药物中甲基磺酸乙酯检测方案(气质联用仪)

GC-MS 法测定药物中的甲基磺酸乙酯 车金水余翀天 赛默飞世尔科技(中国)有限公司 1.简介 基因毒性是指可能对 DNA 产生损伤，从而可能引发肿瘤、癌症等疾病。近年来基因毒性杂质成为人们关注的焦点。如甲磺酸、苯甲磺酸等磺酸类物质与低级醇在合成反应中生成的烷基磺酸酯(如甲磺酸甲酯， 甲磺酸乙酯、苯磺酸甲酯、苯磺酸乙酯等)即可与 DNA产生烷基化反应2。因此控制药品中基因毒性杂质的残留水平非常重要。 美国食品药品监督管理局(FDA)、欧盟医药管理局(EMA)和人用药品注册技术规范国际协调会(ICH)均对基因毒性杂质发表了指导原则。EMA发布了关于基因毒性杂质的最大摄取量为1.5 ug/d3。且欧洲药典中采用衍生化法检测药物中甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯和甲磺酸异丙酯，该方法的检出限为0.1-5 ug/g4. 本方法采用 Thermo ScientificTM ISQ GC-MS 系统，直接液体进样的方法对药物中的甲基磺酸乙酯进行分析检测，能够达到5 ug/kg 的检出限。且方法更加简单，快速。 2.实验材料 2.1仪器与试剂 2.1.1仪器 Thermo ScientificTM ISQ Single Quadrupole GC-MS system， including： ThermoScientificTM TRACE 1310 GC， Thermo ScientificTM ISQ Single Quadrupole Mass；5；ThermoScientificTM Triplus RSH Autosampler； Thermo ScientificTM Xcalibur Data System。 2.1.2试剂 甲基磺酸乙酯标准品(99%)购自上海晶纯生化科技股份有限公司；甲醇 (CH3OH)HPLC Grade (Fisher Scientific P/N AC610090040)。 2.1.3标准溶液的制备 准确称取 10mg 甲基磺酸乙酯标准品于100ml容量瓶中，加甲醇至刻度配置成100 ug/mL的标准溶液储备液。 取适量标准溶液储备液至100mL容量瓶中，加甲醇定容，配置成10.0、50.0、100.0、200.0、 500.0和1000.0 ug/L 的标准工作曲线。 2.2样品前处理 样品：准确称取0.1g 左右药品粉末，用1mL甲醇溶解，静止10min， 取上层清液，待GC/MS 分析。 加标样品：准确称取0.1g左右药品粉末，加入适量的10 mg/L 标准储备溶液，用1mL甲醇溶解，静止10min，取上层清液，待GC/MS 分析。 2.3色谱条件 色谱条件：色谱柱： Thermo Scientific TG-WAXMS (30 mx0.25 mmx0.25 um) (P/N26088-1420)；柱温：50℃(2min)， 10℃/min 到220℃(3min)；不分流进样，不分流时间为1min； 进样口温度：220℃；载气：高纯氦(99.999%)，恒流模式，1mL/min。液体进 样模式，进样量：：1 pL。 质谱条件：传输线温度：220℃，离子源温度：250℃；选择离子模式扫描，扫描离子分别为 m/z 79(定量离子)， 97， 109。 3.结果与讨论 3.1标准品色谱图 图1标准溶液选择离子流图(500 pg/L) 3.2线性、检出限及 RSD 采用上述方法分别进样分析，考察在10.0-1000.0 ug/L 浓度范围内的线性。实验结果表明甲基磺酸乙酯在10.0-1000.0 ug/L线性关系良好，线性相关系数大于0.99(图2)。对同一样品连续进样7针，RSD 为3.17%，重复性良好。同时以三倍信噪比计算检出限，该方法的检出限为 5.0 ug/Kg. 图2甲基磺酸乙酯线性 3.6 实际样品测试及加标回收 采用该方法对3个利奈唑胺样品中的甲基磺酸乙酯进行测定，实验结果表明，三样品中甲基磺酸乙酯含量均低于检出限(图3)。同时，本实验也进行了加标回收实验(加标量为0.1mg/kg、0.5mg/kg、1.0 mg/kg)， 实验结果表明，加标实验的加标回收率分别为：79.3%、84.9%92.6%，符合分析检测的要求。 Time (min) 图3样品及样品加标选择离子流图(加标量1.0mg/Kg) 4.总结 采用 Thermo Scientific ISQ 单四极杆 GC-MS 系统对药品中的甲基磺酸乙酯进行检测，该方法操作简单，灵敏度高，方法重现性好。 ( 参考文献 ) ( [1]胡明臣，任 发 政，罗红霞等.遗传 毒 性试验方法的研究进展[].食品安全质量检测 学 报，2011，2(2)：75-82. ) ( [2]张园园 ， 李银峰， 王杰 晶等.药物中痕量磺 酸 酯类物质的检测技术研究进展.药物评价研究[J]，2012，35 (4)： 3 04-307. ) ( [3] European Medicines Agency， EMEA/CHMP/QWP/251344/2 0 06，Guideline on the limits of genotoxic impurities [S]. ) ( [4] Determination of methyl， ethyl an d isopropyl methanesulfonate[M] ， European Pharmeuropa， 2010，22(2)： 151-153. ) 简介 基因毒性是指可能对 DNA 产生损伤，从而可能引发肿瘤、癌症等疾病[1]。近年来基因 毒性杂质成为人们关注的焦点。如甲磺酸、苯甲磺酸等磺酸类物质与低级醇在合成反应中生 成的烷基磺酸酯（如甲磺酸甲酯，甲磺酸乙酯、苯磺酸甲酯、苯磺酸乙酯等）即可与 DNA 产生烷基化反应[2]。因此控制药品中基因毒性杂质的残留水平非常重要。 美国食品药品监督管理局（FDA）、欧盟医药管理局（EMA)和人用药品注册技术规范国 际协调会(ICH)均对基因毒性杂质发表了指导原则。EMA 发布了关于基因毒性杂质的zui大摄 取量为 1.5 µg/d[3]。且欧洲药典中采用衍生化法检测药物中甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯和甲磺 酸异丙酯，该方法的检出限为 0.1-5 µg/g[4]。 本方法采用 Thermo Scientific™ ISQ GC-MS 系统，直接液体进样的方法对药物中的甲 基磺酸乙酯进行分析检测，能够达到 5 µg/kg 的检出限。且方法更加简单，快速。 2. 实验材料 2.1 仪器与试剂 2.1.1 仪器 Thermo Scientific™ ISQ Single Quadrupole GC-MS system, including: Thermo Scientific™ TRACE 1310 GC，Thermo Scientific™ ISQ Single Quadrupole Mass；Thermo Scientific™ Triplus RSH Autosampler；Thermo Scientific™ Xcalibur Data System。 2.1.2 试剂 甲基磺酸乙酯标准品（99%）购自上海晶纯生化科技股份有限公司；甲醇 (CH3OH), HPLC Grade (Fisher Scientific P/N AC610090040)。 2.1.3 标准溶液的制备 准确称取10mg甲基磺酸乙酯标准品于100ml容量瓶中，加甲醇至刻度配置成100 µg/mL 的标准溶液储备液。 取适量标准溶液储备液至 100mL 容量瓶中，加甲醇定容，配置成 10.0、50.0、100.0、 200.0、 500.0 和 1000.0 µg/L 的标准工作曲线。