低加合物干扰的肽中LC-MS分析检测方案(液质联用仪)

「技术简报WatersTHE SCIENCE OF WHAT'S POSSIBLE. 「技术简报]◎2019年沃特世公司。中国印刷。2019年6月720006596ZH TC-PDF 使用IonHance DFA和经过认证的LDPE容器实现低加合物干扰的肽LC-MS分析 Jennifer Nguyen、Xiaoxiao Liu和Matthew Lauber沃特世公司(美国马萨诸塞州米尔福德) 目的 在使用含有IonHance""DFA改性剂的流动相进行肽质谱分析时，最大程度减少金属离子加合物干扰。 背景 钠、钾加合物历来都是蛋白质和肽类电喷雾电离(ESI)质谱分析面临的一大难题。虽然痕量金属污染物通常不会影响蛋白质或肽的分离，但它们可能会让质子化离子的相对丰度失真，·令光谱变得复杂，进而影响质谱解析。众所周知，钠和钾加合物很难去除，因为它们可能来源于样品前处理和仪器操作过程中的多种污染源。 在蛋白质和肽分析中，设法最大程度减少MS分析工作流程中的痕量金属污染变得越来越重要，部署在生物治疗药物整个开发和制造过程中的各项分析检测的灵敏度也越来越高。本文重点介绍了结合高品质实验用纯化水和经过认证的低密度聚乙烯(LDPE)流动相容器，使用IonHance二氟乙酸(DFA)(p/n：186009201)可获得超高质量肽质谱图的优势。 使用高纯度流动相添加剂和容器，最大程度减少金属离子污染，实现低加合物干扰的LC-MS分离。 图1.在肽图分析中，使用添加0.1% lonHance DFA改性剂的流动相和ACQUITY"UPLCTMCSH C肽分析专用柱(130 A， 1.7 pm， 2.1x150 mm)分离mAb胰蛋白酶酶解标准品得到的UV谱图和总离子流色谱图(TIC)。 解决方案 热塑性塑料(例如全氟烷氧基塑料(PFA)和聚乙烯塑料(PE))是痕量金属定量应用(例如电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)分析)的首选容器材料。上述材料的优势在于化学纯度高以及对酸碱具有惰性。 此外，它们通常经过认证，只含ppb水平(甚至ppt水平)的金属。因此， lonHanceDFA采用PFA样品瓶包装，并建议用户使用Waters"认证的LDPE容器配制含DFA改性剂的流动相。每个LDPE容器都经过严格的QC测试，可确保钠和钾浓度低于100 ppb。 为了评估全新沃特世认证LDPE容器(p/n： 186009110)是否适用于配制含lonHance DFA的流动相， 我们对沃特世mAb胰蛋白酶酶解物标准品(p/n： 186009126)进行肽图分析并评估了所得质谱图的质量。该标准品是基于NIST参比物质8671胰蛋白酶酶解物的一款新的市售标准品。图1所示为使用0.1%lonHance DFA、18.2MQ实验用纯化水和经过认证的LDPE容器分析该标准品中的肽得到的UV谱图和TIC色谱图。图2所示为NIST mAb轻链上的T13肽的质谱图。由图可见，结合使用18.2MQ实验用纯化水和经过认证的LDPE容器(图2A)时，肽谱图很容易解析。 相比之下，采用未经认证的LDPE容器和外部来源的LC-MS分析用水配制流动相时(图2B)，钠和钾加合物的信号明显更强。以上结果证明，金属加合物的形成会令质子化离子的丰度失真，进而可能对某些数据的分析产生影响。 图2.使用18.2MQ实验用纯化水和经过认证的LDPE容器配制含0.1% IonHance DFA改性剂的流动相，用于分析mAb胰蛋白酶酶解标准品的轻链T13肽(序列VQWK)得到的提取质谱图(A)。右侧所示为使用外部来源的LC-MS分析用水和未经认证的LDPE容器配制流动相用于分析相同样品得到的质谱图(B)，以供对比。 总结 最大程度减少流动相中的金属离子污染对于许多分析而言都很重要，而在LC-MS实验中，这项工作尤其具有挑战性。采用经过严格纯化的试剂和洁净的容器配制流动相非常关键。要想成功部署LC-MS工作流程，就必须使用高纯度试剂和洁净的容器。沃特世认证LDPE容器是控制钠和钾污染的可靠方法，有助于分析人员获得高质量谱图，不受痕量金属钠离子和钾离子的干扰，尤其是在分析需要使用高纯度酸(如IonHance DFA)的情况下。 扫一扫，关注沃特世微信 沃特斯中国有限公司 沃特世科技(上海)有限公司 北京：010-52093866 上海：021-61562666 广州：020-28296555 香港：852-29641800 免费售后服务热线：800(400)820 2676 Www.waters.com 目的 在使用含有IonHance™ DFA改性剂的流动相进行肽质谱分析时,最大程度减少金属离子加合物干扰。背景 钠、钾加合物历来都是蛋白质和肽类电喷雾电离(ESI)质谱分析面临的一大难题。虽然痕量金属污染物通常不会影响蛋白质或肽的分离，但它们可能会让质子化离子的相对丰度失真，令光谱变得复杂，进而影响质谱解析。 众所周知，钠和钾加合物很难去除，因为它们可能来源于样品前处理和仪器操作过程中的多种污染源。在蛋白质和肽分析中，设法最大程度减少MS分析工作流程中的痕量金属污染变得越来越重要，部署在生物治疗药物整个开发和制造过程中的各项分析检测的灵敏度也越来越高。 本文重点介绍了结合高品质实验用纯化水和经过认证的低密度聚乙烯(LDPE)流动相容器， 使用IonHance二氟乙酸(DFA)(p/n:186009201) 可获得超高质量肽质谱图的优势。总结最大程度减少流动相中的金属离子污染对于许多分析而言都很重要，而在 LC-MS实验中，这项工作尤其具有挑战性。采用经过严格纯化的试剂和洁净的容器配制流动相非常关键。要想成功部署LC-MS工作流程，就必须使用高纯度试剂和洁净的容器。沃特世认证LDPE容器是控制钠和钾污染的可靠方法，有助于分析人员获得高质量谱图，不受痕量金属钠离子和钾离子的干扰，尤其是在分析需要使用高纯度酸(如IonHance DFA)的情况下。