食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠检测方案(液相色谱仪)

文件号： FLYQ-AD-FA-01浙江福立分析仪器股份有限公司应用中心 食品安全国家标准食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定 一、检测方法： 依据国家标准：食品安全国家标准食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定 (GB 5009.28-2016). 二、方法提要 样品经水提取，高脂肪样品经正己烷脱脂、高蛋白样品经蛋白沉淀剂沉淀蛋白，采用液相色谱分离、紫外检测器检测，外标法定量。 三、试剂和材料 3.1正己烷：色谱纯。 3.2无水乙醇：分析纯。 3.3甲醇：色谱纯。 3.4氨水溶液友(1+99)：取氨水1mL，加到99mL水中，混匀。 3.5亚铁氰化钾溶液(92g/L)：称取10.6g亚铁氰化钾，加入适量水溶解，用水定容至100mL。 3.6乙酸锌溶液(183g/L)：又取22g乙酸锌溶于少量水中，加入3mL冰乙酸，用水定容至100 mL。 3.7乙酸铵溶液(20mmol/L)：称取1.54g乙酸铵，加入适量水溶解，用水定容至1000 mL，经0.22 um 水相微孔滤膜过滤后备用。 3.8水：纯净水。 四、仪器和装置 4.1高效液相色谱仪：福立 LC5090 高效液相色谱仪，配备 LC5090 在线脱气机、LC5090二元高压输液泵、LC5090 自动进样器、LC5090 柱温箱、LC5090双波长-紫外检测器。 4.2色谱柱： Sapphiresil C18色谱柱， 4.60 mm*250mm， 粒径为5.0um。 4.3一次性注射器。 4.4针头过滤器：0.22 um 有机滤膜。 4.5超声清洗仪。 4.6离心机。 4.7一般实验室常用仪器。 五、实验 5.1样品制备 5.1.1一般性试样 准确称取约2g(精确到0.0001 g)试样于具塞离心管中，加水约25mL， 涡旋混匀，于50℃水浴超声20 min， 冷却至室温后亚铁氰化钾溶液2 mL 和乙酸锌2 mL， 混匀， 于8000 r/min 离心5min， 将水相转移至50mL容量瓶，于于渣中加水20mL， 涡旋混匀后超声 5min， 于8000r/min 离心 5min， 将水相转移到同一50mL容量瓶中，并用水定容至刻度，混匀。取适量上清液过0.22 um滤膜，待测。 注：碳酸饮料、果酒、果汁、蒸馏酒等测定时可以不加蛋白沉淀剂。 5.1.2含基基的果冻、糖果等试样 准确称取约2g(精确到0.0001 g) 试样于具塞离心管中，加水约25mL，涡旋混匀，于70℃水浴加热溶解试样，于50℃水浴超声20 min，之后的操作同5.1.1。 5.1.3油脂、巧克力、奶油、油炸食品等高油脂试样 准确称取约2g(精确到0.0001g) 试样于具塞离心管中，加正己烷10mL， 于60℃水浴加热5 min， 并不时轻摇以溶解脂肪，然后加氨水溶液夜(1+99) 25mL， 乙醇1mL涡旋混匀，于50℃水浴超声20 min， 冷至至室温后亚铁氰化钾溶液2mL和乙酸锌2mL，混匀，于8000r/min 离心 5min， 弃去有机相，水相转移至50mL容量瓶中，残渣同5.1.1再提取一次后测定。 5.2标准曲线的制备 5.2.1苯甲酸、山梨酸标准储备溶液：分别准确称取 0.0190g 苯甲酸、0.0186g山梨酸，用甲醇溶解并定容至10 mL， 配制成苯甲酸、山梨酸浓度分别为1900 mg/L、1860 mg/L 的混合储备溶液； 5.2.2糖精钠(以糖精计)标准储备溶液：称取 0.0195 g糖精钠，用水溶解并分别定容至10 mL，配制成糖精钠浓度为1764.06 mg/L的储备溶液。 5.2.3苯甲酸、山梨酸和糖精钠(以糖精计)第一级标准溶液：分别准确吸取苯甲酸、山梨酸(5.2.1)和糖精钠(5.2.2)标准储备溶液各 1 mL于10mL容量瓶中，用水定容，配制成苯甲酸、山梨酸、糖精钠浓度分别为190 mg/L、186 mg/L、176.4 mg/L的标准溶液。 5.2.4苯甲酸、山梨酸和糖精钠(以糖精计)第二级标准溶液：准确吸取苯甲酸、山梨酸和糖精钠第一级标准溶液(5.2.3) 5 mL于10mL容量瓶中，用水定容，酒配制成苯甲酸、山梨酸、糖精钠浓度分别为95 mg/L、93 mg/L、88.2 mg/L的标准溶液。 5.2.5苯甲酸、山梨酸和糖精钠(以精精计)第三级标准溶液：准确吸取苯甲酸、山梨酸和糖 精钠第二级标准溶液(5.2.4)5mL于10 mL容量瓶中，用水定容，配制成苯甲酸、山梨酸、糖精钠浓度分别为47.5 mg/L、46.5 mg/L、44.1mg/L的标准溶液。 