饮料，面包等食品中乙基麦芽酚检测方案(液相色谱仪)

SSL-CA20-152Excellence in Science Excellence in ScienceLC-207 岛津企业管理(中国)有限公司-分析中心Shimadzu (China) Co.，LTD.-Analytical Applications CenterTel： 86(21)34193996Email： sshzyan@shimadzu.com.cnhttp：//www.shimadzu.com.cn Nexera LC-40 测定食品中乙基麦芽酚 LC-207 摘要：本文采用 Nexera LC-40 高效液相色谱仪，建立了食品中乙基麦芽酚的测定方法。实验结果表明，0.05ug/mL标准溶液的 S/N 为24.03 (ASTM 计算方式)。0.5ug/mL 浓度对照品溶液，连续进样6次，保留时间和峰面积的相对相准偏差 (RSD%)分别为 0.26%和2.59%，方法精密度良好。在0.05-100 ug/mL浓度范围内，方法线性良好，线性判定系数R²为 0.9998。曲线各标点准确度在90.2-108.0%之间。饮料基质中1.25 mg/kg加标浓度，平行三份样品的平均回收率为94.9%， RSD 为5.15%；面包基质中 5 mg/kg 加标浓度，平行三份样品的平均回收率为 85.3%， RSD 为 2.31%。该方法简单，灵敏，分离度高，稳定性好，回收率高，满足 GB5009.250-2016的要求，适用于食品中的乙基麦芽酚的检测。 关键词： Nexera LC-40高效液相色谱仪食品乙基麦芽酚 乙基麦芽酚是一种具有芬芳香气的食品用合成香料，属于食品添加剂。它能使食品中原有香味得到调和、改良和提升，因此经常被作为香味改良剂。同时，乙基麦芽酚还具有延长食品储存期的功效。但是该物质过量食用对人肝脏有影响，引发骨骼和关节提前脆变癌变等疾病，还可能导致头痛、恶心、呕吐、呼吸困难，甚至能够损伤肝、肾，对人体有较大的危害。 GB 2760-2014(食品安全国家标准食品添加剂使用标准)明确规定，食品用香精，香料在各类食品中按 照生产需要适量使用，植物油脂，水果，蔬菜，大米，生鲜肉等食品中不能添加乙基麦芽酚等香料。其他食品是否可以加香应按相关食品产品标准规定执行。 目前乙基麦芽酚的检测方法主要有高效液相色谱法，气相色谱法，液相色谱质谱联用法等，本文参考GB 5009.250-2016(食品安全国家标准食品中乙基麦芽酚的测定)，采用岛津 Nexera LC-40 液相色谱仪，建立了食品中乙基麦芽酚的分析方法，对饮料和面包等食品进行了分析，供相关检测人员参考。 实验部分 1.1仪器 本实验采用 Nexera LC-40 XR液相色谱仪，包括 CBM-40A Lite 系统控制器， DGU-405脱气机， LC-40BXR输液泵， SIL-40C XR自动进样器， CTO-40S柱温箱，SPD-M40检测器， LabSolutions Ver. 5.97色谱工作站。 图1 岛津 Nexera LC-40 XR 高效液相色谱仪 1.2分析条件 色谱柱： Inertsil ODS-SP (250 mm L. ×4.6 mml.D.， 5um， SGLC， P/N：5020-02746) 流动相：A，水(每升含3.9g磷酸二氢钠，经磷酸调节 pH至4.0±0.1)；B，甲醇 流速：1mL/min 柱温：30℃ 检测波长：276nm 进样体本：10uL 洗脱方式：梯度洗脱，B相起始浓度为25%，时间程序如表1所示。 表1 梯度洗脱时间程序 Time(min) Module Command Value 16.00 Pumps Pump B Conc. 25 16.10 Pumps Pump B Conc. 100 20.00 Pumps Pump B Conc. 100 20.10 Pumps Pump B Conc. 25 25.00 Controller Stop 1.3.准准品溶液制备 乙基麦芽酚标准储备液：精密称取乙基麦芽酚标准品100 mg，用甲醇定容至100mL容量瓶中，制得1 mg/mL乙基麦芽酚标准储备液。 乙基麦芽酚标准系列工作溶液：从上述储备液中移取适量，用甲醇逐级稀释制成 0.05 ug/mL、0.1ug/mL、0.5 ug/mL、2ug/mL、5 ug/mL、25 ug/mL、100 ug/mL 的标准系列工作溶液。 1.4样品前处理 饮料：准确称取10g试样(精确至0.01 g)(碳酸饮料需先超声 2~3 min 以除去二氧化碳后取样)于25mL具塞刻度试管中，用乙腈定容至刻度，混匀，超声10 min， 10000r/min 离心10 min， 取上清液经0.22 um 微孔滤膜过滤，滤液进液相色谱仪分析。 面包，糕点：准确称取2g粉碎均匀试样(精确至0.001g)至25mL具塞刻度试管中，加入5mL水，加塞，涡旋1min， 使其分散均匀后，再加15mL甲醇，加塞，摇匀，超声20 min， 用甲醇定容至刻度，10000r/min 离心10 min， 取上清液， 0.22 um 微孔滤膜过滤，滤液进液相色谱仪分析。 