干燕窝中唾液酸检测方案(液质联用仪)

SSL-CA20-391Excellence in Science Excellence in ScienceLCMSMS-520 岛津企业管理(中国)有限公司-分析中心Shimadzu (China) Co.， LTD. -Analytical Applications CenterTel：86(21)34193996Email： sshzyan@shimadzu.com.cnhttp：//www.shimadzu.com.cn LCMS-8045测定燕窝中的唾液酸 LCMSMS-520 摘要：本文使用岛津三重四极杆液相色谱质谱联用仪 (LCMS-8045)，采用 HILIC 色谱柱，建立了燕窝中唾液酸的测定方法。实验结果表明，在25-500 ng/mL浓度范围内，方法线性良好，线性判定系数R为0.9992。实际燕窝样品三次平行分析，结果表明：唾液酸平均含量为 117.70 g/kg， RSD 为 1.37%。该方法简单，灵敏，稳定性好，适用于燕窝中唾液酸的检测。 关键词： LCMS-8045燕窝 唾液酸 中国人吃燕窝的历史已有600多年，中医认为：燕窝具有养阴润燥、益气补中功效，主治咳嗽、盗汗、咯血、反胃干呕、夜尿频多等症。食用燕窝还有助于快速改善健康状况，被称为是滋补圣品，目前越来越受到广大人群的青睐。 燕窝含有丰富的糖类、有机酸、游离氨基酸以及特征物质——唾液酸 (sialic acid) 。唾液酸又称燕窝酸，是燕窝主要的生物活性成分，是智力发展催化剂。 据报道，一般燕窝的唾液酸含量可达7%以上，这也是初步鉴定真假燕窝的手段。 唾液酸的检测方法主要有分光光度法，高效液相色谱法，液相色谱质谱联用法等，本文参考 SN/T3644-2013(出口燕窝及其制品中唾液酸的测定)，采用岛津LCMS-8045 液质联用仪，建立了燕窝中唾液酸的分析方法，供相关检测人员参考。 实验部分 1.1仪器 本实验采用岛津三重四极杆液质联用仪LCMS-8045，具体配置为： 系统控制器：CBM-20A脱气机： DGU-20A输液泵：LC-30AD×2输液泵自动进样器：SIL-30AC柱温箱： CTO-30A检测器：LCMS-8045 色谱工作站： LabSolutions Ver. 5.97 1.2分析条件 液相条件： 色谱柱： Inertsil HILIC (150 mm × 2.1 mm l.D.， 3 um，岛津(上海)实验器材有限公司，P/N：5020-07765) 流动相：A相-0.1%甲酸、5mM甲酸铵水；B相-0.1%甲酸乙腈 流速：0.3mL/min 柱温：40℃ 进样体积：5uL 洗脱方式：梯弟洗脱，B相初始浓度为 40%，洗脱程序见表1。 表1 梯度洗脱时间程序 Time(min) Module Command Value 1.00 Pumps Pump B Conc. 40 2.00 Pumps Pump B Conc. 80 4.00 Pumps Pump B Conc. 80 4.10 Pumps Pump B Conc. 40 7.00 Controller Stop 质谱条件 离子化模式：ESI (-) 加热气流速：10.0 L/min接口温度：300℃ DL温度：250℃ 雾化气流速：3.0L/min干燥气流速：10.0L/min加热模块温度：400℃碰撞气：氩气 MRM参数：见表2 表2 MRM参数 名称 CAS 前体离子 产物离子 Q1 Pre Bias(V) CE(V) Q3 Pre Bias(V) 唾液酸 131-48-6 308.15 87.00* 23.0 15.0 30.0 170.05 15.0 14.0 17.0 注：*表示定量离子 1.3标准品溶液制备 唾液酸标准储备液：精密称取唾液酸标准品 100 mg， 加水20 mL溶解后，加乙腈定容至100 mL容量瓶中，制得1mg/mL唾液酸标准储备液。 唾液酸标准系列工作溶液：从上述储备液中移取适量，用流动相逐级稀释制成25 ng/mL、50 ng/mL、100ng/mL、250 ng/mL、500 ng/mL的标准系列工作溶液。 1.4样品前处理 取适量干燕窝于105℃烘干60 min，干燥器中冷却，用研钵研成细粉，混匀。