银杏叶软胶囊中槐角苷检测方案(液相色谱仪)

使用 Agilent InfinityLab Poroshell 120SB-C18 色谱柱快速检测银杏叶软胶囊中的槐角苷 陆予菲 安捷伦科技(中国)有限公司 本文介绍了用于普通 HPLC 上的快速液相分析方法。文中使用 Agilent InfinityLab Poroshell120 SB-C18 色谱柱分析槐角苷对照品及银杏叶提取物制品，目标物峰形良好，能够有效与样品中的杂质分离，得到准确的测定结果。同时与采用 Agilent 5 TC-C18 (2)色谱柱的常规方法进行对比，本方法经过简单的方法转换，即可缩短约60%的分析时间。该方法适用于银杏叶提取物中槐角苷的快速、高效分析。 银杏叶中主要活性成分为黄酮类化合物，具有一定的扩血管作用，可辅助治疗心脑血管疾病。市场上有各种银杏制品，银杏叶片、软胶囊和滴丸皆为常见的银杏叶提取物制品。但银杏中还含有有毒的银杏酸，在提取工艺中需尽可能减少银杏酸成分含量。为了保证银杏叶制品的质量，《中国药典》中明确规定了银杏叶提取物检测总黄酮醇苷含量及银杏酸限量。其中总黄酮醇苷的含量，由分别测得的槲皮素含量、山柰素含量及异鼠李素含量按照公式换算获得。 槐角提取物中同样含有皮素、山柰素及异鼠李素，并且不含有毒成分银杏酸。但从银杏叶与槐角两味药材在《中国药典》中的描述看到，两者功效不同。在生产过程中存在以槐角苷提取物代替银杏叶提取物的现象属于掺假行为，而原有方法无法区分。 中国食品药品检定研究院研究制定了多个有关银杏叶制品的检测方法，并发布了《银杏叶软胶囊中槐角苷检查项补充检查方法》。此方法采用 Agilent 5 TC-C18 (2) 谙谱柱(4.6×250mm，5 pm，部件号588925-902)，简单有效，可准确测定槐角苷的含量。 本文在此基础上开发了快速液相色谱方法，采用 Agilent InfinityLabPoroshell 120 SB-C18 色谱柱(4.6×100mm， 2.7 pm， 部件号685975-902)， 在20 min 内完成分析，大大缩短分析时间。同时兼容常规液相色谱系统，可在普通液相色谱系统上实现快速分析需求。 仪器与试剂 ( 采用 Agilent 1260 Infinity 液相色 谱 系统，配备如下安捷伦模块： 四元泵(部件号 G1311A) 、 自动进样器( 部 件号 G1367D)、柱温箱(部件号G1316A)、二极管阵列检测器(部件号 G4212A)。 ) ( 色谱柱选用 Agilent InfinityLab Poroshell 120 SB-C18 3( (4.6× 100 mm， 2.7 um， 部件号685975-902)。 ) 甲醇、乙腈、磷酸为色谱纯级，购于迪马公司；所用实验用水为Millipore Milli-Q超纯水系统现制备的高纯去离子水；槐角苷对照品购于中国药品生物制品检定所；样品为市售产品。 槐角苷对照品溶液配置 取槐角苷对照品适量，精密称定，加80%甲醇水溶液制成每1 mL 含 20.0 pg槐角苷对照品的溶液，作为对照品溶液。 样品前处理 取约相当于总黄酮醇苷9.6 mg 的样品粉末，精密称定，置于具塞锥形瓶中，精密加入80%甲醇水溶液20mL，密塞，称定重量，超声处理 20 min。取出，放冷，再称定重量，用80%甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，过滤。取续滤液，待测。 液相色谱条件 色谱柱： InfinityLab Poroshell 120 SB-C18流速： 1.0 mL/min进样量： 4uL柱温： 40°C流动相： A) 0.4%磷酸水溶液B)乙腈C)甲醇梯度程序： 时间 (min) B% C%8816.0 816.1 820.0 8检测器： 260nm 结果与讨论 按照本文所述实验方法，使用InfinityLab Poroshell 120 SB-C18色谱柱，对银杏叶软胶囊中的槐角苷进行分析，分析结果满足分离及检测要求，槐角苷对照品溶液和样品溶液的色谱图如图1、2所示。 其中，两个待测样品中二号样品为已知阳性样品，1，一号样品为未知样品。