饲料中卡巴氧检测方案(液质联用仪)

WatersTHE SCIENCE OF WHAT'S POSSIBLE. ACQUITY UPLC-XEVO系列三重四质杆质谱仪检测饲料中喹乙醇 参考国标：农业部2086号公告-5-2014饲料中卡巴氧、乙酰甲喹、喹烯酮和喹乙醇的测定液相色谱-串联质谱法 前处理方法： Oasis HLB 200mg/6mL (P/N：WAT106202) 1、 样品提取一参考国标 准确称取饲料2g(预混合饲料1g)于50mL离心管中。加入0.1%甲酸-乙腈溶液10mL， 涡旋1min，40度超声10min， 9000rpm离心15min，收集上清液。残渣用0.1%甲酸-乙腈溶液10mL重复提取一次并合并提取液。精确量取5mL上述提取液在60度下氮吹至2mL，然后用4mL0.1moL/L磷酸二氢钾充分溶解残余物，待净化。 2、样品净化 HLB (200mL/6CC) 活化、平衡：3mL甲醇、3mL水 上样：将上述备用液过柱 淋洗：3mL0.02mol/L 盐酸、3mL5%甲醇 洗脱：5mL甲醇 收集洗脱液后氮气吹干，用1mL20%乙腈溶解后果0.22um 滤膜待上机 色谱质谱条件 色谱柱： ACQUITY UPLC BEH C18(150 mm， 2.1 mm，1.7um)(P/N：186002353) 柱温：30℃ 进样量：10pL 流动相及参考梯度洗脱程序见表1。 质谱采用ESI+检测方式，多反应监测(MRM)。毛细管电管为 3.4Kv； 源温度为150℃；脱溶剂气温度为550℃；脱溶剂气流速为 800L/hr；锥孔气流速为20L/hr。脱溶剂气、锥孔气、均为高纯氮气。碰撞气为氩气。 定性离子对、定量离子对及对应的锥孔电压和碰撞能量见表2。 表1 流动相及参考梯度洗脱程序 时间(min) 流速(mL/min) 0.1%甲酸溶液(%) 乙腈(%) 0 0.3 95 5 1.0 0.3 95 5 2.0 0.3 60 40 3.0 0.3 60 40 3.1 0.3 95 90 表2定性、定量离子对及锥孔电压、碰撞电压的参考值 被测物名称 定性离子对 定量离子对 锥孔电压(V) 碰撞能量 喹乙醇 (m/z) (m/z) 16 (eV) 264.2>212.3 264.2>212.2 15 264.2>177.1 20 blnak 饲料空白样品与喹乙醇标准品对比谱图 ■动物源食品中喹噁啉-2-羧酸(QCA)、3-甲基喹噁啉-2-羧酸(MQCA)分析 参考国标：农业部781号公告-3-2006动物源食品中3-甲基喹噁啉-2-羧酸和喹噁啉-2-羧酸残留量的测定高效液相色谱法 前处理方法：使用 Waters Oasis MAX 60mg/3mL (P/N：186001884)参考国标步骤 1、样品提取—参考国标 称取肌肉样品5g于离心管中加入8mL偏磷酸甲醇溶液涡旋 2min 在25度下6000rpm离心15min， 取出上清液。然后重复提取一遍后合并两次上清液。向上清液中加入8mL乙酸乙酯，涡旋1min ，4000rpm 离心 10min ，取上层。再重复提取扁遍后合并两次上清液。有机相中，加磷酸盐缓冲液6mL，涡旋1min， 放置10min ， 使下层清晰，收集水相。然后再重复提取后合并，待净化。 