结果与讨论 2.1标准溶液色谱图 图222乙基麦芽酚标准品溶液色谱图(2ug/mL) 2.2线性范围和灵敏度考察 将1.3中制备的0.05、0.1、0.5、2、5、25、100 ug/mL标准系列工作溶液，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，使用外标法拟合工作曲线。标准曲线见图3，线性判定系数R2=0.9998。标准曲线各浓度点的准确度、信噪比、定量限如表2所示。曲线各标点准确度在90.2-108.0%之间。0.05 ug/mL标准溶液的 S/N 为24.033(ASTM计算方式)。 图3乙基麦芽酚工作曲线 表2乙基麦芽酚校准曲线准确度和定量限 口◇定定结果视图ID#1 4 卜 乙基麦芽酚 Data# 数据文件名 保留时间 面积 浓度(pg/mL 标准浓度 精确度% S/N 定量限 1 级别1.lcd 13.301 2.711 0.049 0.05 97.1 24.03 0.02 2 级别2.lcd 13.275 5，504 0.106 0.1 106.1 29.65 0.04 3 级别3.lcd 13.246 23，898 0.485 0.5 97.0 153.31 0.03 4 级别4.lcd 13.240 99，645 2.046 2 102.3 676.40 0.03 5 级别5.lcd 13.217 262，500 5.401 5 108.0 1，754.80 0.03 6 级别6.lcd 13.181 1，095，172 22.555 25 90.2 8，441.36 0.03 7 级别7.lcd 13.149 4.817.922 99.248 100 99.2 39，806.87 0.02 2.3精密度实验 0.5ug/mL浓度对照品溶液，连续进样6次，考察保留时间和峰面积的重复性，结果如下表3所示。保留时间和峰面积的相对标准偏差(RSD%)分别为 0.26%和2.59%。 图4 对照品溶液6针重复性色谱图 表3 0.5 ug/mL 乙基麦芽酚标准溶液连续6针重复性结果 编号 峰面积 保留时间 22836 13.200 2 21882 13.264 22058 13.268 4 21903 13.272 21493 13.285 6 21169 13.301 平均值 21890 13.265 RSD% 2.59 0.26 2.4加标回收率及重复性考察 分别将饮料空白样品和面包空白样品进行1.25， 5 mg/kg浓度加标，按照1.4前处理方法处理后上机，平行3份样品考察回收率和RSD， 具体结果如下：饮料基质中 1.25 mg/kg 加标浓度的平均回收率为 94.9%， RSD为5.15%；面包基质中5 mg/kg 加标浓度的平均回收率为85.3%， RSD 为2.31%。该方法回收率高，重现性好。 图5 饮料空白样品加标溶液色谱图 图6面包空白样品加标溶液色谱图 表4 三浓度水平加标回收率及重复性计算结果(n=3 NO 饮料中1.25mg/kg 面包中5mg/kg 加标回收率区 (%) 加标回收率(%) 93.8 84.0 2 100.2 84.4 3 90.6 87.6 平均值 94.9 85.3 CV% 5.15 2.31 结论 本文采用岛津Nexera LC-40 高效液相色谱仪，建立了食品中乙基麦芽酚的测定方法。实验结果表明，0.05 ug/mL标准溶液的 S/N 为24.03(ASTM 计算方式)。0.5 ug/mL浓度对照品溶液，连续进样6次，保留时间和峰面积的相对标准偏差(RSD%)分别为0.26%和2.59%，方法精密度良好。在0.05-100 ug/mL浓度范围内，方法线性良好，线性判定系数R2为0.9998.曲线各标点准确度在90.2-108.0%。饮料基质中1.25mg/kg加标浓度，平行三份样品的平均回收率为 94.9%， RSD 为5.15%；面包基质中5 mg/kg加标浓度，平行三份样品的平均回收率为 85.3%， RSD 为 2.31%。该方法灵敏，准确，稳定性好，回收率高，适用于食品中的乙基麦芽酚的检测。 岛津应用云 本文采用Nexera LC-40高效液相色谱仪，开发了食品中乙基麦芽酚的测定方法。实验结果表明，0.05 μg/mL标准溶液的S/N为24.03（ASTM计算方式）。0.5 μg/mL浓度对照品溶液，连续进样6次，保留时间和峰面积的相对标准偏差(RSD%)分别为0.26%和2.59%，方法精密度良好。在0.05-100 μg/mL浓度范围内，方法线性良好，线性相关系数R2为0.9998。曲线各标点准确度在90.2-108.0%。饮料基质中1.25 mg/kg加标浓度，平行三份样品的平均回收率为94.9%，RSD为5.15%；面包基质中6.25 mg/kg加标浓度，平行三份样品的平均回收率为85.3%，RSD为2.31%。该方法简单，灵敏，分离度高，稳定性好，回收率高，满足GB 5009.250-2016的要求，适用于食品中的乙基麦芽酚的检测