利巴韦林中理化检测检测方案(毛细管电泳仪)

抗病毒药物中利巴韦林的检测高效毛细管电泳法 利巴韦林又名病毒毒，是广谱强效的抗病毒药物，属合成核苷类药，对许多 DNA 和RNA病毒有抑制作用。 美国食品药物管理局只许可用于配合长效干扰素治疗丙肝、人类呼吸道融合病毒，和某些出血热的治疗。利巴韦林1970年由ICN制药公司 Joseph T. Witkowski 合成。 美国食品药物管理局明确指出利巴韦林不适合用来治疗流感，并且严格明确适应症，但滥用利巴韦林来治疗各种病毒感染的情况在中国十分普遍。 马伊曾在2015年3月发过的一条微博，质疑国内滥用利巴韦林，受到许多网友的关注，大家对于利巴韦林的评价褒贬不一。 马伊15-3-30来自 iPhone 6 朋友的孩子最近得了手足口病，班上孩子也被传染，家长交流时发现几乎所有孩子都被开了利巴韦林 到目前为止，利巴韦林颗粒物并没有被禁止使用，还是能够在药房购买到的。 利巴韦林颗粒物的忌讳并不是很多，对治疗药物成份皮肤过敏的病人严禁应用，孕妇、本身免疫性肝炎病人严禁服药。利巴韦林颗粒物有一定的毒副作用，能够造成溶血性贫血，其他普遍的副作用有恶心、呕吐、疲惫、头痛等。该治疗药物还能够导致心肌损害，病人在吃药过程中假如出现心脏病恶变的状况，要马上断药。 利巴韦林(Ribavirin)，化学名为1-B-D-呋喃核糖基-1H-1，2，4-三氮唑-3-羧酰胺，分子式为 CgH12N4O，为白色或类白色结晶性粉末，无臭，在水中易溶，在乙醇中微溶，在乙醚或二氯甲烷中不溶，为抗非逆转录病毒药。 中国卫生行业标准《WS/T 686-2020 消毒剂与抗抑菌剂中抗病毒药物检测方法与评价要求》中给出了两种利巴韦林的检测方法：电渗流反转的毛细管电泳法和超高效液相色谱-串联质谱确证方法。相较于超高效液相色谱-串联质谱确证方法，电渗流反转的毛细管电泳法具有前处理简单、定量快速准确、精密度高等优势，是抗病毒药物中利巴韦林检测的理想手段。 1仪器与试剂 1.1仪器 高效毛细管电泳仪 HPCE512，涡旋混合器，分析天平，超声波清洗机。 1.2试剂 硼砂，硼酸，十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)，氢氧化钠。 2实验方法 2.1溶液配制 (1)缓冲液的制备 运行缓冲液配制：60mmol/L硼砂+100mmol/L硼酸+0.5mmol/L CTAB 分别别取0.309g硼酸、1.144g硼砂和0.009g CTAB置于同一离心管中，加水至40mL振摇溶解，再加水至50mL刻度，混匀备用。 样品提取液配制：将运行缓冲液稀释10倍即可。 (2)对照品溶液的制备 准确称取10mg利巴韦林对照品，置于10mL离心管中，用水稀释、定容至刻度，即利巴韦林的浓度为1000mg/L。将1000mg/L利巴韦林储备液稀释10倍制成100mg/L利巴韦林工作液。 标准系列的配制：用样品提取液稀释工作液，配制成利巴韦林浓度为1.5mg/L、5mg/L、10mg/L、20mg/L和 50mg/L的系列标准溶液。 2.2样品前处理 称取0.5g(精确至1mg)试样于 10 mL具塞带刻度离心管中，加入样品提取溶液至10mL 刻度，加入1至2颗颗璃珠，涡旋混匀至溶液呈均匀状态，超声10 min ， 备用。 2.3电泳条件 仪器：高效毛细管电泳仪 HPCE512：配备214nm 滤光片的紫外检测器； 毛细管总长度：61.1cm； 毛细管分离长度：48.8cm； 毛细管内径：50um； 检测波长：214nm； 毛细管温度：25℃； 进样盘温度：25℃； 分离电压：28kV(--+)； 进样压力及时间： 0.5psi， 20s； 分离时间：6min； 运行缓冲液：60mmol/L硼砂+100mmol/L硼酸+0.5mmol/L CTAB ； 样品提取液：将运行缓冲液稀释10倍即可； 新毛细管在使用前分别用纯甲醇冲洗 20min ，1mol/L NaOH冲洗 20min ，超纯水冲洗5min，运行缓冲液冲洗 5min。每次进样前依次用纯甲醇冲洗2min， 1mol/L NaOH 冲洗2min ， 超纯水冲洗 2min， 运行缓冲液冲洗2min ， 以保证迁移时间和峰面积的重现性。 