2、样品净化 (MAX 60mg/3CC) 活化、平衡：3mL甲醇、3mL水 上样：备用液过柱 淋洗：3mL 0.05mol/L 氢氧化钠、3mL甲醇 洗脱：3mL2%甲酸甲醇 收集洗脱液后氮气吹干，用500pL甲醇溶解后过 0.45pm 滤膜待上机 仪器： Alliance e2695 仪器方法： 流动相：1%甲酸水溶液+甲醇=60：40 色谱柱： XBridge C18 250mmx4.6mm ，粒径 5pm (P/N：186003117) 流速：1mL 检测器：2998 紫外波长：320nm 进样量；20pL 柱温：30℃ 3-甲基喹噁啉-2-羧酸和喹噁啉-2-羧酸分离图谱 Waters液质联用方法检测饲料中喹乙醇及其代谢物参考国标：农业部2086号公告-5-2014 饲料中卡巴氧、乙酰甲喹、喹烯酮和喹乙醇的测定 液相色谱-串联质谱法前处理方法：Oasis HLB 200mg/6mL  (P/N:WAT106202)1、 样品提取 — 参考国标准确称取饲料2g（预混合饲料1g）于50mL离心管中。加入0.1%甲酸-乙腈溶液10mL，涡旋1min，40度超声10min，9000rpm离心15min，收集上清液。残渣用0.1%甲酸-乙腈溶液10mL重复提取一次并合并提取液。精确量取5mL上述提取液在60度下氮吹至2mL，然后用4mL 0.1moL/L磷酸二氢钾充分溶解残余物，待净化。2、 样品净化 HLB （200mL/6CC）活化、平衡：3mL甲醇、3mL水上样：将上述备用液过柱淋洗：3mL 0.02mol/L 盐酸、3mL 5%甲醇洗脱：5mL 甲醇收集洗脱液后氮气吹干，用1mL 20%乙腈溶解后果0.22um 滤膜待上机色谱质谱条件色谱柱：ACQUITY UPLC BEH C18(150 mm,2.1 mm，1.7μm)  (P/N:186002353)柱温：30℃；进样量：10 μL流动相及参考梯度洗脱程序见下表。时间(min)流速(mL/min)0.1％甲酸溶液(％)乙腈(％)00.39551.00.39552.00.360403.00.360403.10.39590质谱采用ESI+检测方式，多反应监测（MRM）。毛细管电压为3.4 Kv； 源温度为150℃；脱溶剂气温度为550℃；脱溶剂气流速为800L/hr；锥孔气流速为20 L/hr。脱溶剂气、锥孔气、均为高纯氮气。碰撞气为氩气。定性离子对、定量离子对及对应的锥孔电压和碰撞能量见下表。 被测物名称定性离子对（m/z）定量离子对（m/z）锥孔电压（V）碰撞能量（eV）喹乙醇264.2>212.3264.2>212.21615264.2>177.120饲料空白样品与喹乙醇标准品对比谱图 液相方法分析喹乙醇代谢物喹噁啉-2-羧酸(QCA)、3-甲基喹噁啉-2-羧酸（MQCA）参考国标：农业部781号公告-3-2006 动物源食品中3-甲基喹噁啉-2-羧酸和喹噁啉-2-羧酸残留量的测定 高效液相色谱法前处理方法：使用Waters Oasis MAX 60mg/3mL (P/N:186001884)参考国标步骤1、 样品提取 — 参考国标称取肌肉样品5g于离心管中，加入8mL偏磷酸甲醇溶液，涡旋2min，在25度下6000rpm离心15min，取出上清液。然后重复提取一遍后合并两次上清液。向上清液中加入8mL乙酸乙酯，涡旋1min，4000rpm离心10min，取上层。再重复提取一遍后合并两次上清液。有机相中，加磷酸盐缓冲液6mL，涡旋1min，放置10min，使下层清晰，收集水相。然后再重复提取后合并，待净化。2、样品净化 (MAX 60mg/3CC)活化、平衡：3mL甲醇、3mL水上样：备用液过柱淋洗：3mL 0.05mol/L 氢氧化钠、3mL甲醇洗脱：3mL 2%甲酸甲醇收集洗脱液后氮气吹干，用500uL甲醇溶解后过0.45μm 滤膜待上机仪器: Waters Alliance e2695仪器方法：流动相：1%甲酸水溶液+甲醇=60：40色谱柱：XBrige C18 250mm×4.6mm，粒径5μm (P/N:186003117)流速：1 mL检测器：2998紫外波长：320nm进样量：20μL柱温：30℃3-甲基喹噁啉-2-羧酸和喹噁啉-2-羧酸分离图谱