当归中33种禁用农药及其单体残留量检测方案(均质器)

自动化样品前处理解决方案-RK-2020-C002 当归中33种禁用农药及其单体残留量的测定解决方案 1.介绍 当归属于根茎类药材，是最常用的中药之一。使用乙腈对当归试样进行均质提取，经盐析、离心后，将上清液浓缩、定容，即可对当归中的农药残留进行测定。本方法参考2020版《中国药典》2341通则农药残留量测定法新增第五法《药材及饮片(植物类)中禁用农药多残留测定法》公示稿中的直接提取法，采用睿科 AH-30 均质器进行提取，提取液用 MPE 高通量真空平行浓缩仪进行浓缩。在20 ug/kg 的加标水平下 LCMSMS 法中30种化合物的回收率在 81.3-115.7%之间；在 40 ug/kg 的加标水平下 GCMSMS 法中33种化合物的回收率在82.5-108.2%之间，满足禁用农药的检测要求。该方法操作方便、提取和浓缩效率高、回收率好，可作为当归中多种农残前处理和分析检测的有效解决方案。 关键字：：中国药典；；高效液相色谱-串联质谱；气相色谱-串联质谱；农药残留 Raykol AH-30 全自动均质器 Raykol MPE-16 高通量真空平行浓缩仪 Agilent 1290+6470 高效液相色谱/质谱联用仪 Agilent 7890B+7000D 气相色谱/质谱联用仪 2.2试剂 3.样品前处理 准确称取5g试样(精确至0.01 g) 于100mL离心管中，加入1g氯化钠后立即摇散，加入50mL乙腈，用Raykol AH-30 全自动均质器在12000转/分钟的搅拌速度下均质2min，转速4000 r/min 下离心 5 min。将上清液倒入浓缩杯中，残渣再加入50 mL乙腈，继续均质1 min， 离心5 min， 合并两次提取液，在Raykol MPE-16高通量真空平行浓缩仪中浓缩至3~5mL，放冷的样液转移至10mL容量瓶中，用乙腈多次润洗浓缩杯并转移至容量瓶中， 乙腈： HPLC级； GCMSMS 法33种农药混合标准储备液：40ng/mL； LCMSMS法30种农药混合标准储备液：：20ug/mL； GCMSMS 法内标使用液：磷酸三苯酯 0.1 ng/mL 最终用乙腈定容至刻度。 精确移取1mL上述定容液，精密加入0.3 mL水后过0.22 um滤膜，，上高效液相色谱/串联质谱仪测定； 精确角取 1mL上述定容液，精密加入0.3 mL磷酸三苯酯内标溶液，过0.222um滤膜后上气相色谱/串联质谱仪测定。 AH-30全自动均质器和MPE-16真空平行浓缩仪的参数设置如下： AH-30 全自动均质器参数设置 4.检测条件 4.1气相色谱质谱联用条件 采用 SCAN 全扫描模式进行定性分析， SIM 选择离子模式进行定量分析。 GC-MS 检测条件：进样口温度280℃，不分流进样，隔垫吹扫流量为 3mL/min， 进样量1.0pL；载气为高纯 He气，恒流模式，流速为 1.0mL/min；电子轰击电离源(EI)，离子源温度280℃，传输 线温度2280℃。色谱柱为iAgilent CP9151VF-1701MS (30m x 250um x 0.25um)。 GC 程序升温程序：初始温度40℃，保持1min；以40℃/min 速度升温至120℃；以5C/min升温至240℃，以12℃/min升温至300℃，保持4min。 表-1各农药的保留时间、监测离子对及碰撞电压 编号 名称 保留时间(min) 母离子(m/z) 子离子(m/z) CE(V) 1 灭线磷 15.99 199.7 157.8 5.0 199.7 114.0 5.0 157.8 96.7 20.0 157.8 113.8 15.0 2 杀虫脒 16.51 152.0 117.0 15.0 196.0 181.0 5.0 260.0 75.0 5.0 3 甲拌磷 17.01 230.8 175.0 10.0 230.8 128.6 25.0 4 a -BHC 17.64 181.0 145.0 15.0 Y-BHC 19.29 218.7 182.9 5.0 B-BHC 22.34 218.9 147.0 10.0 8-BHC 23.21 218.9 111.0 10.0 5 氟虫腈 29.29 367.0 213.0 35 367.0 255.0 25 367.0 332.0 15 351.0 255.0 20 6 氟甲腈 27.13 388.0 333.0 20 4.3 气质联用色谱图 图-133种禁用农药标准品的总离子流图(1 ng/mL) 4.4高效液相色谱质谱联用条件 柱子 ACQUITY UPLC BEH C18 (100mm ×2.1 mm×1.7 um) 流速 0.30 mL/min 流动相 A： 5 mmol/L乙酸铵溶液(含0.1%甲酸)，B：乙腈 柱温 35°C 进样量 2uL 检测器 Agilent 6470 离子模式 ESI 吹扫气 8 L/min 氮气温度 330℃ 簇电压 3500 雾化压力 45 psi 梯度洗脱 0.0-4.0 min，5-15%流动相B； 4.0-14.0 min， 15-100%流动相B； 14.0-15.0 min， 100-5%流动 相B；15.0-17.0 min， 5-5%流动相B. 4.5 MRM参数 表-2各农药的保留时间、监测离子对及碰撞电压 编号 名称 保留时间(min) 母离子(m/z) 子离子(m/z) CE(V) 1 涕灭威亚砜 2.93 207.1 132.4 5 207.1 89.2 13 2 涕灭威砜 3.90 240.0 223.0 5 240.0 86.0 21 3 久效磷 4.58 224.1 193.1 5 224.1 127.1 13 4 杀虫脒 6.01 197.2 152.1 21 197.2 117.2 33 197.2 46.2 25 5 3-羟基克百威 6.42 238.1 220.2 5 238.1 181.1 9 238.1 163.2 13 6 硫环磷 7.28 256.0 168.1 17 256.0 140.1 25 7 涕灭威 7.65 208.1 116.2 5 208.1 89.2 13 8 苯线磷亚砜 7.77 320.0 292.1 13 320.0 233.2 25 320.0 171.3 25 9 甲拌磷砜 7.78 293.0 247.1 13 293.0 171.0 25 323.0 115.0 33 323.0 97.1 53 29 甲拌磷 12.08 260.9 75.1 5 260.9 47.0 45 30 甲胺磷 14.25 142.1 125.1 9 142.1 94.1 37 4.6液质联用色谱图 图-230种禁用农药标准品的总离子流图(1ng/mL) 5.样品测试 5.1基质加标回收实验 在当归样品中添加浓度为 40 ng/kg 的 33种CMSMS)和 20 ng/kg 的 30种进行加标回收验证，使用上述样品前处理方法，最 后分别经 GCMSMS 和 LCMSMS 检测，平均回收率和 RSD结果如下所示。 表-3 GCMSMS 法33种化合物的平均回收率和相对标准偏差(n=3) 化合物 回收率(%) 平均回收率(%) RSD (%) 样品1 样品2 样品3 内吸磷 88.8 91.8 94.1 91.6 2.9 灭线磷 88.2 91.5 94.0 91.3 3.2 杀虫脒 90.3 88.6 91.9 90.3 1.8 甲拌磷 89.6 91.6 92.6 91.3 1.7 治螟磷 94.5 84.9 92.3 90.6 5.5 a-BHC 88.8 84.0 90.3 87.7 3.8 特丁硫磷 88.3 90.7 92.4 90.5 2.3 Y-BHC 90.5 91.6 92.0 91.4 0.8 久效磷 93.8 88.9 89.0 90.6 3.1 艾氏剂 89.3 90.6 91.2 90.4 1.1 B -BHC 90.5 92.5 93.3 92.1 1.6 甲基对硫磷 90.7 93.9 96.4 93.7 3.1 8-BHC 91.7 90.1 93.5 91.8 1.8 三氯杀螨醇 92.6 94.9 89.9 92.5 2.7 对硫磷 91.4 88.7 92.8 91.0 2.3 甲基异硫磷 95.9 91.9 89.9 92.6 3.3 alpha-硫丹 94.4 96.5 97.9 96.3 1.8 水胺硫磷 91.2 93.9 95.6 93.6 2.4 4，4'-滴滴伊 94.1 97.4 99.7 97.1 2.9 狄氏剂 91.2 87.6 93.8 90.9 3.4 甲基硫环磷 86.4 82.5 88.6 85.8 3.6 氟甲腈 93.4 90.3 86.5 90.1 3.9 2，4'-滴滴涕 93.3 95.2 95.8 94.8 1.4 苯线磷 87.6 90.1 91.6 89.8 2.2 除草醚 93.5 89.3 89.2 90.6 2.7 4，4'-滴滴滴 95.5 92.0 87.8 91.8 4.2 beta-硫丹 90.9 91.4 92.2 91.5 0.7 4，4'-滴滴涕 97.9 95.1 91.3 94.8 3.5 氟虫腈亚砜 99.0 93.9 88.5 93.8 5.6 氟虫腈 100.7 