橄榄油中8种脂肪酸烷基酯检测方案(气质联用仪)

SSL-CA20-525Excellence in Science Excellence in ScienceGCMS-398 岛津企业管理(中国)有限公司-分析中心Shimadzu (China) Co.， LTD. -Analytical Applications CenterEmail： sshzyan@shimadzu.com.cn Tel：86(21)34193996http：//www.shimadzu.com.cn GCMS 法测定橄榄油中脂肪酸烷基酯含量 GCMS-398 摘要：本文使用岛津气质联用仪 GCMS-QP2020 NX， 建立了橄榄油中脂肪酸烷基酯含量的检测方法。样品加入内标后用正己烷溶解，经硅胶固相萃取柱净化后，采用选择离子监测模式(SIM)进行检测。在 0.1~8.0mg/L浓度范围内，8种脂肪酸烷基酯线性相关系数均在0.999以上。取浓度为 0.1 mg/L的标准溶液，连续进样6次，各目标物和内标物峰面积比的相对标准偏差均小于7%。在10 mg/kg 加标水平下，8种脂肪酸烷基酯的加标回收率均在89.9%~113.3%之间。本方法重复性好，灵敏度高，满足橄榄油中脂肪酸烷基酯含量检测的要求。 关键词：：气相色谱质谱联用仪 橄榄油 脂肪酸烷基酯 橄榄油是由新鲜的油橄榄果冷榨而成的木本植物油。与其它植物油相比，由于压榨过程中不经加热和化学处理，橄榄油含有更高的不饱和脂肪酸，丰富的脂溶性维生素及抗氧化物等营养成分，且不含胆固醇，具有很高的营养价值和保健功效，被越来越多的人青睐，消费市场潜力巨大。 橄榄油尤其是特级初榨橄榄油价格昂贵，不法商家通过勾兑掺假、以次充好等手段牟取利益，，已成为普遍的市场现状。如何判断橄榄油是否掺假，是保护消费者权益、维护市场秩序的一个亟待解决的问题。 橄榄油中脂肪酸烷基酯是油中的游离脂肪酸与橄榄果发酵产生的低级醇类物质反应产生的，主要有脂肪酸甲酯和脂肪酸乙酯。研究发现，产于西班牙的特级初榨橄榄油中脂肪酸烷基酯含量均低于40 mg/kg， 实验部分 1.1仪器 气质联用仪：GCMS-QP2020 NX 1.2分析条件 色谱柱： Rxi-5Sil MS，30 m×0.25 mm×0.25 um 柱温程序：100℃(1 min)_20℃ /min_200℃_5℃/ min_240℃ (1 min)_20℃ /min_300℃(2 min) 进林口温度：300℃ 载气控制方式：恒流速，1.0 mL/min 进样方式：不分流进样 脂肪酸乙酯和脂肪酸甲酯含量的平均比值为1.0左右。而在低质量的橄榄油中，脂肪酸烷基酯含量高于70mg/kg，并且其脂脂肪酸乙酯和脂肪酸甲酯的平均含量比大于5.0。通过检测橄榄油中脂肪酸烷基酯含量已成为评判橄榄油质量的一个重要依据。因此，国际橄榄油协会标准 COI/T. 15/NC No 3/Rev. 11 规定特级初榨橄榄油中脂肪酸乙酯含量不超过 35 mg/kg。欧盟也规定2015年后生产的特级初榨橄榄油中脂肪酸乙酯含量不得超过 30 mg/kg。 本文参照 BJS 202105《橄榄油中脂肪酸烷基酯含量测定气相色谱-质谱法》，采用岛津 GCMS-QP2020NX气相色谱-质谱联用仪，建立了橄榄油中脂肪酸烷基酯含量的检测方法。方法操作简单，灵敏度高，适用于测定橄榄油中脂肪酸烷基酯含量。 进样量： 1uLIL 离子化方式：El 离子源温度：230℃ 色谱质谱接口温度：300℃ 检测器电压：调谐电压 采集模式： SIM，具体参数见表1 样品前处理 样品前处理如图1所示： 图1样品前处理流程图 结果与讨论 3.1标准品图谱 8种脂肪酸烷基酯和十七烷酸甲酯标准品色谱图和质量色谱图分别如图2和图3所示，各化合物信息见表1. 图2 8种脂肪酸烷基酯和十七烷酸甲酯混合标准溶液色谱图(1.0mg/L) _— 图38种脂肪酸烷基酯和十七烷酸甲酯质量色谱图 表1相关化合物信息 No. 化合物名称 英文名称 CAS号 保留时间 (min) 定量离子 (m/z) 定性离子 (m/z) 1 棕榈酸甲酯 Methyl palmitate 112-39-0 9.433 74 87、143、270 2 棕榈酸乙酯 Ethyl palmitate 628-97-7 10.161 88 101、241、284 3 十七烷酸甲酯 Methyl linoleate 1731-92-6 10.537 74 87、143、284 4 亚油酸甲酯 Methyl oleate 112-63-0 11.361 67 109、263、294 5 油酸甲酯 Methyl stearate 112-62-9 11.440 74 222、264、296 6 硬脂酸甲酯 Ethyl linoleate 112-61-8 11.753 74 87、255、298 7 亚油酸乙酯 Ethyl oleate 544-35-4 12.194 67 109、263、308 8 油酸乙酯 Ethyl stearate 111-62-6 12.277 88 222、264、310 9 硬脂酸乙酯 Methyl heptadecanoate 111-61-5 12.612 88 101、269、312 3.2标准曲线和检出限 用正己烷作溶剂，配制浓度为0.1、0.2、0.5、1.0、2.0、4.0和8.0 mg/L的混合标准曲线溶液，内标浓度为1.0mg/L，考察8种脂肪酸烷基酯的校准曲线回归方程的相关系数。