动相A：0.02 mol/L 乙酸铵溶液B：甲醇进样量：10uL流速：1mL/min洗脱方式：梯度洗脱，B相起始浓度为14% 梯度洗脱及波长切换时间时间程序见表1 表1 梯度洗脱及波长切换时间程序 时间(min) 单元 处理命令 值 6.50 SPD-20A(检测器A) Wavelength Ch1 520 13.00 SPD-20A(检测器A) Wavelength Ch1 483 18.50 SPD-20A(检测器A) Wavelength Ch1 620 26.00 泵 B.Conc 68 30.00 泵 B.Conc 86 30.50 泵 B.Conc 14 35.00 控制器 Stop 1.3供试品溶液配制 1.3.1试剂 溶液A：乙醇-乙腈(V：V=2：1)；溶液B：水-氨一(V：V=30：1)； 提取液：溶液A：溶液B=7：3 1.3.2样品前处理 氮吹近干，纯水定容至1mL，上机分析 结果与讨论 2.1标准溶液色谱图， 5种合成着色剂溶液色谱图如图1所示，相关化合物信息见表2。 图1标准溶液(5ug/mL)色谱图 表25种合成着色剂化合物信息 No. 化合物 英文名称 CAS 号 保留时间(min) 1 柠檬黄 Tartrazine 1934-21-0 5.347 2 苋菜红 AcidRed27 915-67-3 7.622 3 胭脂红 Carmine 15876-47-8 11.665 4 日落黄 Sunset Yellow 2783-94-0 14.437 5 亮蓝 Brilliant Blue 3844-45-9 22.613 2.2校准曲线和检出限 以超纯水为溶剂，配制0.1、0.5、1、2、5、10 ug/mL 系列浓度的标准曲线溶液。按“1.2分析条件”进行测定，使用外标法定量。以峰面积为纵坐标，对应的标准工作溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线，如图2所示。校准曲线线性关系良好，相关系数大于0.9999。根据0.1 ug/mL标准溶液信噪比计算仪器检出限，具体线性相关系数及仪器检出限如表3所示。 图2 标准曲线 表3 线性相关系数(r)和仪器检出限 No. 化合物 线性方程 相关系数(r) 检出限(ug/mL) 1 柠檬黄 Y=17517.5X-198.049 R=0.9999 0.045 2 苋菜红 Y=14821.5X-57.7913 R=0.9999 0.038 3 胭脂红 Y=12913.4X+62.2687 R=0.9999 0.027 4 日落黄 Y=18016.0X+107.628 R=0.9999 0.024 5 亮蓝 Y=50341.8X-395.943 R=0.9999 0.012 2.3精密度 采用0.5 ug/mL标准工作溶液连续测定6次，考察仪器的精密度，保留时间和峰面积的重复性结果如表4所示。结果显示：目标物保留时间和峰面积的相对标准偏差均小于2%，显示仪器精密度良好。 表4保留时间和峰面积重复性结果(n=6) No. 目标物名称 保留时间(RSD%) )1 峰面积 (RSD%) 柠檬黄 0.23 1.18 2 苋菜红 0.18 0.79 胭脂红 0.11 0.87 日落黄 0.10 0.74 亮蓝 0.05 0.40 2.4加标回收率 分析某茶叶样品，得到色谱图如图3所示。对实际样品加标，加标浓度分别为为0.5、2、5 ug/g。实际样品中合成着色剂浓度及加标回收率见表5。 mV 图3 茶叶样品色谱图 表5样品分析和重复性实验结果(n=6) No. 目标物 样品浓度 添加浓度 回收率 添加浓度 回收率 添加浓度 回收率 名称 (ug/mL) (ug/g) (%) (ug/g) (%) (ug/g) (%) 柠檬黄 N.D. 0.5 82.20 2 83.88 5 81.65 2 苋菜红 N.D. 0.5 104.50 2 81.88 5 82.12 3 胭脂红 N.D. 0.5 92.00 2 86.23 5 84.71 4 日落黄 N.D. 0.5 88.50 2 84.93 5 80.86 5 亮蓝 N.D. 0.5 97.90 2 90.65 5 80.59 备注： N.D.表示未检出 结论 本文建立了茶叶中5种合成着色剂含量测定的方法，分析结果表明：在0.1-10 pg/mL浓度范围内，各化合物线性相关系数均在0.9999 以上，线性良好。0.5 pg/mL溶准溶液重复分析6次，保留时间和峰面积相对标准偏差均小于2%，重复性良好。对实际样品进行测试，各合成着色剂均未检出，对样品进行不同浓度加标，加标浓度分别为0.5、2、50 ug/g，加标回收率为 80%~105%。该方法灵敏度高、重复性好，可用于茶叶中5种合成着色剂含量的检测。 岛津应用云 本文建立了茶叶中5种合成着色剂含量测定的方法，分析结果表明：在0.1-10 μg/mL浓度范围内，各化合物线性相关系数均在0.9999以上，线性良好。0.5 μg/mL标准溶液重复分析6次，保留时间和峰面积相对标准偏差均小于2%，重复性良好。对实际样品进行测试，各合成着色剂均未检出，对样品进行不同浓度加标，加标浓度分别为0.5、2、50 μg/g，加标回收率为80%~105%。该方法灵敏度高、重复性好，可用于茶叶中5种合成着色剂含量的检测。