准确称取0.1g粉碎均匀试样(精确至0.0001g)至25 mL 具塞刻度试管中，加入50%乙酸溶液10mL， 加塞，置于100℃水浴中水解10 min，取出试管冷却至室温。将水解液转移至100 mL容量瓶中，用流动相定容至刻度，混匀，取上清液，0.22 um微孔滤膜过滤，待测。 结果与讨论 2.1标准品溶液色谱图 图11唾液酸标准品溶液(100ng/mL) MRM色谱图 2.2线性范围和灵敏度考察 将1.3中制备的25、50、100、250、500 ng/mL标准系列工作溶液，取5uL进样，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，使用外标法拟合工作曲线。标准曲线见图2，相关系数R = 0.9992。各浓度点线性回归的准确度、信噪比、定量限如表3所示。曲线各标点准确度在 94.7-107.7%。25 ng/mL标准溶液的 S/N 为 29.79. 图2唾液酸工作曲线 表 3 唾液酸校准曲线准确度和定量限 口<>定量结果视图ID#1 4 卜 唾液酸 Data 数据文件名 面积 浓度 (pp 标准浓度 精确度% S/H 检测限 定量限 1 标液_25ppb_ 11，164 26.929 25 107.7 29.79 2.98303 9.03949 2 标液_50ppb_ 23，201 48.995 50 98.0 72.77 2.22199 6.73329 3 标液_100ppb 48，108 94.655 100 94.7 139.78 2.23465 6.77168 4 标液_250ppb 129，449 243.770 250 97.5 329.02 2.44492 7.40886 5 标液_500ppb 275，031 510.651 500 102.1 690.33 2.44107 7.39718 2.3重复性考察 100 ng/mL 浓度对照品溶液，连续进样6次，考察保留时间和峰面积的重复性，结果如下表4所示。保留时间和峰面积的相对标准偏差(RSD%) 分别为 0.061%和0.82%，方法精密度良好。 表4 100 ng/mL 唾液隹标准溶液连续6针重复性结果 编号 峰面积 保留时间 1 1.117 657，029 2 1.116 653，706 3 1.117 659，410 4 1.117 652，096 5 1.117 645，797 6 1.118 647，333 平均值 1.117 652，562 RSD% 0.061 0.82 2.4实际样品分析及重复性考察 样品信息：品种-燕碎；原产国-印度尼西亚；燕窝种类-屋燕。 将样品用研钵研成细粉后按照1.4前处理方法处理后将滤液稀释至适合浓度(样品浓度在线性关系范围内)上机，平行3份样品考察稳定性和 RSD， 具体结果如下：样品中唾液酸实际含量为117.17g/kg， RSD 为 1.37%。样品色谱图见图3，结果见表5，该方法稳定性及重现性良好。 图39实际样品谱图 表5 三平行样品及重复性计算结果((n=3) No. 燕窝中唾液酸含量( (g/kg) 115.37 2 118.45 3 117.69 平均值 117.17 CV% 1.37 结论 本文建立了岛津 LCMS-8045三重四级杆液质联用仪定量测定燕窝中唾液酸的方法。实验结果表明， 100 ng/mL标准溶液连续进样6次，峰面积相对标准偏差为0.82%，仪器精密度良好。在25-500 ng/mL浓度范围内，方法线性良好，线性相关系数为0.9992。曲线各标点准确度在 94.7-107.7%之间。样品中唾液酸实际含量为117.17 g/kg， RSD 为1.37%。该方法灵敏，准确，稳定性好，回收率高，抗假阳性能力强，适用于燕窝中的唾液酸的检测。 岛津应用云 建立了使用岛津LCMS-8045三重四级杆液质联用仪定量测定燕窝中唾液酸的方法。实验结果表明，100   ng/mL标准溶液连续进样6次，峰面积相对标准偏差为0.82%，仪器精密度良好。在0.5-500   ng/mL浓度范围内，方法线性良好，线性相关系数为0.9992。曲线各标点准确度在94.7-107.7%之间。样品中唾液酸实际含量为117.17   g/kg，RSD为1.37%。该方法灵敏，准确，稳定性好，回收率高，抗假阳性能力强，适用于燕窝中的唾液酸的检测。