以浓度比为横坐标，峰面积比为纵坐标做标准曲线，各化合物物准曲线如图4所示。其中仪器检出限是根据0.1 mg/L标准溶液谱图，按3倍噪声计算。线性相关系数和检出限见表2。 Area Ratio Area Ratio Conc.Ratio(mg/L) Conc.Ratio (mg/L) 图4 8种脂肪酸烷基酯标准曲线 表28种脂肪酸烷基酯标准曲线信息和仪器检出限 No. 化合物名称 线性相关系数 S/N (0.1mg/L) 检出限(mg/L) 1 棕榈酸甲酯 0.9997 194.99 0.0015 2 棕榈酸乙酯 0.9999 402.66 0.0007 3 亚油酸甲酯 0.9999 28.03 0.0107 4 油酸甲酯 0.9998 30.05 0.0100 5 硬脂酸甲酯 0.9999 128.91 0.0023 6 亚油酸乙酯 0.9999 23.69 0.0127 7 油酸乙酯 0.9999 67.98 0.0044 8 硬脂酸乙酯 0.9999 363.71 0.0008 3.3重复性 取浓度为 0.1 mg/L的标准溶液，重复进样6次，考察仪器的重复性。重复性结果见表3. 表3 8种脂肪酸烷基酯标准溶液重复性结果(n=6) No. 化合物名称 峰面积比 峰面积比 1 2 3 4 5 6 RSD% 棕榈酸甲酯 0.108 0.107 0.107 0.112 0.115 0.116 3.82 棕榈酸乙酯 0.084 0.084 0.087 0.091 0.095 0.098 6.18 3 亚油酸甲酯 0.032 0.032 0.032 0.031 0.031 0.031 1.58 4 油酸甲酯 0.021 0.021 0.020 0.020 0.020 0.020 1.54 5 硬脂酸甲酯 0.086 0.085 0.085 0.085 0.085 0.085 0.50 6 亚油酸乙酯 0.028 0.027 0.027 0.027 0.027 0.026 1.70 油酸乙酯 0.015 0.015 0.015 0.015 0.015 0.015 1.37 8 硬脂酸乙酯 0.084 0.083 0.086 0.088 0.092 0.094 4.67 3.4样品测定 取0.05g橄榄油样品，按照上述前处理步骤处理并测定。样品测定结果见表4，样品的色谱图见图5。 图5 测试橄榄油样品色谱图 3.5样品加标回收率 对以上橄榄油样品进行加标回收实验，加标量为10 mg/kg， 按图1进行前处理平行处理3份。加标回收率结果见表4。 表4 样品加标回收率结果 No. 化合物名称 样品测定值 加标示品测定值(mg/kg) 平均回收率 (mg/kg) 1 2 3 (%) 1 棕榈酸甲酯 0.00 9.46 8.66 8.86 89.9 2 棕榈酸乙酯 4.89 15.80 15.46 15.45 106.8 3 亚油酸甲酯 3.00 14.32 13.89 13.79 110.0 4 油酸甲酯 11.70 23.28 22.65 22.84 112.2 5 硬脂酸甲酯 0.00 9.92 9.66 9.64 97.4 6 亚油酸乙酯 4.57 16.55 15.57 15.58 113.3 7 油酸乙酯 21.70 32.65 32.87 32.42 109.5 8 硬脂酸乙酯 1.12 11.07 11.03 10.96 99.0 结论 采用岛津公司气质联用仪 GCMS-QP2020 NX 建立了橄榄油中脂肪酸烷基酯的检测方法，在0.1~8.0 mg/L浓度范围内，各各肪酸烷基酯线性相关系数均在0.999以上。取浓度为0.1mg/L 的标准溶液重复进样6次，各目标物和内标物峰面积比的相对标准偏差在7%以下。在10 mg/kg 的加标水平下，各脂肪酸烷基酯的加标回收率均在 89.9%~113.3%之间。方法操作简单，重复性好，满足标准相关要求，适用于测定橄榄油中脂肪酸烷基酯的含量。 岛津应用云 本文采用岛津公司GCMS-QP2020   NX建立了橄榄油中脂肪酸烷基酯的检测方法。在0.1~8.0 mg/L浓度范围内，各组分线性相关系数均在0.999以上，线性良好；取浓度为0.1   mg/L的标准溶液重复进样6次，各组分峰面积的相对标准偏差均在7%以下；在10   mg/kg的加标水平下，各组分的加标回收率均在89.9%~113.3%之间。方法灵敏度高，重复性好，满足橄榄油中脂肪酸烷基酯含量检测的要求。