99.6 108.2 102.8 4.6 硫丹硫酸酯 90.0 105.3 99.6 98.3 7.9 氟虫腈砜 99.5 86.9 91.8 92.7 6.9 蝇毒磷 87.8 83.1 94.5 88.5 6.5 表-4 LCMSMS 法30种化合物的平均回收率和相对标准偏差(n=3) 化合物 回收率(%) 平均回收率(%) RSD(%) 样品1 样品2 样品3 涕灭威亚砜 93.61 96.65 95.15 95.14 1.60 涕灭威砜 96.40 100.78 96.29 97.82 2.62 久效磷 91.91 96.99 94.22 94.37 2.69 杀虫脒 94.71 98.02 95.71 96.15 1.76 3-羟基克百威 95.61 101.43 95.36 97.47 3.52 硫环磷 94.49 98.64 95.85 96.33 2.20 涕灭威 115.70 113.89 115.45 115.01 0.86 苯线磷亚砜 97.63 102.04 96.91 98.86 2.81 甲拌磷砜 106.18 99.82 105.46 103.82 3.35 磷胺 95.77 99.23 95.75 96.92 2.07 甲磺隆 100.24 101.08 96.12 99.15 2.68 苯线磷砜 100.90 105.73 101.46 102.70 2.57 克百威 95.05 98.65 96.12 96.61 1.92 氯磺隆 92.88 96.07 93.70 94.22 1.76 胺苯磺隆 97.88 101.71 98.88 99.49 2.00 甲拌磷亚砜 95.39 99.67 95.87 96.98 2.42 内吸磷 92.00 96.78 95.07 94.61 2.56 特丁硫磷亚砜 93.74 95.58 94.93 94.75 0.98 水胺硫磷 82.77 81.53 81.87 82.06 0.78 苯线磷 91.87 93.93 92.00 92.60 1.25 灭线磷 87.46 92.76 95.51 91.91 4.46 特丁硫磷砜 88.91 92.21 93.25 91.46 2.48 氯唑磷 85.85 86.99 87.83 86.89 1.14 硫线磷 85.65 84.24 85.00 84.96 0.83 蝇毒磷 83.81 82.00 83.02 82.95 1.09 甲基异柳磷 100.47 101.32 93.53 98.44 4.34 地虫硫磷 83.32 84.26 84.38 83.99 0.69 治螟磷 81.29 82.04 84.80 82.71 2.24 甲拌磷 86.18 86.20 86.27 86.22 0.05 甲胺磷 87.20 91.98 83.51 87.56 4.85 6.总结 6.1分取上清液时为防止下层残渣倒入浓缩杯中，可在浓缩杯上放置漏斗，并用乙腈润湿的滤纸将上清液过滤于杯中，并用乙腈润洗滤纸。 6.2在减压浓缩过程中需控制好温度和压力以防止部分化合物分解和损失，温度不能超过40°C，压力不要低于 100 mbar。 7.解决方案优势 7.1 AH-30 全自动均质器可自动进行试样均质 和刀头清洗，无需人员值守，避免有机溶剂毒害， 操作简单、便捷，为批量样品的均质提供帮助。 7.2 MPE-16 高通量真空平行浓缩仪采用数字型的真空控制系统，能精确、实时地检测真空度，避免样液中目标物在过低真空度下损失，同时采用水 浴加热和平稳的圆周震荡模式，保证样品的平行性和可靠性，16个大体积提取液同时浓缩，可实现批量、快速、高效的浓缩过程。 邮箱： info@raykol.com热线：址：：Vwww.raykol.com 网址：：Vwww.raykol.com邮箱： info@raykol.com热线： 当归属于根茎类药材，是最常用的中药之一。使用乙腈对当归试样进行均质提取，经盐析、离心后，将上清液浓缩、定容，即可对当归中的农药残留进行测定。本方法参考2020版《中国药典》2341通则农药残留量测定法新增第五法《药材及饮片（植物类）中禁用农药多残留测定法》中的直接提取法，采用睿科AH-30全自动均质器进行提取，提取液用MPE高通量真空平行浓缩仪进行浓缩。在20 ug/kg的加标水平下LCMSMS法中30种化合物的回收率在81.3-115.7%之间；在40 ug/kg的加标水平下GCMSMS法中33种化合物的回收率在82.5-108.2%之间，满足禁用农药的检测要求。该方法操作方便、提取和浓缩效率高、回收率好，可作为当归中多种农残前处理和分析检测的有效解决方案。