蔬菜、水果中23种农残及其代谢物检测方案(液质联用仪)

SSL-CA20-484Excellence in Science Excellence in ScienceLCMSMS-544 岛津企业管理(中国)有限公司-分析中心Shimadzu (China) Co.， LTD. -Analytical Applications CenterEmail： sshzyan@shimadzu.com.cn Tel：86(21)34193996http：//www.shimadzu.com.cn LCMS-8050 测定蔬菜和水果中23种农残及其代谢物 LCMSMS-544 摘要：本文建立了使用岛津超高效液相色谱仪 LC-30A 和三重四极杆质谱仪 LCMS-8050 联用测定蔬菜和水果中23种农残及其代谢物的方法。样品经捣碎后，用乙腈提取，分散固相萃取法 (QuEChERS) 净化， LC-MS/MS法检测。23种农残化合物在2ng/mL 浓度水平下响应良好，2~200 ng/mL浓度范围内(部分化合物为2~100 ng/mL)线性关系良好，检出限为 0.003~0.5 ng/mL。加标回收和精密度实验测试表明，方法准确度高，重复性好。该方法快速、有效，可有效应对疾控系统风险监测的需求。 关键词：超高效液相色谱 三重四极杆质谱 疾控农药残留 蔬菜和水果中农药残留超标问题一直是食品安全隐患的一部分，疾控系统每年都会将农药残留的检测列入监督抽检和风险监测的工作中。在2020年国家食品安全风险评估中心制定的《2020年国家食品污染和有害因素风险监测工作手册》中，给出了蔬菜和水果 中涕灭威砜等23种多农残的 LC-MS/MS 检测标准操作程序。 本文参照该 SOP， 建立了 LCMS-8050 测定蔬菜和水果中23种多农残的方法。该方法快速、准确，可有效应对疾控多农残 LC-MS/MS 风险监测工作。 表1 化合物信息 序号 中文名称 英文名称 CAS 分子式 分子量 1 涕灭威亚砜 Aldicarb-sulfoxide 1646-87-3 C7H14N203S 206.26 2 涕灭威砜 Aldicarb-sulfone 1646-88-4 C-H14N204S 222.26 3 灭多威 Methomyl 16752-77-5 C，H10N20zS 162.21 4 3-羟基克百威 3-Hydroxycarbofuran 16655-82-6 C12H15NO4 237.25 5 涕灭威 Aldicarb 116-06-3 C7H14N202S 190.27 6 残杀威 Propoxur 114-26-1 CH15NO： 209.24 7 速灭威 Metolcarb 1129-41-5 CgH1NO2 165.19 8 克百威 Carbofuran 1563-66-2 C12H15NO3 221.25 9 抗蚜威 Pirimicarb 23103-98-2 CH18N402 238.29 10 甲萘威 Carbaryl 63-25-2 C12H1NO 201.22 11 异丙威 lsoprocarb 2631-40-5 CH15NO2 193.24 12 甲硫威 Methiocarb 2032-65-7 C11H15NO2S 225.31 13 苯氧威 Fenoxycarb 79127-80-3 C17H19NO4 301.34 14 恶霜灵 Oxadixyl 77732-09-3 C14H18N20 278.3 15 甲拌磷亚砜 Phorate Sulfoxid 2588-05-8 C-H17O4PS2 260.31 16 莠去津 Atrazine 102029-43-6 CgH14CIN， 215.68 17 异恶草酮 Clomazone 81777-89-1 CH14CINO， 239.7 18 甲拌磷砜 Phorate Sulfone 2588-06-9 C-H17O，PS， 276.31 19 腈菌唑 Myclobutanil 88671-89-0 C15H1-CIN4 288.78 20 吡唑嘧菌酯 Pyraclostrobin 