老陈醋中5-羟甲基糠醛检测方案(二手分析仪器)

食品科技分析检测一Vol.33，No.08，2012 —分析检测Science and Technology of Food Industry 周婷婷1，杨瑞学，宋 七1，张玉玉，吕 茜，倪元颖，李全宏 (.中国农业大学食品科学与营养工程学院，北京100083； 2.中国农业机械化科学研究院，北京100083) 摘 要：利用高效液相色谱法法定老老醋中5-羟羟基糠醛6-HMF)的含量，以5%甲醇水溶液为流动相，采用Cis色谱柱，在284nm波长条件下检测样品中的5-HMF。结果表明，该方法快速、准确，在0.0143~0.1001 ug范围内线性相关系数为 R²=0.9994，平均回收率88.27%~96.69%，相对标准偏差为2.09%~4.70%。 关键词：老陈醋，高效液相色谱，5-羟甲基糠醛 Determination of 5-hydroxymethylfurfural6-HMF)in over mature vinegar by HPLC ZHOU Ting-ting'，YANG Rui-xue，SONG Yi，ZHANG Yu-yu'，LV Qian，NI Yuan-ying，LI Quan-hong 1.College of Food Science and Nutritional Engineering， China Agricultural University， Beijing 100083， China；2.Chinese Academy of Agricultural Mechanization Sciences，Beijing 100083，China) Abstract： A method for the determination of 5-hydroxymethylfurfural by high-performance liquid chromatographyin old mature vinegar was developed.Samples were analyzed on a Ci column at 284nm using a mixture ofmethanol and water 6：95， v/v)as the mobile phase.Within the linear range of 0.0143~0.1001ug，the method wasaccurate with the range of average recoveries rate and relative standard deviation of 88.27%~96.69% and 2.09%~4.70%，respectively. Key words：old mature vinegar；high-performance liquid chromatography；5-hydroxymethylfurfural 6-HMF) 中图分类号：TS207.3 文献标识码：A 文章编号：1002-0306 2012)08-0083-03 老陈醋是以高粱、麸皮、水为主要原料，以稻壳或谷壳为辅料，以大麦、豌豆为原料所制得的大曲作为糖化发酵剂，经酒精发酵后采用醋酸发酵，再经熏酷、“夏伏晒、冬捞冰”陈酿等工艺酿造而成的食醋”。在其生产工艺中，熏是十分重要的生产工序，它不仅可以增加老陈醋产品适应要求的色泽，而且还决定了老陈醋产品的独特风味，在熏酷过程中发生的糖降解和美拉德反应，都会导致5-羟甲基糠醛的产生。5-羟甲基糠醛6-Hydroxymethylfurfural，5-羟甲基-2-糠醛，HMF)，是葡萄糖或果糖等单糖化合物在高温或酸性条件下，催化脱水产生的一种醛类化合物，是美拉德反应的重要中间产物物，主要存在于可能发生美拉德反应和糖降解反应的食品中，如酱油、酒类、蜂蜜-、烘焙食品、植物油等，其含量是研究食品在加工贮藏过程中质量变化以及衡量相关产品质量优劣的一项重要指标。研 ( 收稿日期：2011-07-25 *通讯联系人 ) ( 作者简介：周婷婷1988-)，女，硕士研究生，研究方向：天然产物化化。 ) ( 基金项目“十二五”国家科技支撑技划项目2011BAD23B01)。 ) 究表明，5-羟甲基糠醛具有多方面的生理作用，食用过量可能对人体健康造成伤害。因此，世界各国均对食品中羟甲基糠醛的含量做了限量规定，一般不得超过20mg/kg。目前，5-羟甲基糠醛含量测定的方法主要有：高效液相色谱法、气相色谱质谱法、紫外分光光度法。近年来，针对啤酒11、牛乳、饮料等食品，都已建立了相关的 HPLC 测定方法。然而对于老陈醋中5-羟甲基糠醛含量的分析还未见报道。本文采用高效液相色谱法，对老陈醋中的5-羟甲基糠醛进行定量测定，建立一种准确测定老陈醋中5-羟甲基糠醛含量的方法，为研究5-HMF对老陈醋功能及风味稳定性的影响提供参考。 1 材料与方法 1.1 材料与设备 三种不同品牌的老陈醋 北京美廉美超市；5-羟甲基糠醛 纯度99%，Sigma 公司；甲醇 色谱纯，北京爱希姆科技发展有限公司；0.45pm 水系滤膜 蓝弋化工产品有限责任公司。 ( LC-20A 高效液相色谱仪 配有 LC-20AT 洗脱 泵、SPD-20A 检测器、CTO-20A 柱温主、LC Solution ) 工作站，岛津国际贸易有限公司；Venusil XBP-C色谱柱 4.6mm×250mm，5pm) 博纳艾杰尔科技有限公司；LGJ-12 东冻干燥机 北京松源华兴科技公司；2000D型超纯水器 北京长风仪器仪表公司。 1.2 实验方法 1.2.1 标准品溶液的配制 精确称取5-羟甲基糠醛6-HMF)标准品0.0286g，用屯纯水溶解，定容到100mL的容量瓶中，得到0.286mg/mL的5-HMF标准品储备液，于4℃条件下避光保存。 1.2.2 样品溶液的配制 取各种老陈醋样品50g，冷冻干燥后，取适量用超纯水溶解，用0.45um 的水系微孔滤膜过滤后，待 HPLC分析。 1.2.3 分析测定条件色谱条件：Venusil XBP-C色谱柱4.6mm×250mm，5um)；柱温：30℃；UV 检则器，检测波长：284nm；流动相：甲醇-水6：95，v/v)；进样量：20pL；流速：1.0mL/min。 2结果与分析2样品前处理方法 采用冷冻干燥处理老陈醋样品，去除了挥发性干扰成分，比直接上样更准确，且有利于保护色谱柱。