单克隆抗体和抗体偶联药物中改善单克隆抗体和抗体偶联药物表征检测方案(液相色谱仪)

Phizer使用高分辨色谱-质谱联用系统和最新反相色谱柱改善单克隆抗体和抗体偶联药物表征WatersTHE SCIENCE OF WHAT'S POSSIBLE.Jacquelynn Smith'、Olga V. Friese、Jason C. Rouse、Jennifer Nguyen、Matthew A. Lauber、Priya Jayaraman3Biotherapeutics Pharm.Sci.， Pfizer WRD(美国密苏里州圣路易斯)， ?Biotherapeutics Pharm.Sci.， Pfizer WRD(美国马萨诸塞州安多弗)，沃特世公司(美国马萨诸塞州米尔福德) 图1. BioResolve RP， 450 A， 2.7pm键合相的结构示意图。 体积。由图可见，进样体积越大，峰越宽，分离度越低。分离mAb亚基的条件如下： BioResolveRP， 450 A， 2.7 pm， 2.1×150 mm色谱柱，流速为0.6mL/min，柱温80℃， 采用0.1%TFA改性白的水/乙腈流动相。 采用更高的流速提高通量 使用BioResolve RP色谱柱进行分离，即使疏水性最强的亚基-Fd'(负载数为3)也获得了可 接受的回收率，而且无需采用复杂的洗脱技术。此外，二元或者三元溶剂体系洗洗均可获 得相当的分离性能。 fd(1a) 图5.使用多款市售2.1×50mm色谱柱，在流速为0.6mL/min、柱温80℃、0.1%TFA改性的水/乙腈流动相条件下分离ADC亚基得到的色谱图。 BioResolve RP色谱柱分离ADC亚基的分离度最高，该色谱柱还改善了Fd'(3)亚基的回收率(尤其是相较于其于实心核色谱柱)。此外， BioResolve RP色谱柱分离LC(1)和Fd'(0)亚基的选择性也优于其它色谱柱。 沃特世新开发的RPLC色谱柱由创新的键合相和高效表面多孔颗粒组成，可从多个方面改进基于反相分析的产品表征方法。本研究将该色谱柱应用于mAb和ADC亚基分析，有效改善了反相色谱的分离度和回收率。另一方面，可以据此开发创新的平台方法用于mAb和ADC亚基分析，以期实现更高保真度和获取更高质量的LC-MS数据。 本研究使用新型反相色谱柱来解决这些问题，以期改善抗体偶联药物的表征分析。在此之前，已有研究表明,抗体偶联药物因含有疏水性极强的Fd'亚基(负载数为3)而更加难以进行有效分析。