中药材中30 种禁用农药检测方案(液相色谱仪)

采用 Agilent Ultivo 三重四极杆液质联用系统对中药材中30种禁用农药进行检测 王莎，安娟，李建中 安捷伦科技(中国)有限公司 本文采用 Agilent Ultivo 三重四关杆液质联用系统建立了药材及饮片中的禁用农药多残留分析方法。该方法针对不同中药材基质，采用以 QuEChERS 为主的样品前处理方案，符合中国药典2020版对中药残留农药提取和净化的要求；同时以固相萃取法作为对复杂中药基质净化的补充。分离方法基于 Agilent 1290 Infinity HPLC 和 InfinityLab Poroshell 120EC-C18液相色谱柱。所用检测系统为安捷伦独有的配备 Cyclone lon Guide 气旋离子导轨及 Vortex Collision Cell 涡流碰撞室的小型化 Ultivo 三重四极杆液质联用系统，该系统还配备高效抗污染的喷射流 (AJS) 离子源，在正离子模式下完成对30种农药的分离和检测。该方法在不同农药浓度范围内具有良好的线性，相关系数R'≥0.9990，定量限均满足《0212药材和药片检定通则》的要求。采用 Agilent Bond Elut QuEChERS中国药典中药中农残专用净化包，可有效净化样品，消除基质干扰，使不同中药材基质中的分析物回收率在 50%-130%之间。证明安捷伦液质联用系统在满足药典检测要求的基础上，能够实现对不同药材中农药残留的高灵敏度、高通量检测。 中药材中的主要常见农药残留包括有机氯类、有机磷类、拟除虫菊酯类、氨基甲酸酯类等。这些农药污染主要源于种植过程中的滥用农药，其次来源于中药材生长的土壤环境以及采收、储藏过程中受到的农药二次污染2。农药残留与中药材的质量安全密切相关。科学种植中药材、合理有效使用农药，并将农药残留风险降到最低水平，是我国中药材产业健康发展的重要保证3。 2019年8月，国家药典委员会拟修订《中国药典》2015年版四部‘“0212药材和饮片检定通则”，对检定对象及限量指标进行了明确规定，并在第五法(“2341农药残留量测定法”中公示新增了“第五法药材及饮片(植物类)中禁用农药多残留测定法)中给出禁用农药的具体测定方法。其中第五法要求以 LC-MS/MS和 GC-MS/MS 为主要检测手段。检测的农药有33种，共计55种化合物，并规定所有禁用农药都不得检出(测定含量低于定量限0.01-0.1 mg/kg)。30种化合物通过 LC-MS/MS 方法进行检测，35种化合物通过 GC-MS/MS 方法进行检测，其中11种化合物同时适用 LC-MS/MS 和 GC-MS/MS方法。 安捷伦 LC-MS/MS 技术平台具有高选择性、高灵敏度、高通量和高效率等特点，适用于同时分析基质复杂、类型多样的中药材中的多种农药残留。本应用简报展示了一种对中药材中30种农药进行分离检测的 LC-MS/MS 方法，该方法将低扩散、低残留的 Agilent 1290 Infinity HPLC 与 Agilent Ultivo 三重四极杆液质联用系统结合使用。最优化的 LC-MS/MS 方法同时适用于 AgilentUltivo、6470、6495等不同型号的三重四极杆质谱仪器，方法转化无缝对接。 试剂和样品 乙腈为分析纯，购自德国默克 (Merck)；甲酸和甲酸铵为分析纯，购自美国 Sigma-Aldrich 公司；所用实验用水为 MilliporeMilli-Q超纯水系统现制备的高纯去离子水；30种农药混合标准品溶液(药典2341 农残测定 LC-MS) 由天津阿尔塔科技公司提供(部件号1ST29486)，其中各化合物的浓度如表2所示。测定的7种中药材白芍、麦冬、板蓝根、黄芩、何首乌、佛手、厚朴等均来源于正规中药材批发市场。 仪器和设备 液相部分为 Agilent 1290 Infinity 液相色谱系统，该系统主要包括以下组件： ( - Agilent 1290 Infinity 二 元 泵(部件号： G 4220A) ) - Agilent 1290 Infinity 标准自动进样器(部件号：G4226A) ( - Agilent 1290 Infinity 柱 温 箱(部件号： G 1316C) ) ( - 质 谱部分为 Agilent Ul t ivo 三重四极杆液质联用系统 ， 其配备喷 射流 (AJS)离子源 ) ( - 采 用 Agilent MassHunter B.10 工作站软件进行数据采集、 确 证和定量分析 ) 标准品配制 取混合标准品溶液(其中30种农药化合物的浓度各不相同，将其稀释1000倍，即达到药典规定的定量限)，用含30%水的乙腈溶液夜级稀释，得到浓度分别为0.1、0.2、0.5、1、5、25、50 ng/mL 的标样(以甲胺磷为例)。其它农药以相同的比例逐级稀释，现配现用。 样品前处理 样品前处理方法以 Agilent Bond Elut QuEChERS (部件号5982-5755CH 和5610-2048)为主4，操作流程如图1所示。对于复杂中药基质的净化，采用固相萃取法作为补充，其中采用 AgilentBond Elut Plexa (部件号12109206)和 Bond Elut Carbon/NH2(部件号12252202)固相萃取柱。 