乳糖中含量检测方案(液相色谱柱)

础n1 od86N mil0.0 2.04.06.0 8.010.012.014.016.018.020.0 2015版《中国药典》辅料乳糖的测定(LC-RI) 简介 第一种色谱柱结果： APS-2氨基柱 一、实验材料 1.1仪器与试剂 1.1.1 仪器及设备 高效液相色谱仪： Thermo Fisher Dionex UltiMate 3000 HPLC；主要配置：泵： LPG-3400(含脱气机)；自动进样器： WPS 3000TSL(含100m样品定量环)；柱温箱： TCC-3000. 1.1.2 标准溶液及试剂 标准溶液为客户提供，乙腈、甲醇等有机试剂为 Fisher 公司提供，超纯水为 Millipore公司超纯水机生产。其他未注明试剂均为分析纯，由国药集团试剂有限公司提供。 1.2标准溶液配制及样品前处理 1.2.1 标准溶液配制 标准溶液配配：取乳糖和蔗糖适量，按照药典方法加水溶解配置成 1mg/ml 的浓度。 1.3色谱条件 色谱柱类型 APS-2，4.6*250mm， 5Hm P/N： 30705-254630，S/N：14494， 14742 流动相组成 A：水，B：乙腈(70：30) 流速 1ml/min 检测器类型及工作参数 RI521，流通池温度：40℃ 柱温箱 40℃ 进样方式及体积 自动进样：10mL 二、分析结果与谱图 2.1重复性试验 取混合标准溶液(1mg/ml)连续进样6次，计算其保留时间和峰面积的 RSD 值，两个批次色谱柱的谱图与结果如下： 图1重复进样叠加谱图(n=6) Inj.Injection NameNo.Selected Peak： Type Ret.Time min n.a. Amount Rel.Area% uRIU*min uRIU min EP EP EP RI_1 Rl_1 RI_1 Ri_1 RI_1 RI_1 RI_1 Rl_1 RI 1 RI_1 [7.88..8.281 [7.88..8.28] [7.88..8.28][7.88..8.28] [7.88..8.28]仙 [7.88..8.2 [7.88..8.28] [7.88..8.28][7.88..8.28][7.88..8.28] 12014494 Sucrose+Lactose Unknown 8.078 n.a. 39.18 1.0211 4.01 BMB 0.231 1.13 n.a. 6782 12114494 Sucrose+LactoseUnknown 8.073 n.a. 38.39 0.9929 3.93 BMB 0.227 1.14 n.a. 6979 12214494 Sucrose+LactoseUnknown 8.068 n.a. 39.72 1.0331 3.99 BMB 0.229 1.29 n.a. 6856 12314494 Sucrose+LactoseUnknown 8.060 n.a. 38.35 1.0132 3.92 BMB 0.228 1.25 n.a. 6952 12414494 Sucrose+LactoseUnknown 8.052 n.a. 38.26 0.9974 3.99 BMB 0.227 1.08 n.a. 6972 125 14494 Sucrose+LactoseUnknown 8.047 n.a. 36.84 1.0150 4.02 BMB 0.228 1.22 n.a. Maximum 8.078 0.0000 39.72 1.0331 4.02 0.231 1.29 0.00 Average 8.063 n.a. 38.46 1.0121 3.98 0.228 1.18 n.a. Minimum 8.047 0.0000 36.84 0.9929 3.92 0.227 1.08 0.00 Standard Deviation 0.012 n.a. 0.98 0.0150 0.04 0.001 0.08 n.a. 0.15% n.a. 2.54% 1.48% 1.08%| 0.65% 6.66% n.a. 表1重复性计算结果(n=6) 图2重复进样叠加谱图(n=6) Inj.No.Selected Peak： min n.a. % pRIU*min pRIU min EP EP RI_1 RI_1 RI1 RI_1 RI1 RI_1 Rl_1 RI_1 RI_1 RI_1 [8.17..8.59] [8.17..8.591 [8.17..8.59][8.17..8.591 [8.17..8.591 [8.17..8.5 [8.17..8.591 [8.17..8.59][8.17..8.59][8.17..8.59] 307APS14742 Sucrose+La( Unknown 8.382 n.a. 37.81 0.9725 3.61 BMB 0.232 1.29 n.a. 7234 308APS14742 Sucrose+LacUnknown 8.373 n.a. 37.66 0.9562 3.58 BMB 0.235 1.26 n.a. 7057 309APS14742 Sucrose+LacUnknown 