饲料中脂肪酸检测方案(气相色谱仪)

ThermoFisherS CIENTIFICThe world leader in serving science 方法开发报告：：2014-APP-GC饲料中的脂肪酸测定-气相色谱法 检测项目 脂肪酸 样品基体 饲料 仪器型号 Thermofisher GC 1300 系列： 主机： GC1310 自动进样器： AS1310自动进样器 进样口： SSL进样口 检测器： FID检测器 色谱柱类型尺寸、S/N号及柱温 TR-FAME， 100 m， 0.25 mm， 0.20 um(P/N：260M238P，S/N： 0036515)； 柱温采用程序升温条件如下：60℃(保持1 min)；20℃/min 到160℃， 保持2 min， 4℃/min 到 240℃( 保持 15 min)。 检测器类型、工 检测器温度：280℃，氢气35mL/min，空气350mL/min， 尾吹气氮气40mL/min。 作参数 载气类型及流速 载气为高纯氮气(纯度99.999%)；；恒流模式，流速1.0 mL/min。 进样方式及进样体积 进样口为 SSL 进样口，温度：260℃，进样模式 split， 分流比，10：1。 方法开发者 吕建霞 分析时间 2014.05.26-05.28 审核人 余翀天 1. 简介 脂肪酸是体脂肪的重要组成成分，可以提高日粮中能量质量浓度，调节能量代谢。直接由饲料或动物体内代谢产生的游离脂肪酸和甘油脂是动物维持生命活动和生产的重要能量来源。在畜禽日粮中添加一定的脂肪酸可替代等能值的糖类和蛋白质，不仅可以改善日粮的适口性，还能提高日粮代谢能，使消化过程中能量消耗减少，热增耗降低，增加日粮静能。饲料中添加脂肪酸可以增加动物体脂肪的沉积，并且不饱和脂肪酸可以在猪和禽体内不经过氢化直接沉积在体脂肪中。对于多数哺乳动物(包括人类)，亚油酸是一种最重要的脂肪酸，必须由日粮供给，其次是亚麻酸，花生四烯酸则可由亚油酸在动物体内通过碳链加长和双键形成而生成。对饲料中脂肪酸组成成分分析具有重要的意义。本方法依据国家标准《GB/T21514-2008饲料中脂肪酸含量的测定》开发了饲料中脂肪酸组成分 析的气相色谱检测方法，方法简单，结果可靠。 2.标准品配制和试剂准备 脂肪酸甲酯标准溶液(10mg/mL) 购自 supelco， 包含37种组分，各组分浓度见表1。该溶液用甲苯稀释至适合浓度可以上气相色谱仪分析。 试剂：碳酸钠溶液，准确称取6g无水碳酸钠，加水溶解并定容至100 mL；甲苯，色谱纯；乙酰氯甲醇溶液：容取40mL 甲醇于 100 mL 干燥的烧杯中，准确吸取 5.0 mL 乙酰氯逐滴缓慢加入，不断搅拌，冷却后转移并定容至50 mL 干燥的容量瓶中。 3.样品处理 称取0.5 g待测样品于15 mL 干燥螺口玻璃管中，加入5.0 mL甲苯，加入10%乙酰氯甲醇溶液6.0 mL， 旋紧螺旋盖，振荡混合后于80℃±1℃水浴中放置2h，期间间隔 20 min 取出振摇-次，水浴后取出冷却至室温。将反应后的样液转移至 50 mL 离心管中，分别用3.0 mL 碳酸钠溶液清洗玻璃管三次，合并碳酸钠溶液于 50 mL离心管中，混匀，5000转/分钟离心约5 min。 取上清液作为试液，气相色谱仪测定。若测定浓度不在线性范围内，则稀释进样。 4.标准品谱图 总浓度为 400mg/L 的脂肪酸甲酯标准溶液的气相色谱图见图1。由图可见，37种脂肪酸甲酯在100m的脂肪酸分析专用柱上得到了完全分离 In 、山寸 6g912.515.017.520.022.525.027.530.032.535.08739.2 5. 方法线性情况和实际样品测定 用标准样品配制成总浓度分别为20pg/mL， 40 ug/mL， 100 ug/mL， 200 ug/mL， 400 pg/ml的系列标准工作液，进样1uL，然后按照以上所述的测定方法进行 GC-FID 测定，以标准物质的浓度为横坐标，以各标准物质的峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得到各种脂肪酸甲酯的线性相关系数列于表1中。检测限以3倍信噪比计算，结果列于表1中。 表1各脂肪酸种类、保留时间、线性相关系数、检出限及脂肪酸甲酯转化为脂肪酸的换算系数一览表 C24：0 34.282 4% 0.9985 0.9963 C20：5n3 35.910 2% 0.9984 0.9557 C24：1n9 36.943 2% 0.9990 0.9632 C22：6n3 38.423 2% 0.9919 4.8 0.9590 采用本方法测定了猪前期饲料、猪预混饲料、鸡混合饲料三种样品中的脂肪酸含量，测定谱图见图2，各检测结果列于表2中。 ..196 图2猪前期饲料测定谱图(上图为标准品， 下图为实际样品) 样品中各脂肪酸的含量按如下公式计算： 式中： X一试样中各脂肪酸的含量，单位为毫克每千克(mg/kg)； C-一上机溶液中各脂肪酸甲酯的浓度，单位为毫克每升(mg/L)； V―—甲苯的体积，单位为毫升(mL)； F——各脂肪酸甲酯转化为脂肪酸的换算系数，参见表1； mn—―试样的称样量，单位为克(g)。 表2样品检测结果(单位， mg/kg) 化合物 鸡饲 猪前期饲 猪预浓缩 料 料 饲料 C22：6n3 n.a. n.a. 6.可行性建议 本方法将饲料中的脂肪酸采用乙酰氯-甲醇溶液甲酯化后，甲苯提取，采用赛默飞全新的气相色谱仪检测，方法简单，灵敏度高，能够用于日常的脂肪酸成 分分析的工作中。 技科尔世 脂肪酸是体脂肪的重要组成成分，可以提高日粮中能量质量浓度，调节能量代谢。直接由饲料或动物体内代谢产生的游离脂肪酸和甘油脂是动物维持生命活动和生产的重要能量来源。在畜禽日粮中添加一定的脂肪酸可替代等能值的糖类和蛋白质，不仅可以改善日粮的适口性，还能提高日粮代谢能，使消化过程中能量消耗减少，热增耗降低，增加日粮静能。饲料中添加脂肪酸可以增加动物体脂肪的沉积，并且不饱和脂肪酸可以在猪和禽体内不经过氢化直接沉积在体脂肪中。对于多数哺乳动物（包括人类），亚油酸是一种最重要的脂肪酸，必须由日粮供给，其次是亚麻酸，花生四烯酸则可由亚油酸在动物体内通过碳链加长和双键形成而生成。对饲料中脂肪酸组成成分分析具有重要的意义。本方法依据国家标准《GB/T 21514-2008 饲料中脂肪酸含量的测定》开发了饲料中脂肪酸组成分析的气相色谱检测方法，方法简单，结果可靠。 本方法将饲料中的脂肪酸采用乙酰氯-甲醇溶液甲酯化后，甲苯提取，采用赛默飞全新的气相色谱仪检测，方法简单，灵敏度高，能够用于日常的脂肪酸成分分析的工作中。