过氧化氢酶中活性检测方案(紫外分光光度计)

TEL-400-616-4686 紫外分光测定过氧化氢酶的活性实验 原理 H202在240 nm 波长下有强烈吸收，过氧化氢酶能分解过氧化氢，使反应溶液吸光度(A240)随反应时间而降低。根据测量吸光率的变化速度即可测出过氧化氢酶的活性。 步骤 一、仪器与用具 紫外分光光度计；离心机；研钵；250ml容量瓶1个；0.5ml刻度吸管2支，2ml刻度吸管1支；10ml试管3支；恒温水浴； 二、试剂 0.2mol/L pH7.8磷酸缓冲液(内含1%聚乙烯吡咯烷酮)；0.1mol/L H202(用0.1mol/L高锰酸钾标定)。 三、方法 1.酶液提取：称取新鲜小麦叶片或其它植物组织0.5g置研钵中，加入2~3ml4℃下预冷的pH7.0磷酸缓冲液和少量石英砂研磨成匀浆后，转入25ml容量瓶中，并用缓冲液冲洗研钵数次，合并冲洗液，并定容到刻度。混合均匀将量瓶置5℃冰箱中静置 10min， 取上部澄清液在 4000rpm 下离心15min， 上清液即为过氧化氢酶粗提液。5℃下保存备用。 2.测定：取10ml试管3支，其中2支为样品测定管，1支为空白管，按表40-2顺序加入试剂。 紫外吸收法测定 H202样品液配置表 管号+ S1+ S2+ S3+ 粗酒液(ml) 0.2+ 0.2+ 0.2+ pH7.8磷酸(ml)+ 1.5+ 1.5+ 1.5+ 蒸馏水(ml) 1.0+ 1.0+ 1.0 25℃预热后，逐管加入 0.3ml 0.1mol/L的 H202， 每加完一管立即记时，并迅速倒入石英比色杯中， 240nm下测定吸光度，每隔 1min 读数1次，共测4min， 待3支管全部测定完后，按下式计算酶活性。 3.结果计算： 以1min 内A240减少0.1的酶量为1个酶活单位(u) 上海美析仪器有限公司 14240XVr 过氧化氢酶活性(u/gFW/min)=0.1xV1xtxFW+ 式中 4A240=Aso- 2 Aso一加入煮死酶液的照照管吸光值； As1，As2一样品管吸光值；+ Vt一粗酶提取液总体积(ml)；+ V一测定用粗酶液体积(m1)；+ FW-样品鲜重 (g)；+ 0.1-A240每下降0.1为1个酶活单位(u)；+ t-加过氧化氢到最后一次读数时间(min)。+ 注意事项 凡在240nm 下有强吸收的物质对本实验有干扰 仪器参数 PROFESSIONAL SPECTRUM INSTRUMENT MANUFACTURER UV-1800UV-1800AUV-1800S双光束紫外可见分光光度计 上海美析仪器有限公司 10 TE L：400-616-4686|http：//www.macylab.com 关于我们 上海美析仪器有限公司 上海美析仪器公司简介 上海美析仪器有限公司(以下简称美析)，是一家具有自主知识产权的高新技术企业，美析的创业理念“科技----因你改变”，并以此为企业宗旨，不断探究、果敢创新。特别是在分析测试仪器领域，不断开发出先进的产品，使美析成为优质仪器资源的供应者。 美析主营光谱类仪器可见分光光度计、紫外可见分光光度计、原子吸收光谱仪、超微量分光光度计、原子荧光光度计、ICP电感耦合等离子体发射光谱仪、ICP电感耦合等离子体质谱仪，L，目前，我们的产品已广泛应用于有机化学、无机化学、生物化学、医药、环保、冶金、石油、农业等领域。同时美析利用在产品机械结构、光学设计、电气应用和软件开发方面积累的丰富经验，结合市场的最新实际需求，近期将陆续推出一批批新的分析类仪器。美析的总部及生产基地设在上海，营销中心设在北京，并在江苏、上海、山东三地建有研发基地。为充分利用各地的智力资源，美析与国内外的部分科研单位也进行了深层次的科研合作，不断将科研成果转化为生产力。为更好的服务于广大客户，美析仪器国内设有12家办事机构，度身定制符合您需求的应用解决方案，提高产品的附加值。在不断服务国内用户的同时，美析也与20多个国家的分销机构建立了深度的战略合作关系。 (美析仪器不仅仅只是一家高新技术认证企业，更通过了 CE 认证、FCC 认证、RoHS 认证以及国内多项资质审查认证，并有着多项自行研发的光谱类专利版权等等) 上海美析仪器有限公司 H2O2在240 nm波长下有强烈吸收，过氧化氢酶能分解过氧化氢，使反应溶液吸光度(A240)随反应时间而降低。根据测量吸光率的变化速度即可测出过氧化氢酶的活性。