L-乳酸脱氢酶中含量检测方案(紫外分光光度计)

TEL-400-616-4686 TEL-400-616-4686PROFESSIONAL SPECTRUM INSTRUMENT MANUFACTURER L-乳酸脱氢酶测定实验的应用方案 摘要本实验主要测定L-乳酸脱氢酶的活性 原理乳酸脱氢酶 (la(cltaactteacte dehydrogenase， LDH) 广泛存在于生物细胞内，是糖代谢酵解途径的关键酶之一。LDH可溶于水或稀盐溶液。组织中 LDH含量测定方法很多，其中紫外分光光度法更为简单、快速。鉴于 NADH， NAD+在340nm 及 260nm 处有各自的最大吸收峰，因此以 NAD+为辅酶的各种脱氢酶类都可通过 340nm 光吸收值的改变，定量测定酶的含量。 材料与仪器 组织样品 磷酸钾 NADH 丙酮酸 美析 UV1800 紫外分光光度计 步骤 一、试剂： 0.1 mol/I 磷酸钾 pH 7.0 0.01 mol/I NADH (71 mg 溶于10 ml H2O 中)0.1mol/I丙酮酸(丙酮酸钠， Mr=110； 110 mg 溶于10ml H20 中)。 LDH 原料溶液(从猪心脏提取，例如10mg/ml，用 0.1mol/l磷酸钾pH 7.0稀释至1IU/ml) 二、LDH活力测定 1.取1只比色杯中加入0.1 m mol/L pH7.5磷酸氢二钾缓冲液3ml，置于美析 UV1800 紫外分光光度计中，在 340nm 处将光吸收调节至零。 2.取1只比色杯，依次加入丙酮酸钠溶液2.9ml， NADH 溶液0.1ml， 加盖摇匀后，加入经稀释的酶液10ul，加盖摇匀后，在A340nm， 连续测定 3min， 以A对时间作图，取反应最初线性部分，计算A340nm/min 减少值。 三、数据处理 计算每毫升组织提取液中 LDH 活力单位。 注意事项 加入酶液的稀释度(或加入量)应控制在A340nm/min 减少值在0.1-0.2之间。 仪器参数 上海美析仪器有限公司 UV-1800双光束 上海美晰仪器有限公司 10 TEL：400-616-4686|http：//www.macylab.com 关于我们 上海美析仪器公司简介 上海美析仪器有限公司(以下简称美析)，是一家具有自主知识产权的高新技术企业，美析的创业理念“科技——因你改变”，并以此为企业宗旨，不断探究、果敢创新。特别是在分析测试仪器领域，不断开发出先进的产品，使美析成为优质仪器资源的供应者。 上海美析仪器有限公司 美析主营光谱类仪器可见分光光度计、紫外可见分光光度计、原子吸收光谱仪、超微量分光光度计、原原荧光光度计、ICP电感耦合等离子体发射光谱仪、ICP 电感耦合等离子体质谱仪，目前，我们的产品已广泛应用于有机化学、无机化学、生物化学、医药、环保、冶金、石油、农业等领域。同时美析利用在产品机械结构、光学设计、电气应用和软件开发方面积累的丰富经验，结合市场的最新实际需求，近期将陆续推出一批全新的分析类仪器。美析的总部及生产基地设在上海，营销中心设在北京，并在江苏、上海、山东三地建有研发基地。为充分利用各地的智力资源，美析与国内外的部分科研单位也进行了深层次的科研合作，不断将科研成果转化为生产力。为更好的服务于广大客户，美析仪器国内设有12家办事机构，度身定制符合您需求的应用解决方案，提高产品的附加值。在不断服务国内用户的同时，美析也与20多个国家的分销机构建立了深度的战略合作关系。 (美析仪器不仅仅只是一家高新技术认证企业，更通过了 CE 认证、FCC 认证、RoHS 认证以及国内多项资质审查认证，并有着多项自行研发的光谱类专利版权等等) 上海美析仪器有限公司 乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase，LDH）广泛存在于生物细胞内，是糖代谢酵解途径的关键酶之一。LDH可溶于水或稀盐溶液。组织中LDH含量测定方法很多，其中紫外分光光度法更为简单、快速。鉴于NADH，NAD+在340nm及260nm处有各自的最大吸收峰，因此以NAD+为辅酶的各种脱氢酶类都可通过340nm光吸收值的改变，定量测定酶的含量。