8.365 n.a. 37.46 0.9675 3.64 BMB 0.234 1.22 n.a. 7086 310APS14742 Sucrose+LacUnknown 8.357 n.a. 38.23 0.9716 3.66 BMB 0.233 1.24 n.a. 7099 311APS14742 Sucrose+LacUnknown 8.345 n.a. 37.71 0.9695 3.64 BMB 0.234 1.33 n.a. 7059 312APS14742 Sucrose+LacUnknown 8.340 n.a. 37.55 0.9481 3.61 BMB 0.233 1.20 n.a. 7121 Maximum 8.382 0.0000 38.23 0.9725 3.66 0.235 1.33 0.00 7234 Average 8.360 n.a. 37.74 0.9642 3.62 0.233 1.26 n.a. 7109 Minimum 8.340 0.0000 37.46 0.9481 3.58 0.232 1.20 0.00 7057 Standard Deviation 0.016 n.a. 0.27 0.0099 0.03 0.001 0.04 n.a 66 0.19% n.a. 0.71% 1.02% 0.82% 0.41% 3.55% n.a. 0.92% 表2重复性计算结果(n=6) 从图中可以看出，该方法有良好的重现性。 图1标准溶液分离谱图 第二种色谱柱结果：：Syncornis 氨基柱 一、实验材料 1.4仪器与试剂 1.4.1 仪器及设备 高效液相色谱仪： Thermo Fisher Dionex UltiMate 3000 HPLC；主要配置：泵：LPG-3400(含脱气机)；自动进样器： WPS 3000TSL(含100mL样品定量环)；柱温箱：TCC-3000。 1.4.2 标准溶液及试剂 标准溶液为客户提供，乙共、甲醇等有机试剂为 Fisher 公司提供，超纯水为 Millipore公司超纯水机生产。其他未注明试剂均为分析纯，由国药集团试剂有限公司提供。 1.5标准溶液配制及样品前处理 1.5.1 标准溶液配制 标准溶液配制：取乳糖和蔗糖适量，按照药典方法加水溶解配置成1mg/ml的浓度。 1.6色谱条件 色谱柱类型 Syncronis 氨基柱， 4.6*250mm， 5Hm P/N： 97705-254630，S/N：12156 流动相组成 A：水，B：乙腈(70：30) 流速 1ml/min 检测器类型及工作参数 RI 521，流通池温度：40℃ 柱温箱 40℃ 进样方式及体积 自动进样：10小L 二、分析结果与谱图 2.1重复性试验 取混合标准溶液(1mg/ml)连续进羊6次，计算其保留时间和峰面积的 RSD 值，两个批次色谱柱的谱图与结果如下： 图1i重重复进样叠加谱图(n=6) A B C D E F G H I J K IL M 1 Inj.1Injection Name Type Ret.Time Amount Rel.Area Area Height Type Width (50%) Asym. Resol. Plates 2 No.Selected Peak： min n.a. % pRIU*min pRIU min .EP EP EP 3 RI 1 RI_1 RI_1 RI_1 RI_1 RI_1 RI_1 RI1 RI_1 RI_1 4 [8.28..8.71][8.28..8.71l [8.28..8.71][8.28..8.71] [8.28..8.71][8.28..8.7[8.28..8.71]_ [8.28..8.71][8.28..8.71][8.28..8.71 5 338Syncronis12156 Sucros Unknown 8.495 n.a3. 42.89 1.1879 4.67 BMB 0.231 1.14 n.a. 7520 6 339Syncronis 12156 Sucros Unknown 8.498 n.a. 43.93 1.1938 4.60 BMB 0.230 1.21 n.a. 7560 7 340Syncronis12156 Sucros Unknown 8.500 n.a 43.02 1.1973 4.67 BMB 0.231 1.16 n.a. 7521 8 341Syncronis 12156 Sucros Unknown 8.503 n.a. 42.67 1.1588 4.59 BMB 0.228 1.15 n.a. 7730 9 342Syncronis 12156 Sucros Unknown 8.503 n.a. 42.29 1.2028 4.69 BMB 0.231 1.13 n.a. 7508 10 343 Syncronis 12156 Sucros Unknown 8.505 n.a. 44.12 1.2120 4.66 BMB 0.229 1.16 n.a. 7661 11 Maximum 8.505 0.0000 44.12 1.2120 4.69 0.231 1.21 0.00 7730 12 Average 8.501 n.a. 43.15 1.1921 4.65 0.230 1.16 n.a. 7583 13 Minimum 8.495 0.0000 42.29 1.1588 4.59 0.228 1.13 0.00 7508 14 Standard Deviation 0.004 n.a. 0.72 0.0183 0.04 0.001 0.03 n.a. .91 15 Relative Standard Deviation 0.04% n.a. 1.67% 1.53% 0.89% 0.57% 2.24% n.a. 1.20% 表1重复性计算结果(n=6) 从图中可以看出，该方法有良好的重现性。 