重组PCV2 Cap蛋白中含量分析检测方案

采用 TSKgel G4000SWxL分离猪圆环病毒2型病毒样颗粒 猪圆环病毒2型(PCV2)病毒样颗粒(VLPs) (Porcine circovirus type 2 virus-like particles) 【基本信息】 猪圆环病毒2型 (Porcine circovirus type 2， PCV2)是一种单链环状 DNA 病毒，猪感染后能引起断奶仔猪多系统衰竭综合征，是影响世界养猪业的重要病毒性疾病之一。目前，疫苗免疫是预防 PCV2感染的有效手段。在亚单位疫苗中，病毒样颗粒疫苗具有与天然病毒类似的结构而更易被免疫系统所识别，并且能够以更为真实的构象被抗原提呈细胞吞噬、加工和提呈，具有非常好的应用前景。PCV2编码的 Cap 蛋白是构成其衣壳的唯一结构蛋白。目前，已有研究可将 PCV2 Cap 蛋白在大肠杆菌中进行了可溶性表达，并能够自组装为VLPs。胞内自组装 VLPs 可能受到宿主蛋白和 DNA 的污染，可能形成不稳定结构或聚集。这里采用 TSKgel G4000SWxL 色谱柱对大肠杆菌表达PCV2 Cap蛋白自组装的VLPs， 进行了高效尺寸排阻色谱(HPSEC) 的分离检测。 【样品制备】 重组 PCV2 Cap 蛋白的表达与纯化及自组装VLPs 参考方法去制备。 【分析条件】 色谱柱：TSKgel G4000SWxL(7.8 I.D.mmx30 cm， 8 um) 流动相：50 mM PB+0.1 mM NazSO4 (pH7.2) 流速：0.5mL/min 进样体积：：15pL 柱温：室温 检测器参数： UV @280 nm 样品： Time(min) 图1猪圆环病毒2型(PCV2)病毒样颗粒(VLPs)分离色谱图 【结果与讨论】 实验结果表明：采用 TSKgel G4000SWxL凝胶色谱柱可对重组 PCV2 Cap 蛋白自组装 VLPs 进行高效分离检测， VLPs 的再组装效率299%(见图1)。 ( 参考资料： ) ( 1. 王 彦伟，李鹏软，梁严予，关洋，逢文强，田克恭猪圆环病毒2型病毒样颗粒的高效组装技术研究.中国生物工程杂 志 ，2020，40(11)：35 - 42. ) 采用凝胶色谱柱TSKgel G4000SWXL对大肠杆菌表达PCV2 Cap蛋白自组装的VLPs进行了分离检测。实验结果表明，VLPs的再组装效率≥99%。