水稻叶片中草酸根离子检测方案(离子色谱仪)

DCA327Vol.24.Suppl.2005-12第24卷增刊2005年12月分析试验室Chinese Journal of Analysis labnator：工R工! Vol.24.Sipp.2005-12第24卷增2005年12月少，分析试验室Chiese Joumal ofAnalysis orulory 离子色谱法测定水稻叶片中草酸根离子 徐 霞*，应兴华，谢黎虹 (农业部稻米及制品质量监督检验测试中心、中西水稻研究所，杭州310006) 摘 要：研究建立了带抑制电导检测器的离于色谱测定水稻叶片中草酸根离子的分析方法_祥品经去离子水超声提取后上机分析：采同离子交交分离，电导测定，外标法定量。C.O的最小检出量为1.25×10g，加标回收率为85.59~100.0%，相对标准偏差<5%： 草酸是一种最简单的二元羧酸，它在调节施Ca’法度、促进HNO，还原、诱导植物抗病性、整溶土壤中难溶性磷和缓解酸性土壤铝毒等方面起若重要作用，水稻片中含有大量草酸， Yoshi-hara 等在研究水稻抗性时，发现酸对褐稻虱有：拒食作用草酸一般以可溶性的评盐、钠盐或不，溶性的草酸钙结晶存在于水稻叶片的植物维胞中，其中以草酸钙结品最为普遍，且易于测定。而可溶性草酸盐是膨正和渗透调节的重要物质。国内外学者普采用高酸钾滴定法一测定植物体内草酸的含量，而有关植物体内游离态草酸根离子测定的研究则对较少+-8。因此，本文试将带抑制电导检测器的离子色谱用于水咛片中草酸离子的分析、研究了样品前处理和有关色谱条件，建了快速、准确、简便的分析方法： 实验部分 1.1 仪器和试剂 ICS-2000型离子包谱仪(美国， Dionex)，EC40导检测器和Chromeleon(r)色谱工作站： Di-cnex IonPacAS11 (250 mm x4 nm)分析柱，T-25型高速组织捣碎机(德国， IKA)，A-11型分析月研磨机(德国， IKA)， KQ-800TDE 型高频数控超声波清洗器(江苏)，恒湿水浴箱。 分析和测定用水均为去离子水(由Millipore 公问的纯水器制得)；草酸钠为工作基准试剂，购匀北京化学试剂研究所。 ( 作者简介： (1976-)，女，硕士研究生 ) 1.2标准溶液 C.O标准储备液用草酸钠配配浓度为1.0/.备用，测定时采用逐级稀彩法，用去离子水稀释成浓变分别为0、0.02、0.4、2、5、10、20 mg/L的系列作为标准曲线的试液。 1.3 样品前处理 将田间采集的水猫叶片清水洗后，用去离子水清洗、晾干。取一定最的叶片剪碎，置于研磨机中研碎混匀后，备用：准确称取样品0.5g(精确到0.000lg)， 加入 50 mL 去离子水，匀浆2 min(12000 r/min).于60℃超声提取30 min， 静置后将溶液转移至200ml.容量施.定容.取1 mL试液过微孔滤膜(孔径0.45 um)后进： 1.4 谱条件 EGC I -KOH 港洗液发生器，洗液浓度为10mmo!/L， 等度洗：流速1.0 mL/min； 柱湿和检测器湿度为30℃：控制器为 ASRS-ULTRAI(4mm)自动排制环模式，工作电流25m：样量25uL.以保留时间定性，外标峰面积法定量s 2 结果与讨论 2.1 淋洗液浓度的选择 为了获取最佳的分离效果，对淋洗液浓度进行了选择，见图1.当洗液浓度为 10 mmol/L5，C.O.的保留时闻为3.56 min， 图2为草酸根离子的标准色谱图。 图1 淋洗液浓度对阴子保留时间的影的 Fig.1 Retention times of anio：15 ai different eluent coneen-trations 图2 标准样品的色谱图 Fig.22CChromatugram of C.O.- standard solution 2.2 提取方法的选择 对一样品分别用超声提取和沸水浴°两种提取方法去定in=6).测定平均值分别为14.33和14.42 mglg： 两法的相对误差<5%：经F检验结果显示两者无显奢差异(p>0.05). 2.3 工作曲线和检出限 在选定的色谱条件下，以C.0.浓度(pg/mL)为横坐标，以峰面积(ps*min)为纵坐标，作面积对浓度标准曲线，得回归方程：y=0.1257x-0.0066，相关系数为0.9999(n=6)，C0.在0.02~20 ug/mL 范围内呈良好线性关系。按 S/N=3，C.O.的最小检出量为1.25×10-g：称样0.5g时，方法的最低检出限为2 mg.kg： 2.4 精密度和准确度 对网一样品按"1.3"所述处理后进行11次洲定，相对标准偏差 RSD<5%。采用标准加人法进行回收率试验，结果见表1.图3~4为样晶中C.O.的色谱图及标准添加色谱图。 表1 回收率测定结(n=6) Tab.1 The recovery of oxalaic from sumples (n=6) 加人量 本底值 定们 国率 标准偏差 ((mg/g) /(mg/g) /(mg/g) /% 1.0 14.42 15.34 92.0 3.9 5.0 114.42 19.-2 100.0 2.1 10.0 14.42 22.97 85.5 4，5 图3 样品的色谱图 Fig.3Chromtogram of siriple 4 添标样品的色图 Fig.4 Chromatogram of sample spiked with 5. 0 mgigC0. 3 结论 离子色谱法能快速、准确的测定水稻叶片中的草酸根离子，方法重现性好、精密度高。该方法也可用于各种植物样品中草酸根离子的检测，同时对探讨植物中各种形态草酸的代谢和生理功能也具有一定的实际意义。 致谢：感谢水稻生物学国家重点实验室陈红旗理研究员为本研究提供水桶试验材料。 ( 参考文献 ) ( 1 Yushihara T， Sogawa K ， Pathak M D et a f . Ent Exp App： 1979， 26： 314 ) ( B u ker CJ L. Analyst， 1954 ， 77： 340 ) .3Assuciation of Oficial Analvtical Chemists. Official meilodsof analysis， 1980， 13th edn. AOAC， Washirglon， DC，5F Ii：Y. Anal Sci， 1991， 7： 263 锻、刘刘压，贺清等.营养学报，1990，121)： 岩，徐素君.食品科学，1993，7：62 锋，世芬，候小平等.色谱，1995， 13(5)：395 俞乐，彭新，杨崇等.分化学，2002，30(9)：1119 Determination of oxalate in rice by ion chromatography AU Xic"，YING Xing-hua and Xie Li-hong (Rice Pruduct Quality Supervision and lnspection Cen-ter， Ministry of Agriculture， China National Rice Re-search Institute， Hangzhou 310005) Abstract： A rapid and sinple methud for determinationof oxalate in rice by ion chromatograpby with suppreedconductivity detector was developed. The calate wasexlracteci from samples with 50℃ deionized water underultrsontication. An aniot-exchange coluran (250 mm×4 mm) and suppressed conductivily detector were en-ploved. Externel standard method was used for the quan-titative analysis. The detection limits of oxalate was 1.25×10 g. The recovery o proposed nethod ranged fron85.5% to 100.0% and the relative standard deviationwas less thian 5%. Keywords：Ion chromatography； Rice； Oxelate —