按照《银杏叶软胶囊中槐角苷检查项补充检查方法》中结果判断方法，使用槐角鬼对照品定位，并比对210-400 nm 波长范围内的紫外光谱图，二号样品判定为阳性检出，与已知结果一致；一号样品中保留时间相同的色谱峰，由于光谱图不同(槐角苷在 259 nm 显示最大吸收)，判定为合格产品，对照品溶液、样品溶液的叠加光谱图如图3所示。 通过进一步对比常规柱方法和本文所述快速方法的色谱图得到，在保证分离及检测要求的前提下，快速方法可在 20 min内完成分析，缩短了约60%的分析时间，如图4所示。 图1.槐角苷对照品溶液色谱图 图2.对照品溶液、样品溶液的叠加色谱图 图3.对照品溶液、样品溶液的叠加光谱图(210-400nm) 图4.常规方法与快速方法的色谱图比较 结论 此方法使用采取表面多孔层填料技术的 Poroshell色谱柱，利用其柱效与亚二微米填料相当的特点，在满足分离度的基础上，达到快速分析的效果。同时 Poroshell 色谱柱的压力大约只有亚二微米填料的50%，可应用于UHPLC 和常规 HPLC 系统上。 本文随机选取两个不同厂家的银杏叶软胶囊，按照建立的快速方法检测。由实验结果看出， Poroshell 120 SB-C18 能够提供较好的分离及良好的峰形，满足方法中柱效不低于40000的要求。且方法分析周期 20 min，缩短了约60%的分析时间，大大提升分析效率。此外，本文所述方法操作简便，可准确测定槐角苷的含量。 安捷伦汉本资料可能存在的错误或由于提供、展示或使用本资料所造成的间接损失不承担任何责任。 ( 本文中的信息、说明和技术指标如有变更，恕不另行通知。 ) ( ◎安捷伦科技(中国)有限公司，2017 ) ：Agilent 摘要    本文介绍了用于普通 HPLC 上的快速液相分析方法。文中使用 Agilent InfinityLab Poroshell120 SB-C18 色谱柱分析槐角苷对照品及银杏叶提取物制品，目标物峰形良好，能够有效与样品中的杂质分离，得到准确的测定结果。同时与采用 Agilent 5 TC-C18 (2) 色谱柱的常规方法进行对比，本方法经过简单的方法转换，即可缩短约 60% 的分析时间。该方法适用于银杏叶提取物中槐角苷的快速、高效分析。前言    银杏叶中主要活性成分为黄酮类化合物，具有一定的扩血管作用，可辅助治疗心脑血管疾病。市场上有各种银杏制品，银杏叶片、软胶囊和滴丸皆为常见的银杏叶提取物制品。但银杏中还含有有毒的银杏酸，在提取工艺中需尽可能减少银杏酸成分含量。为了保证银杏叶制品的质量，《中国药典》中明确规定了银杏叶提取物检测总黄酮醇苷含量及银杏酸限量。其中总黄酮醇苷的含量，由分别测得的槲皮素含量、山柰素含量及异鼠李素含量按照公式换算获得。    槐角提取物中同样含有槲皮素、山柰素及异鼠李素，并且不含有毒成分银杏酸。但从银杏叶与槐角两味药材在《中国药典》中的描述看到，两者功效不同。在生产过程中存在以槐角苷提取物代替银杏叶提取物的现象属于掺假行为，而原有方法无法区分。中国食品药品检定研究院研究制定了多个有关银杏叶制品的检测方法，并发布了《银杏叶软胶囊中槐角苷检查项补充检查方法》。此方法采用 Agilent 5 TC-C18 (2) 色谱柱（4.6 × 250 mm，5 μm，部件号 588925-902），简单有效，可准确测定槐角苷的含量。    本文在此基础上开发了快速液相色谱方法，采用 Agilent InfinityLabPoroshell 120 SB-C18 色谱柱（4.6 × 100 mm，2.7 μm，部件号685975-902），在 20 min 内完成分析，大大缩短分析时间。同时兼容常规液相色谱系统，可在普通液相色谱系统上实现快速分析需求。结论    此方法使用采取表面多孔层填料技术的 Poroshell 色谱柱，利用其柱效与亚二微米填料相当的特点，在满足分离度的基础上，达到快速分析的效果。同时 Poroshell 色谱柱的压力大约只有亚二微米填料的 50%，可应用于 UHPLC 和常规 HPLC 系统上。本文随机选取两个不同厂家的银杏叶软胶囊，按照建立的快速方法检测。由实验结果看出，Poroshell 120 SB-C18 能够提供较好的分离及良好的峰形，满足方法中柱效不低于 40000 的要求。且方法分析周期 20 min，缩短了约 60% 的分析时间，大大提升分析效率。此外，本文所述方法操作简便，可准确测定槐角苷的含量。