第三种色谱柱结果： GOLD 氨基柱 一、实验材料 1.7仪器与试剂 1.7.1 仪器及设备 高效液相色谱仪： Thermo Fisher Dionex UltiMate 3000 HPLC； 主要配置：泵： LPG-3400(含脱气机)；：自动进样器：WPS 3000TSL(含100mL样品定量环)；柱温箱：：TCC-3000。 1.7.2 标准溶液及试剂 标准溶液为客户提供，乙腈、甲醇等有机试剂为 Fisher 公司提供，超纯水为 Millipore公司超纯水机生产。其他未注明试剂均为分析纯，由国药集团试剂有限公司提供。 1.8标准溶液配制及样品前处理 1.8.1 标准溶液配制 标准溶液配制：取乳糖和蔗糖适量，按照药典方法加水溶解配置成 1mg/ml的浓度。 1.9色谱条件 色谱柱类型 GOLD 氨基柱， 4.6*250mm， 5Hm P/N：25705-254630，S/N：14887 流动相组成 A：水，B：乙腈(70：30) 流速 1ml/min 检测器类型及工作参数 RI 521，流通池温度：40℃ 柱温箱 40℃ 进样方式及体积 自动进样：10mL 二、分析结果与谱图 2.1重复性试验 取混合标准溶液(1mg/ml)连续进样6次，计算其保留时间和峰面积的RSD 值，两个批次色谱柱的谱图与结果如下： 图1重复进样叠加谱图(n=6) Amount Rel.Area Area Height n.a. % uRIU*min uRIURI1 RI_1 RI_1 RI_1 TypeRl_1 Width (50%) Asym. min EPRl1 Rl1 Resol. RI_1 PlatesEP EPRI_1 [7.92..8.33][7.92..8.33][7.92..8.33][7.92..8.33] [7.92..8.3 [7.92..8.33] 22414887GOLD40 Sucrose Unknown 8.123 n.a. 37.99 0.9891 3.76 BMB 225 226227228229 14887GOLD40 Sucrose Unknown 8.113 14887GOLD40 Sucrose Unknown 8.10514887GOLD40 Sucrose Unknown 8.095 14887GOLD40 Sucrose Unknown 8.090 14887GOLD40 Sucrose Unknown 8.082 n.a. 39.45 1.0485 3.81 n.a. 37.17 1.0057 3.81n.a. 38.54 1.0167 3.87n.a. 38.04 0.9930 3.87 n.a. 38.92 0.9937 3.77 BMBBMBBMBBMBBMB 0.240 1.19 n.a. 63240.235 0.97 n.a. 65630.233 1.04 n.a. 66940.232 0.97 n.a. 67280.236 1.05 n.a. 6512 MaximumAverage Minimum 8.1238.1018.082 0.0000 39.45 1.0485 3.87n.a. 38.35 1.0078 3.810.0000 37.17 0.9891 3.76 0.240 1.19 0.00 67280.235 1.04 n.a. 65700.232 0.97 0.00 6324 Standard Deviation 0.015Relative Standard Deviation 0.19% n.a. 0.80 0.0224 0.05n.a. 2.09% 2.22% 1.26% 0.003 0.081.19% 7.93% n.a. 145n.a. 2.21% 表1重复性计算结果(n=6) 标准溶液第页/共页空白溶液 第页/共页 1.4 仪器与试剂1.4.1 仪器及设备高效液相色谱仪：Thermo Fisher Dionex UltiMate 3000 HPLC；主要配置：泵：LPG-3400（含脱气机）；自动进样器：WPS 3000TSL(含100μL样品定量环)；柱温箱：TCC-3000。1.4.2 标准溶液及试剂标准溶液为客户提供，乙腈、甲醇等有机试剂为Fisher公司提供，超纯水为Millipore公司超纯水机生产。其他未注明试剂均为分析纯，由国药集团试剂有限公司提供。1.5 标准溶液配制及样品前处理1.5.1 标准溶液配制标准溶液配制：取乳糖和蔗糖适量，按照药典方法加水溶解配置成1mg/ml的浓度。