3结果与讨论 3.1实验结果 (1)校准曲线及检出限 配制利巴韦林浓度为 1.5mg/L、5mg/L、10mg/L、20mg/L和 50mg/L的系列标准溶液， 214nm条件下进样，外标法定量，质量浓度与校正峰面积具有良好的线性关系。实验得到的线性方程为y=0.0017x+0.0008， R为 0.9996，检出限为 0.2mg/L。 (2)仪器精密度 为了验证仪器的稳定性，将利巴韦林浓度为 5mg/L的标准溶液进样7次，考察仪器精密度，结果见表1。 表1仪器精密度(n=7) 迁移时间 (min) 峰面积 校正峰面积 利巴韦林浓度为5mg/L的 标准溶液 3.055 0.02282 0.007470 3.050 0.02158 0.007074 3.046 0.02197 0.007212 3.054 0.02262 0.007407 3.051 0.02219 0.007272 3.060 0.02181 0.007128 3.055 0.02244 0.007345 RSD% 0.147 2.02 2.00 (3)方法精密度 为了验证该方法的可靠性，将某利巴韦林药物提取后连续进样7次，结果见表2。 表2方法精密度(n=7) 迁移时间 (min) 峰面积 校正峰面积 某利巴韦林药物提取物 3.071 0.148 0.04827 3.071 0.152 0.04958 3.071 0.150 0.04870 3.067 0.150 0.04879 3.063 0.142 0.04652 3.061 0.149 0.04871 3.056 0.152 0.04968 RSD% 0.200 2.17 2.16 (4)实际样品分析 选取2种利巴韦林药物样品，提取后稀释相应倍数上机分析，利巴韦林药物提取物的电泳图如图1所示。 GST 图1利巴韦林药物提取物的电泳图(下图为20mg/L利巴韦林标准溶液的电泳图，中图为利巴韦林颗粒提取物稀释100倍后的电泳图，上图为利巴韦林片提取物稀释1000倍后的电泳图) 3.2结论 使用高效毛细管电泳仪检测抗病毒药物中的利巴韦林，前处理简单，检出限达 0.2mg/L，精密度高，定量快速准确。与超高效液相色谱-串联质谱法相比，经济快速，可作为抗病毒药物中利巴韦林检测的理想手段。 ( 参考文献 ) ( [1] WS/T 686-2020消毒剂与抗抑菌剂中抗病毒药物检测方法与评价要求 ) -- -- 利巴韦林又名病毒唑，是广谱强效的抗病毒药物，属合成核苷类药，对许多DNA和RNA病毒有抑制作用。美国食品药物管理局只许可用于配合长效干扰素治疗丙肝、人类呼吸道融合病毒，和某些出血热的治疗。利巴韦林1970年由ICN制药公司Joseph T. Witkowski合成。美国食品药物管理局明确指出利巴韦林不适合用来治疗流感，并且严格明确适应症，但滥用利巴韦林来治疗各种病毒感染的情况在中国十分普遍 。马伊琍曾在2015年3月发过的一条微博，质疑国内滥用利巴韦林，受到许多网友的关注，大家对于利巴韦林的评价褒贬不一。 到目前为止，利巴韦林颗粒物并没有被禁止使用，还是能够在药房购买到的。利巴韦林颗粒物的忌讳并不是很多，对治疗药物成份皮肤过敏的病人严禁应用，孕妇、本身免疫性肝炎病人严禁服药。利巴韦林颗粒物有一定的毒副作用，能够造成溶血性贫血，其他普遍的副作用有恶心、呕吐、疲惫、头痛等。该治疗药物还能够导致心肌损害，病人在吃药过程中假如出现心脏病恶变的状况，要马上断药。  利巴韦林（Ribavirin），化学名为1-β-D-呋喃核糖基-1H-1,2,4-三氮唑-3-羧酰胺，分子式为C8H12N4O，为白色或类白色结晶性粉末，无臭，在水中易溶，在乙醇中微溶，在乙醚或二氯甲烷中不溶，为抗非逆转录病毒药。中国卫生行业标准《WS/T 686-2020消毒剂与抗抑菌剂中抗病毒药物检测方法与评价要求》中给出了两种利巴韦林的检测方法：电渗流反转的毛细管电泳法和超高效液相色谱-串联质谱确证方法。相较于超高效液相色谱-串联质谱确证方法，电渗流反转的毛细管电泳法具有前处理简单、定量快速准确、精密度高等优势，是抗病毒药物中利巴韦林检测的理想手段。