类病毒颗粒中分离度检测方案(液相色谱仪)

Agilent◎安捷伦科技(中国)有限公司，20202020年9月25日， 中国出版Trusted Answers5994-2848ZHCN 使用 Agilent Bio SEC 色谱柱分析类病毒颗粒 米健秋 安捷伦科技(中国)有限公司 以疫苗为代表的免疫疗法是一种重要的疾病预防治疗手段，疫苗的研发是现代医学的重要发展方向。类病毒颗粒(virus-like particles， VLP) 是由病毒单一或多个结构蛋白自组装而成的高度结构化的蛋白质颗粒，直径一般为 20-150 nm。一方面，类病毒颗粒保持了病毒抗原蛋白的天然构象，因而具备激发宿主免疫反应的功能。另一方面，类病毒颗粒不含有病毒基因组，因此不具备感染性。基于此特性， VLP多年来一直是良好的疫苗研发和应用平台12. 尺寸排阻色谱 (Size Exclusion Chromatography， SEC) 是分析高分子量聚集体及低分子量有关蛋白的有效手段。基于 VLP 较大的分子动态直径，应当使用具有较大孔径的 SEC色谱柱以获得较好分离度。目前市售的较大孔径的 SEC 柱选择相对有限，且分离效果一般。 Agilent Bio SEC-5 色谱柱提供多种不同的超大孔径选择便于方法的开发优化，其较高的柱效也能够提供理想的分离效果。 本应用采用不同孔径的 Agilent Bio SEC-5 色谱柱对一种 VLP 进行体积排阻色谱分析，并对结果进行了比较。 准确称量 0.71 g磷酸二氢钠、15.8g十二水合磷酸氢二钠和 23.4 g氯化钠，共同溶于1L去离子水中，搅拌均匀，作为流动动。 色谱分析采用 Agilent 1260 四元泵液相色谱系统，其配备可变波长检测器。所用色谱条件如表1所示，色谱分离结果见图1。 表1.液相色谱分析条件 色谱柱 Agilent Bio SEC-5， 7.8×300 mm，5 pm， 2000A， 部件号5190-2541Agilent Bio SEC-5， 7.8×300 mm， 5 pm，1000 A，部件号5190-2536 流量 0.6 mL/min 柱温 室温 进样体积 5pL 检测波长 220 nm 运行时间 30 min 图1.使用 Agilent BioSEC-5， 2000 A 与 Agilent Bio SEC-5， 1000A色谱柱分析同一种VLP的结果对比 由于 VLP 样品的浓度通常相对较低(一般在 mg/mL 量级以下)，因此实验选取220nm 作为检测波长，在相同进样量下能够获得比 280 nm 更高的信号响应，并在信号响应与基线噪音之间实现较好的平衡。 ( 1.F Rob.N. and P o lly.R.， Virus-like particles as immunogens， T rends i n Microbiology，2003， 11(9)：438-444 ) ( 2. Elizabeth.V.L.G. and Da v id A.A.， Vi r us-like particles： P a ssportto immune r e cognition， Method， 2006，40(1)： 60-65 ) 本研究对比了使用 Agilent Bio SEC-5， 2000A 色谱柱与 Agilent BioSEC-5， 1000 A 色谱柱的结果(见图1)。对于该 VLP样品，使用Agilent Bio SEC-5， 2000A色谱柱获得了更出色的分离度。其原因可能在于，该 VLP 在溶中中的动态直径相对较大，选择孔径更大的 SEC 色谱柱有利于其分离。 www.agilent.com 安捷伦对本资料可能存在的错误或由于提供、展示或使用本资料所造成的间接损失不承担任何责任。 ( 本文中的信息、说明和技术指标如有变更，恕不另行通知。 ) 尺寸排阻色谱 (Size Exclusion Chromatography, SEC) 是分析高分子量聚集体及低分子量有关蛋白的有效手段。基于 VLP 较大的分子动态直径，应当使用具有较大孔径的 SEC 色谱柱以获得较好分离度。目前市售的较大孔径的 SEC 柱选择相对有限，且分离效果一般。Agilent Bio SEC-5 色谱柱提供多种不同的超大孔径选择便于方法的开发优化，其较高的柱效也能够提供理想的分离效果。本应用采用不同孔径的 Agilent Bio SEC-5 色谱柱对一种 VLP 进行体积排阻色谱分析，并对结果进行了比较。