5.2.6苯甲酸、山梨酸和糖精钠(以糖精计)第四级标准溶液：准确吸取苯甲酸、山梨酸和糖精钠第三级标准溶液(5.2.5) 4mL于10mL容量瓶中，用水定容，酒配制成苯甲酸、山梨酸、糖精钠浓度分别为19 mg/L、18.6 mg/L、17.64 mg/L 的标准溶液。 5.2.7苯甲酸、山梨酸和糖精钠(以糖精计)第五级标准溶液：准确吸取苯甲酸、山梨酸和糖精钠第四级标准溶液(5.2.6) 5mL于10mL容量瓶中，用水定容，酒配制成苯甲酸、山梨酸、糖精钠浓度分别为9.5 mg/L、9.3 mg/L8.82 mg/L 的标准溶液。 5.2.8苯甲酸、山梨酸和糖精钠(以糖精计)第六级标准溶液：准确吸取苯甲酸、山梨酸和糖精钠第五级标准溶液(5.2.7) 5 mL于10mL容量瓶中，用水定容，配制成苯甲酸、山梨酸、糖精钠浓度分别为4.75 mg/L、4.65 mg/L、4.41 mg/L 的标准溶液。 5.2.9苯甲酸、山梨酸和糖精钠(以糖精计)第七级标准溶液：准确吸取苯甲酸、山梨酸和糖精钠第六级标准溶液(5.2.8) 2 mL于10 mL量量瓶中，用水定容，酒配制成苯甲酸、山梨酸、糖精钠浓度分别为0.95mg/L、0.93 mg/L、0.88 mg/L的标准溶液。 5.3仪器条件 a)色谱柱： Sapphiresil C18， 柱长 250mm， 内径4.6mm， 粒径5 um； b)流动相：甲醇：乙酸铵溶液=5：95； c)流速：1mL/min； d)检测器：： UUV V230nm； e)柱温：40℃； f) 进样量：10 uL； 5.4分析结果 5.4.1苯甲酸、山梨酸和糖精钠第四级标准溶液典型谱图及结果 100 1、苯甲酸22、山梨酸 3、糖精钠 5.4.2苯甲酸、山梨酸和糖精钠第三级标准溶液六针重复性谱图及结果 5.3.3标准曲线 标准曲线的绘绘：分别进样第一到第七级标准系列工作溶液各10uL， 进行 HPLC 分析。然后以峰面积为纵坐标，以目标物的含量为横坐标，绘制标准曲线。 组分[苯甲酸]：曲线方程： Ci =3.2264E-005*Ai 校正因子： f0=0，fl=3.2264E-005相关系数：r2=0.99966 组分[山梨酸]：曲线方程： Ci =2.05984E-005*Ai 校正因子： f0=0， fl=2.05984E-005相关系数： r^2=0.99992 米 组分[糖精钠]：曲线方程： Ci =4.83921E-005*Ai 校正因子： f0=0， fl=4.83921E-005相关系数： r^2=0.99905 5.4.5样品典型谱图及结果 5.4.5.1白酒样品典型谱图及结果 测得糖精钠平均含量0.0539g/kg 5.4.5.2果酒样品典型谱图及结果 测得山梨酸平均含量0.1214g/kg 5.4.5.3果冻样品典型谱图及结果 测得山梨酸平均含量 0.1698g/kg 5.4.5.4牛奶样品典型谱图及结果 5.4.5.5酸奶样品典型谱图及结果 5.4.5.6巧克力样品典型谱图及结果 本实验测定的白酒、果酒、果冻、牛奶、酸奶和巧克力结果均符合国家标准 GB 2760-2014 《食品安全国家标准食品添加剂使用标准》中对苯甲酸、山梨酸和糖精钠的限量要求。 六、实验结果 方法验证结论：苯甲酸、山梨酸和糖精钠的精密度、线性相关系数、检出限及回收率汇总如下： 方法评价 组分名 保留时间/min 检出限g/kg 定量限g/kg 峰面积RSD% 线性相关系数 加标回收率% 苯甲酸 10.003 0.00069 0.0028 0.38 0.999 80.69~108.51 山梨酸 14.654 0.00066 0.0026 0.11 0.999 78.44~105.04 糖精钠 16.769 0.00064 0.0026 0.49 0.999 93.65~126.55 由以上实验结果可知，采用福立 LC5090 测定食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠，方法稳定可靠，目标物线性范围良好，灵敏度较高，有很好的重现性，能够对样品进行准确定性定量。 食品添加剂是影响食品安全首要问题，多数食品安全问题由超限量、超范围使用食品添加剂造成。在食品加工企业监督检测中福立LC5090高效液相色谱仪，凭借稳定的检测性能以及高灵敏度、低检出限能够准确测定食品中食品添加剂含量。在本方法中苯甲酸、山梨酸、糖精钠检出限分别为0.00069、0.00066、0.00064g/kg。本方案中以白酒、果酒、果冻、牛奶、酸奶、巧克力样品为例子，测定其中上述三种食品添加剂的含量，把控食品安全关。部分数据结果如下:标准溶液测定谱图1、苯甲酸 2、山梨酸 3、糖精钠重复性谱图白酒样品谱图