称取试品粉末(过三号筛)3 g于50mL离心管中 加入1%冰酸水溶液15mL 涡旋震荡1 min， 放置 30 min 加入15mL乙腈和陶瓷均质子(部件号：5982-9313) 涡旋震震5 min 加入 Bond Elut QuEchERS AOAO 萃取盐包(部件号：5982-5755CH)涡旋震荡3 min， 后冰浴冷却 10 min 4℃ 低温 5000 r/min 离心5min 耳9mL上清液， 加入 Bond Elut 中国药典中药中农残专用15mL净化管中 (部件号：5610-2048)，涡旋震荡 5 min 4C 低温 5000 r/min 离心 5 min 准确吸及 5mL 上清液于 10mL式管中，40℃水浴中氮气吹至约0.4 mL 加乙腈稀释至1mL涡旋混匀，过安捷伦0.2 um Captiva PTFE 滤膜 待LC/MS-MS分析(加入0.3mL水) 液相色谱条件 质谱条件 离子源： AJS 源 离子模式： 正离子模式 干燥气温度： 250°C 干燥气流量： 6L/min 鞘气温度： 350°C 鞘气流量： 11L/min 雾化器压力： 45 psi 毛细管电压： 4000V 喷嘴电压： 0V MS1 和MS2分辨率：单位 监测模式： 动态多反应监测(dMRM) MRM 参数： 如表1所示，涵盖2015版药典第五法 中所要求离子；并添加部分高强度离子， 用“**”标注，作为定性参考依据。 后运行时间： 3min 表1.30种农药的 MRM离子列表 结果与讨论 如图2所示，采用上文所述的色谱和质谱条件，在10 min 内即可完成对购买的标准品通过稀释后配制的30种农药混合标准品溶液进行色谱分离，且各化合物之间的分离效果及色谱峰形均满足药典分析要求，同时展现了薄壳填料型 C18色谱谱优越的分离性能。 响应 vs. 采集时间 (min) 图2.30种农药的标准提取离子流图 不同农药在相应的不同浓度范围内的线性关系良好，相关系数R²≥0.9990，定量限满足且低于《0212药材和药片检定通则》要求，结果详见表2。 本方法同时考察了30种农药在七种中药材基质中的灵敏度和回收率，回收率以定量限对应应度作为标准添加，结果列于表3中。其中白芍、麦冬、板蓝根、黄芩、何首乌等属于根及根茎类，佛手属于果实种子类，厚朴属于树皮类。所选择的七种药材在中药及中药处方中使用率较高，代表不同的用药部分，同时涵盖多种基质，例如淀粉、纤维、色素、糖和挥发油等。从分析结果来看，各种药材中目标化合物的回收率基本满足药典规定要求，在50%-130%之间。 表2.仪器方法检测限、定量限及线性范围 表3.七种中药材基质在定量限对应浓度下的加标回收率考察结果 本方法采用 Agilent 1290 Infinity UHPLC 结合 Ultivo 三重四极杆液质联用系统建立了对应于《中国药典》规定的农药残留 LC-MS/MS分析方法。该方法灵敏度高、专属性强，能够结合 Agilent BondElut QuEChERS 快速前处理方法对不同中药材基质中的残留农药进行准确的定量分析，结果满足2020版药典2341第五法的要求。 ( 参考文献 ) ( 1. 中国药典.四部.0212药材和饮片检定通则，“2341农药残留 量 测定法”中新增“第五法药材及饮片(植物类)中禁用农 药多残留测定法”，2020 ) ( 2. 李慧君，张文生，吴洁珊等.中药材农药残留研究现状.中国中药 杂志，2019，44(1)：48-52 ) ( 3. 杨婉珍，康传志，纪瑞锋等.中药材残留农药情况分析及其标准 研制的思考.中国中药杂志，2017，42(12)：2284 ) ( 4 . 李家春，伍静玲，秦建平等.基于QuEChERS 法-超高效液相色谱-串联质谱法的5种中药材中35种有机磷农药残留量的快速 分析.药物分析杂质，2016(1)：122 ) 查找当地的安捷伦客户中心： www.agilent.com/chem/contactus-cn 免费专线： 800-820-3278，400-820-3278(手机用户) 联系我们： LSCA-China_800@agilent.com 在线询价： www.agilent.com/chem/erfq-cn www.agilent.com 安捷伦对本资料可能存在的错误或由于提供、展示或使用本资料所造成的间接损失不承担任何责任。 ( 本文中的信息、说明和技术指标如有变更，恕不另行通知。 ) 5994-2262ZHCN 本文采用 Agilent Ultivo 三重四极杆液质联用系统建立了药材及饮片中的禁用农药多残留分析方法。该方法针对不同中药材基质，采用以 QuEChERS 为主的样品前处理方案，符合中国药典 2020 版对中药残留农药提取和净化的要求；同时以固相萃取法作为对复杂中药基质净化的补充。分离方法基于 Agilent 1290 Infinity HPLC 和 InfinityLab Poroshell 120EC-C18 液相色谱柱。所用检测系统为安捷伦独有的配备 Cyclone Ion Guide 气旋离子导轨及 Vortex Collision Cell 涡流碰撞室的小型化 Ultivo 三重四极杆液质联用系统，该系统还配备高效抗污染的喷射流 (AJS) 离子源，在正离子模式下完成对 30 种农药的分离和检测。该方法在不同农药浓度范围内具有良好的线性，相关系数 R2 ≥ 0.9990，定量限均满足《0212 药材和药片检定通则》的要求。采用 Agilent Bond Elut QuEChERS 中国药典中药中农残专用净化包，可有效净化样品，消除基质干扰，使不同中药材基质中的分析物回收率在 50%–130% 之间。证明安捷伦液质联用系统在满足药典检测要求的基础上，能够实现对不同药材中农药残留的高灵敏度、高通量检测。