图1和图2分别为老陈醋经冷冻干燥进样和直接进样的色谱图。 图1 老陈醋经冷冻干燥进样测定色谱图 Fig.1 HPLC chromatogram of freeze-driedover mature vinegar sample 图2 老陈醋直接进样测定色谱图 Fig.2HPLC chromatogram of overmature vinegar sample by direct injection 2.2 色谱条件优化 通过对流动相组分、比例和流速的优化，观察对应的色谱峰型和出峰时间，结果表明，当流动相组分为甲醇-水 6：95，v/v)，等梯度洗脱，流动相流速1mL/min，检测波长284nm 时，5-HMF 标准溶液的色谱峰峰形最好，见图3。当流动相的甲醇的比例高于5%时，出峰时间早，基质干扰影响大，不利于实际样品的测定。 2.3 标准曲线和线性范围 取5-HMF标准品储备液，用超纯水稀释成质量 图3 5-HMF标样测定色谱图 Fig.3 HPLC chromatogram of 5-HMF standard solution 2.86pg/mL 5-HMF 图45-HMF的标准曲线 Fig.4 Standard curve of5-HMF 2.4 重复性实验 取同一老陈醋样品的测定液，相同体积进样5次，分别按上述色谱条件测定定中5-HMF的含量，计算所测含量的相对标准偏差 RSD)为3.59%见表1)，说明本方法用于测定老老醋中5-HMF 含量具有较好的重复性。 表1重复性实验结果 Table 1 The result of repeatability test 5-HMF的浓度 平均值 标准偏差 RSD ug/mL) ug/mL) %) 0.561、0.597、0.595、 0.563、0.553 0.574 0.02 3.59 2.5 稳定性实验 取标准品储备液，室温放置。每1.5h进样1次，测定5次，分别进样20pL。结果表明，所测含量的相对标准偏差 RSD)为2.86%见表2)，说明处理后的标准溶液在室温条件下6h 内稳定。 表2稳定性实验结果 Table 2the result of stability test 时间 5-HMF的浓度 平均值 标准偏差 RSD h) (g/mL) ug/mL) %) 0 2.939 1.5 2.950 3 2.878 2.868 0.08 2.86 4.5 2.816 6 2.757 2.6 精密度实验 取上述制备的标准品工作液在上述色谱条件下连续7次进样，每次20pL。结果见表3。结果表明，同样浓度的标准品连续进样的 RSD 为 0.19%，说明该方法的精密度较高。 表3 精密度实验结果 Table 3 The result of precision test 峰面积 平均值 标准偏差 RSD %) 418170、417612、417063、 416838、418458、 417363.3 776.64 0.19 416219、417183 2.7 加样回收实验 取同一老陈醋样品，分为3组，分别加入一定量2.86pg/mL 5-HMF标准品工作液，按上述色谱条件测定其中5-HMF的含量，计算本方法的回收率见表4)。表4结果显示，3个水平的平均回收率分别为88.27%、96.40%和96.69%，变异系数为2.09%~4.70%。因此，利用本方法测定老陈醋中的5-HMF含量，灵敏度高，重现性良好。 表4 5-HMF 加样回收率实验结果h=3) Table 4 5-HMF recovery tests and correspondingrelative standard deviations h=3) 项目 添加量mL) 0.8 1.0 1.2 93.00 95.02 94.80 回收率%) 86.58 95.06 96.44 85.24 99.13 98.82 平均回收率%) 88.27 96.40 96.69 RSD %) 4.70 2.45 2.09 2.8 样品测定 选取市售的3种不同品牌的老陈醋，按1.2.2的实验条件制备样品溶液，用高效液相色谱测定5-HMF峰面积，分别代入回归方程，计算样品中5-HMF的含量，结果见表5。 表5 实际样品中5-HMF含量分析结果 Table 5 Analysis results of 5-HMF contents in samples 品 老陈醋1 老陈醋2 老陈醋3 5-HMF的含量 mg/kg) 5.31 9.35 14.45 检测结果表明，所先择的各品种老陈醋中均含有一定量的5-HMF，不同老陈醋的含量差别较大，这可能与老陈醋的品质、工艺和贮存时间的不同有关。 3 结论 本方法采用高效液相色谱定量检测老陈醋中5-HMF的含量。其前处理简单、易操作，准确度、精密度均较好，重现性良好。运用该方法检测不同品种的老陈醋中的5-HMF含量，平均回收率为88.27%~96.69%，相对标准偏差为2.09%~4.70%。由于目前我国尚未制制老陈醋中5-HMF 含量的检测方法，因而本方法的建立不仅可以为老陈醋标准 方法的建立和质量的监控提供一个有力的参考，也为老陈醋和5-HMF的研究提供一个新的思路。 ( 参考文献 ) ( [1]王元太.山西老陈醋的工艺精华和产品特色叮.农产品加 工，2005 12)：40-42. ) ( [2]李久长，马挺军.山西老陈醋熏酷工艺研究.中国酿造， 2005 8)：31-32. ) ( 3] Hodge J E .Dehydrated f o ods： Chemistry of browning reactionsin model s ystems [].Journal o f A g ricultural a nd Fo o d C h emi s try， 1953， 1 (5)：928-943. ) ( [4]王妙飞，张水华，郭新东，等.高效液相色谱法测定酱油中的5-羟甲基糠醛.现代食品科代，2008，242)：188-190. ) 5] Chen L， Huang H， Liu W， et al.Kinetics of the 5 - ( hydroxymenthylfurfural f ormation r eaction i n C h inese ri c e w i n eQ. 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