175013-18-0 C19H18CIN304 387.82 21 甲拌磷 Phorate 298-02-2 C-H170，PS， 260.38 22 恶草酮 Oxadiazon 19666-30-9 C15H18CIN203 345.22 23 二甲戊乐灵 Pendimethalin 40487-42-1 C13H19N304 281.31 1.2仪器 本实验采用岛津超高效液相色谱仪 LC-30A 与LCMS-8050 联用系统，具体配置为： 系统控制器：CBM-20A脱气机： DGU-20A，输液泵：LC-30AD×2自动进样器： SIL-30AC柱温箱： CTO-20A质谱检测器： LCMS-8050色谱工作站： LabSolutions Ver. 5.97 1.3分析条件 液相条件 色谱柱： Shim-pack GIST C18 (50 mmx2.1mml.D.，2um， 岛津(上海)实验器材有限公司， PN：227-30001-02) 流动相：A相-5mM乙酸铵(含0.1%甲酸)；B相-甲醇； 分析仪器： LCMS-8050 离子化模式：ESI* 离子源接口电压：4.0kV 雾化气：氮气3.0L/min 干燥气：氮气 15.0 L/min 碰撞气：氩气 接口温度：400℃ 表3 MRM 优化参数 苯氧威 302.10 116.20* -15 -11 88.20 -11 -22 恶草酮 345.10 303.05* -10 -15 -23 219.90 -12 -21 -11 吡唑醚菌酯 388.00 194.10* -14 -14 -14 163.10 -11 -27 -18 甲拌磷 261.00 75.00* -29 -10 -30 143.00 -29 -18 -15 二甲戊恶灵 282.00 212.00* -13 -12 -15 194.00 -10 -19 -20 注：*表示定量离子 1.4标准品的配制 23种农残单标购自安谱公司；浓度为100 mg/L，介质为甲醇。 混合标准中间液：准确移取100 uL各单标于10 mL容量瓶中，用甲醇定容，得到 1000 ng/mL混合标准中间溶液； 标准曲线配制：以5 mmol/L乙酸铵(含0.1%甲酸)+乙腈=1+1为溶剂，将混合标准中间液逐级稀释至浓度为2、5、10、20、50、100、200 ng/mL 的标准点，上机分析。 1.5样品前处理方法 准确称取 10g均质样品，加入10 mL乙腈，涡旋混匀后超声20 min。 加入4.0g无水硫酸镁和2.0 g氯化钠，涡旋后，4000 rpm 离心5 min， 取上清液于离心管中。用10mL 乙腈重复提取一次，合并上层有机相。 从合并的有机相中取2mL，加入0.25g无水硫酸镁和0.4 g PSA粉末，涡旋后以4000 rpm 离心2 min。取0.5mL 上清液加入0.5 mL含0.1.%甲酸的5 mmol/L乙酸铵水溶液混匀，过 0.22 um 滤膜后，上机分析。 结果与讨论 2.123种农残及其代谢物色谱图 图123种农残化合物 MRM 色谱图 (10 ng/mL) 2.2线性范围 按照1.4项下配制方法，配制标准曲线。以农残化合物浓度X为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回归分析，23种农残化合物在2~200 ng/mL(部分化合物为2~100 ng/mL)浓度内线性良好，相关系数均大于0.995。以2ng/mL 浓度点使用3倍信噪比的方式计算检出限，23种化合物的检出限为 0.003~0.5 ng/mL。 