关黄柏中盐酸小檗碱及盐酸巴马汀检测方案(液相色谱仪)

文档编号： LC-K2025-01-200603 关黄柏中盐酸小檗碱及盐酸巴马汀的测定高效液相色谱法 一、摘要 本文使用悟空K2025 高效液相色谱仪对关黄柏中盐酸小檗碱及盐酸巴马汀进行测定。对照品及供试品连续进样7针的峰面积的重复性完全满足2020年版《中国药典》的要求。 二、背景 关黄柏清热燥湿，泻火除蒸，解毒疗疮。收录于2020年版《中国药典》中，用于阴虚火旺，盗汗骨蒸的功效。其中含有的盐酸小檗碱及盐酸巴马汀是关黄柏主要的活性成分，在2020年版《中国药典》规定，可利用高效液相色谱法测定制关黄柏中盐酸小檗碱及盐酸巴马汀的含量以控制药物质量。 三、实验过程 1范围 本文根据盐酸小檗碱及盐酸巴马汀的性质，对关黄柏中盐酸小檗碱及盐酸巴马汀进行测定，并对测定方法进行方法学验证，以确保测试方法的重现性及重复性。 2原理 2，3，5，4'-四羟基二苯乙烯-2-O-B-D-葡萄糖苷在 265nm 处有紫外吸收，使用高效液相色谱法进行检测，外标法定量。 3试剂与材料 3.1水：符合GB/T6682 的一级水； 3.2乙腈：色谱纯； 3.3 0.22um微孔尼龙滤膜； 3.4磷酸二氢钠：优级纯 3.5磷酸：色谱纯 4仪器与设备 4.1高效液相色谱仪： K2025P2二元高压输液泵、K2025 AS 自动进样器、K2025 CO柱温箱、K2025 UVD 紫外-可见光检测器； 4.2分析天平：精确精0.0001g； 5测定步骤 5.1 对照品溶液的制备 分别称取盐酸小檗碱及盐酸巴马汀各 5mg 用60%乙醇溶液定容至100mL. 5.2样品前处理 取本品粉末约 0.2g， 精密称定，置50ml量瓶中，加入60%乙醇 40ml，超声处理(功率250W， 频率40kHz) 45分钟，放冷，加60%乙醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 5.3测定 5.3.1色谱条件： a)色谱柱： C184.6×250mm， 5um或者相当的色谱柱； b)流动相：A：乙腈；B：0.1%磷酸水溶液(加入磷酸二氢钠使其达到 0.02moI/L 的浓度) c)柱温：35℃； d)进样量：10pL； e)流速：：11mL/min： f)波长：345nm； g)梯度洗脱程序见表 1： 表1梯度洗脱程序 时间/min A%(乙腈) B%(0.1%磷酸溶液(加入磷酸二氢钠使其达到0.02moI/L 的浓度)) 0 25 75 20 25 75 40 65 35 45 90 10 50 90 10 50.1 25 75 65 25 75 6色谱图及重复性结果 6.1按照上述色谱条件(5.3.1)进行采集，对照品溶液色谱图和样品色谱图如下： (1)对照品溶液重复性 图1对照品溶液进样7针的重复性 表2对照品溶液进样7针重复性数据统计 盐酸小檗碱 1 2 3 4 5 6 7均值 RSD% 最大值 17.672 最小值 极差 17.602 17.672 17.652 17.648 17.652 17.648 17.648 17.646 0021197484 盐酸巴马汀 19.597 19.675 19.648 19.647 19.655 19.647 19.647 19645 0.023540239 0.120 0.120 19.675 17602 0.070 0.078 盐酸小檗碱 盐酸巴马汀 2030.941 2028.295 1898.746 2028.68 2026.704 2030.945 2035.445 2029751 0.148 0.2671 2035.445 1907.293 2026704 8.741 1895.346 1890715 16.578 1890.715 1900.062 1907.293 5.066776077 (2)1供试品溶液重复性 图2供试品溶液进样7针的重复性 表3供试品溶液进样7针重复性数据统计 2 4 5 6 7均值 SD 最大值 最小值 保留时间 盐酸小檗碱 17.485 17.442 17.438 17.417 17.462 17.448 17.408 17.443 17.485 17.408 0.077 盐酸巴马汀 19.412 19.357 19.347 19.328 19.388 19.365 19.318 19.359 0.032851759 0.170 19.412 19318 0.094 峰面积 盐酸小檗碱 860.168 860.827 861.465 864.149 860.462 861872 860.29 861319 1396196023 0.162 8641493 860.168 3.981 盐酸巴马汀 1319.06 1320.566 1321011 1322.167 1320.686 1322.397 0.088 3.337 7.结论 分离度、理论塔板数方面均可满足《中国药典2020年版》的要求，保留时间以及峰面积的RSD(n=7)均小于0.3%，满足《中国药典2020年版》小于2.0%的要求，因此，使用wooking K2025 的高效液相色谱仪测定关黄柏中盐酸小檗碱及盐酸巴马汀有良好的重复性。 一、摘要本文使用悟空K2025高效液相色谱仪对关黄柏中盐酸小檗碱及盐酸巴马汀进行测定。对照品及供试品连续进样7针的峰面积的重复性完全满足2020年版《中国药典》的要求。二、背景关黄柏清热燥湿，泻火除蒸，解毒疗疮。收录于2020年版《中国药典》中，用于阴虚火旺，盗汗骨蒸的功效。其中含有的盐酸小檗碱及盐酸巴马汀是关黄柏主要的活性成分，在2020年版《中国药典》规定，可利用高效液相色谱法测定制关黄柏中盐酸小檗碱及盐酸巴马汀的含量以控制药物质量。