茶叶中甲基对硫磷检测方案(固相萃取仪)

PromoChrom 以下是方案二中 SPE-03 的处理步骤： 0 J0 园 整个样品处理过程需要操作人员专注和细心。如果发生浓缩过头或液体转移不完全，就会造成回收率偏低。通过将这个过程自动化，可以减少操作人员的工作强度，提高样品处理速度(SPE03可以平行处理八个样品)，并提高分析结果的可靠性。 实验设置 以下是 SPE-03的工作原理示意图和用于本试验的设置： 本实验采用两种自动化的方案。方案一是从提取液的浓缩开始，方案二从样品的浸泡提取开始。为了缩短提取时间，方案二采用加热+浸泡，将提取时间由放置过夜缩短到30分钟。 以下是方案一中 SPE-03 的处理步骤： 在加样和淋洗的同时进行组分浓缩。浓缩条件为：淋洗流速0.3毫升/分，温度60度，氮气流速2.8升/分。 为了配合和利用SPE-03 的特点，对原有手动方法做了修改。以下是主要改动部分和改动原因： 1)将样品量从1克改为0.5克， SPE 柱的填料量也由500毫克减为250毫克。 2)由于填料量减少，淋洗体积也由25毫升减为12毫升。 3)最后浓缩体积由2毫升改为0.5毫升，以弥补样品量减少造成目标分析物浓度的减少。 4)省去了提取液的过滤步骤，以简化操作和避免提取液的稀释。因为SPE-03的通道分配模块采用了耐磨损的工业陶瓷和不锈钢，而且样品通道比较宽，样品提取液中的微小颗粒不会造成部件磨损或管路堵塞。 5)在方案二中，样品的提取借用了QuEChERS 的思路，省去了提取液的浓缩步骤。另外通过加热，加快了提取速度。 SPE-03 为实现方案一所用的具体方法： 行号 操作 流速 体积 注释 1 Heat 60 (℃) 5.0 (min) 开始预热 2 Elute 1 8 10 将淋洗溶剂切换到溶剂1，用10毫升预淋SPE 柱 3 Evap F1 10(无用) 12：(min) 浓缩样品 4 Clean 1 8 2.0 在样品瓶中加入2毫升淋洗溶剂 5 Add samp 8 0.1 将样品瓶中液体转入 SPE 柱， 同时开始组分收集。为了保证转入完全，设定体积略大于样品瓶中液体的实际体积。 6 Collect 1 8 2.5 7 Elute 1 8 0.0 将淋洗溶剂切换到溶剂1，收集10毫升组分。 8 Collect 1 8 10.0 9 Evap Fl 10(无用) 25 60度下浓缩25分钟 SPE-03 为实现方案二所用的具体方法： 行号 操作 流速 体积 注释 1 Heat 60(℃) 30.0 (min) 加热提取30分钟 2 Elute 1 8 10 将淋洗溶剂切换到溶剂1，用10毫升预淋 SPE 柱 3 Add samp 8 0.2 将2.0毫升样品提取液转入 SPE 柱， 同时进行组分收集和浓缩，此时流速自动减为0.3毫升/分。 4 Con F2 8(无用) 2.0 5 Elute 1 8 0.0 将淋洗溶剂切换到溶剂1，收集10毫升组分。同时进行组 6 Con F2 8(无用) 10.0 分收集和浓缩，流速自动减为0.3毫升/分。 结果和讨论 1.浓缩过程中目标分析物的损失 在痕量分析的样品制备中，浓缩过程中目标分析物的挥发是造成回收率偏低的一个常见原因。挥发损失主要发生在溶剂蒸干之后，因此控制浓缩终止的时间尤其重要。SPE-03可以根据溶剂的挥发速度准确控制停止时间，但是同时处理八个样品，样品间在浓缩速度可能出现1-2分钟的差异。本研究对这方面的影响通过添加回收率进行了评估。以下是三种处理条件下甲基对硫磷的损失情况： 处理-一 处理二 处理三 10微克甲基对硫磷加入5毫升丙 酮，65度下浓缩至干，然后继续 浓缩3分钟。氮气流速2.8升/ 分。 10微克甲基对硫磷加入5毫升乙氰+甲苯(3：1)，85度下浓缩至 干，然后继续浓缩3分钟。氮气 流速2.8升/分。 10微克甲基对硫磷加入0.5毫升 甲醇，在敞口瓶中自然挥发20 小时。 损失率<6% 损失率=30-50% 损失率=30-35% 根据以上结果，，在浓缩温度不高于65度的条件下，1-2分钟的过度浓缩，不会对有机磷农药的回收率造成显著影响。浓缩温度越高，过度浓缩速造成的影响越显著。因此当溶剂的沸点较高时，需要将浓缩时间适当缩短， 以防止完全将液体蒸干。 2.添加回收率 在方案一的回收率试验中，5微克甲基对硫磷被加入到5毫升茶叶提取液(相当于0.5克茶样)中。在方案二的回收率试验中，2微克甲基对硫磷被加入到1克磨碎茶样中，按照方案一的方法处理。样品经相应方案处理后，用 HPLC 测定回收率。所有样品的回收率都在95%以上，说明使用样品和组分的在线浓缩都不会造成有机磷农药的损失。 3.提取效率的研究 方案二使用60度加热30分钟的提取方法取代原有的浸泡过夜的方法。要比较两种方法的提取效率，通常需要使用真实样品。这里采用了另一种途径：考察茶样色素的浸出浓度。 茶样提取液(相当1克茶叶)经石墨化碳黑柱萃取后再用20毫升二甲基甲酰胺洗脱，，然后观察色素颜色的深浅。在右边的图片中，左边的一瓶是采用方案二的加热提取，右边的一瓶是采用过夜浸泡提取。可见方案二的加热提取能更有效的进入样品基质，将内含物浸出。 虽然加热提取会增加样品干扰物质在提取液中的浓度，但并不影响样品的净化效果。 5毫升茶样提取液(浸泡过夜，相当于0.5克茶样)浓缩至0.5毫升后直接用 HPLC测定 0.5克茶样使用方案二处理后用 HPLC测定 5毫升茶样提取液(浸泡过夜，相当于0.5克茶样)使用方案一处理后用HPLC测定 HPLC 条件： Agilent 1100四元泵+紫外检测器；流动相A 为水，B为甲醇；梯度淋洗程序为在6分钟内将B从30%匀速增加到95%，保持2.5分钟后再降回30%；分析柱为PCT-C18，250X4.6毫米，5微米颗粒；检测波长276纳米；流速1.5毫升/分；进样体积20微升。 4.样品处理效率 使用方案一处理一批样品(八个)所用的时间为50分钟，使用方案二处理一批样品(八个)所用的时间为80分钟，平均每个样品的处理时间都在10分钟以内。使用手动样品处理，通常可以4-8个样品同时时行过柱净化，处理速度和自动处理差别不大。但是提取液和净化组分的浓缩比较费时，特别是样品转移过程，费事而且容易出错。这部分操作每个样品需要的时间约为30分钟。 PromoChrom Technologies Ltd 212-10951 Mortfield Road Richmond， BC V7A2W5， Canada Tel： (+1)-6042950280 Email： info@promochrom.com www.promochrom.com info@promochrom.com PromoChrom Technologiesinfo@promochrom.comwww.promochrom.com