菊花中中绿原酸、木犀草苷、3，5-O-二咖啡酰奎宁酸的检测方案

SHIMADZU 菊花 SGLC-LC-006 摘要：本文建立了菊花中绿原酸、木犀草苷、3，5-O-二咖啡酰奎宁酸的 HPLC 测定方法。参照《中国药典》色谱柱条件并对其优化，采用色谱柱 Shim-pack VP-ODS (4.6x250 mm， 5 um )分析绿原酸、木犀草苷、3，5-0-二咖啡酰奎宁酸，结果表明，绿原酸、木犀草苷、3，5-0-二咖啡酰奎宁酸的理论塔板数分别为28561、32243、25943，绿原酸、木犀草苷、3，5-0-二咖啡酰奎宁酸与相邻杂质峰能达到基线分离，且稳定性良好，满足《中国药典》要求。此方法可为当归中阿魏酸的检测提供参考。 关键词：：菊花 Shim-pack VP-ODS HPLC 1.实验部分 1.1 实验仪器及耗材 Shimadzu LC-20AD 高效液相色谱仪； 色谱：柱Shim-pack VP-ODS (4.6x250 mm， 5 um； P/N： 228-34937-92)； SHIMSEN Disc 针式过滤器 (P/N： 380-00341)； LC/MS 认证样品瓶 LabTotal Vial (P/N： 227-34001-01)； WondaPipet 移液枪：WondaPipet PMII-100 (P/N： 8510-10004)、WondaPipet PMII-1000 (P/N： 8510-10006)。 1.2 分析条件 色谱柱： Shim-pack VP-ODS (4.6×250 mm， 5 um) 流动相：乙乙-0.1%磷酸水(梯度洗脱) 柱温：40℃ 检测波长：348nm 流速：1.0 mL/min 进样量：5pL 梯度洗脱程序 时间(min) 乙腈 0.1%磷酸水 0 10 11 16 50 16 84 1.3 对照品溶液的制备 取绿原酸对照品、木犀草苷对照品、3，5-0-双咖啡酰奎宁酸对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加70%甲醇制成每1mL 含绿原酸35 ug， 木犀草苷25 ug， 3，5-0-双咖啡酰奎宁酸 80 ug的混合溶液，即得。 1.4 供试品溶液的制备 取本品粉末(过一号筛)约0.25g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇25mL，密塞，称定重量，超声处理(功率300 W， 频率45 kHZ) 40分钟，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 2.结果及讨论 2.1 色谱图 按照上述色谱条件(1.2)进行采集，对照品溶液色谱图和样品色谱图如下： 对照品溶液： 供试品溶液： mAU 名称 t/min 峰面积 峰高 理论塔板数 拖尾因子 绿原酸 10.933 460833 49436 28905 1.074 木犀草苷 29.221 472187 18927 32082 1.060 3，5-0-二咖啡酰奎宁酸 40.208 2389418 61751 25894 1.040 标准曲线、重现性 绿原酸的重复性： 序号 对照品(5uL) 样品(5uL) t/min 峰面积 t/min 峰面积 1 11.060 253770 10.933 460833 2 10.987 253913 10.974 461725 3 10.954 252382 10.950 460564 平均值 11.000 253355 10.952 461040 RSD/% 0.49 0.33 0.18 0.13 木犀草苷的重复性： 序号 对照品(5uL) 样品(5uL) t/min 峰面积 t/min 峰面积 1 29.414 296820 29.221 472187 2 29.358 301649 29.334 479034 3 29.268 295968 29.273 473969 平均值 29.347 298146 29.276 475063 RSD/% 0.25 1.03 0.19 0.75 3.结论 ( 参考《中国药典》中色谱条件，并对其条件进行优化，最终建立了菊花中绿原酸、木犀草苷、3，5- O-二咖啡酰奎宁酸的 HPLC 测定方法。结果表明，采用色谱柱 Shim-pack VP-ODS (4.6x250 mm， 5 um)分析绿原酸、木犀草苷、3，5-0-二咖啡酰奎宁酸，其理论塔板数分别为28561、32243、25943，绿原酸、木犀草苷、3，5-O-二咖啡酰奎宁酸相相邻杂质峰能达到基线分离，且稳定性良好，满足《中国药典》要求。此方法可为当归中阿魏酸的检测提供参考。 ) 岛津(上海)实验器材有限公司Shimadzu (Shanghai) Global Laboratory Consumables Co.，Ltd. 1. 实验部分 1.1 实验仪器及耗材 Shimadzu LC-20AD 高效液相色谱仪； 色谱：柱 Shim-pack VP-ODS (4.6×250 mm，5 μm；P/N：228-34937-92)； SHIMSEN Disc 针式过滤器（P/N：380-00341）； LC/MS 认证样品瓶 LabTotal Vial（P/N：227-34001-01）； WondaPipet 移液枪：WondaPipet PMII-100（P/N：8510-10004）、 WondaPipet PMII-1000（P/N：8510-10006）。 1.2 分析条件 色谱柱：Shim-pack VP-ODS (4.6×250 mm，5 μm) 流动相：乙腈-0.1%磷酸水（梯度洗脱） 柱温：40 ℃ 检测波长：348 nm 流速：1.0 mL/min 进样量：5 μL    1.3 对照品溶液的制备 取绿原酸对照品、木犀草苷对照品、3，5-O-双咖啡酰奎宁酸对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加 70%甲醇制成每 l mL 含绿原酸 35 μg，木犀草苷 25 μg，3，5-O-双咖啡酰奎宁酸 80 μg 的混合溶液，即得。 1.4 供试品溶液的制备 取本品粉末（过一号筛）约 0.25 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入 70%甲醇 25 mL，密塞，称定重量，超声处理（功率 300 W，频率 45 kHZ）40 分钟，放冷，再称定重量，用 70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 2. 结果及讨论