图2 农残化合物标准曲线(部分) 表423种农药残留标准曲线参数(线性回归) 化合物 线性范围 (ng/mL) 相关系数r 加权系数 准确度(%) 检出限! (ng/mL) 涕灭威亚砜 2-200 0.9995 无 91~103 涕灭威砜 2-200 0.9987 1/C 96~107 灭多威 2-100 0.9973 1/C2 93~109 0.006 3-羟基克百威 2-200 0.9993 94~111 涕灭威 2-200 0.9994 97~104 恶霜灵 2-200 0.9999 95~107 0.2 抗蚜威 2-100 0.9994 94~103 0.02 速灭威 2-200 0.9997 94~107 0.1 残杀威 2-200 0.9997 95~104 0.02 克百威 2-100 0.9997 97~103 0.02 甲萘威 2-200 0.9999 无 95~108 0.05 甲拌磷亚砜 2-200 0.9999 无 94~103 0.02 甲拌磷砜 2-200 0.9995 " 90~106 0.06 异丙威 2-200 0.9997 95~104 0.1 莠去津 2-200 0.9953 1/C2 91~110 0.04 异恶草酮 2-200 0.9996 94~105 0.02 甲硫威 2-200 0.9997 95~103 0.01 腈菌唑 2-200 0.9997 93~104 0.05 苯氧威 2-200 0.9995 95~109 0.004 恶草酮 2-200 0.9999 98~111 0.4 吡唑醚菌酯 2-200 0.9997 1/C 93~105 0.003 甲拌磷 2-200 0.9975 1/C2 92~108 0.04 二甲戊恶灵 2-100 0.9975 1/C2 90~110 0.02 2.3重复性 对 10 ng/mL 混合标准溶液连续分析6次，计算重复性。结果见表5.23种化合物的峰面积RSD为0.60%~3.17%，重复性良好。 表5 23种化合物重复性结果(n=6) 化合物 峰面积RSD，% 化合物 峰面积RSD，% 化合物 峰面积RSD，% 涕灭威亚砜 1.74 涕灭威砜 2.26 灭多威 0.83 3-羟基克百威 2.87 涕灭威 2.54 恶霜灵 2.79 抗蚜威 0.60 速灭威 2.39 残杀威 0.61 克百威 2.08 甲萘威 1.80 甲拌磷亚砜 0.73 甲拌磷砜 2.15 异丙威 1.00 莠去津 0.78 异恶草酮 0.91 甲硫威 0.75 腈菌唑 3.17 苯氧威 2.05 恶草酮 2.20 吡唑醚菌酯 2.84 甲拌磷 1.75 二甲戊恶灵 1.43 2.4方法准确性和精密度 标准方法中标准曲线最低点为 10 ng/mL，相当于在样品中的浓度为 0.08 mg/kg。在样品中分别加入低、中、高(浓度分别为0.1、0.2、0.4 mg/kg)3个水平的加标量，每个水平重复3次，进行加标回收率和精密度试验。表6为实验结果，其中，23种农残化合物在3个浓度水平下，平均回收率为80.0%~109%， RSD 为 0.90%~8.79%。 表6 23种农残化合物加标回收和精密度结果(n=3) 注：N.D.表示未检出。 结论 本文建立了一种使用岛津超高效液相效谱仪 LC-30A和三重四极杆质谱仪 LCMS-8050 联用测定蔬菜和水果中23种农残及其代谢物含量的方法。该方法在10 min 内完成23种农残化合物的检测。23种农残化合物采用外标法定量，线性范围2-200 ng/mL(部分化合物为2~100 ng/mL)，相关系数>0.9975，检出限为0.003~0.5ng/mL。样品采用乙腈提取，分散固相萃取法(QuEChERS) 净化，加标结果显示，23种农残化合物在0.1、0.2和 0.4 mg/kg3个浓度水平下，平均回收率为80.0%~109%， RSD 为 0.90%~8.79%。本文所建立的方法快速、有效，i可有效应对疾控系统日常的风险监测工作。 岛津应用云 本文建立了使用岛津超高效液相色谱仪LC-30A和三重四极杆质谱仪LCMS-8050联用测定蔬菜和水果中23种农残及其代谢物的方法。样品经捣碎后，用乙腈提取，分散固相萃取法（QuEChERS）净化，LC-MS/MS法检测。23种农残化合物在2   ng/mL浓度水平下响应良好，2~200 ng/mL浓度范围内（部分化合物为2~100 ng/mL）线性关系良好，检出限为0.003~0.5   ng/mL。加标回收和精密度实验测试表明，方法准确度高，重复性好。该方法快速、有效，可有效应对疾控系统风险监测的需求。