稻草秸秆中木质素纤维素检测方案(纤维测定仪)

《上海畜牧兽医通讯》2001年第2期15·◎1994-2006 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http：//www.cnki.net 稻草秸秆中木质素、纤维素测定方法的研讨 薛惠琴杭怡琼i陈谊 (上海市农业科学院畜牧兽医研究所 201106) 测定木质素、纤维素含量的方法很多，如纤维素含量的测定方法有浓酸水解定糖法、硝酸乙醇法、氯化法等；木质素含量的测定方法有浓酸水解法、紫外分光光度法、红外光谱定量分析法和同位素标记法。由于红外光谱法和同位素标记法对实验室要求较高，所以应用并不普遍。我们常用的是浓酸水解法。本试验应用中性洗涤剂法、2M HCl水解法、72%H SO4 水解法及灰化法综合运用，一次性进行木质素、纤维素的测定，并将灰化时间缩短至 3h ，所得结果较为准确。现将方法介绍如下： 1 材料与方法 1.l 材料 稻草经机器粉碎成1cm长纸环，粉碎成1cm长稻草粉分分经Z17、921 和1024三种白腐真菌菌株发酵，每周取样一次，共7周。 1.2主要试剂 中性洗涤剂：按 Van Soest 方法配制； 2M盐酸溶液：167ml浓盐酸(比重1.19)用蒸馏水定溶至1000ml； 72%浓酸溶液：665mlHSO4(比重1.84)加入300ml 水中，冷至20℃，补加水至1000ml。 1.3 方法 取经80h烘至衡重的三个菌株各5g。 1.3.1 取1.0000g样品置于100ml碘瓶中，加入70ml中性洗涤剂，之后放入已沸的高压锅，100℃保温40min ，115~121℃保保温 20min，取出用3号30ml沙芯甘埚过滤至pH6.5~7.0，依次用95%乙醇、无水乙醇和丙酮洗涤2次，将残渣置真空干燥器中，干燥20min。1.3.2将残渣连同埚置于100ml烧杯中，加入70ml2M盐酸溶液，然后放入已沸的高压锅，100℃保温50min ，过滤至中性，依次用95%乙醇、无水乙醇和丙酮洗涤2次，浅渣80℃烘至衡重为Wi。 1.3.3 将残渣连同埚置于150ml 烧杯中，加入10ml致冷的72%硫酸，20°降解4h，后加入90ml蒸馏水，室温过夜，次日用蒸馏水洗残渣至pH6.5，烘干至衡重为W2，W1-W2为纤维素的含量。 1.3.4 将残渣在550℃马福炉中灰化，干燥器中平衡至衡重为 W3，W2-W3即为木质素的含量。 2 结果与讨论 本测定方法是在原有方法基础上加以改进，按照王玉万(1987)半纤维素、纤维素、木质素系统定量分析程序方法，纤维素测定前两步同上面方法(1.3.1、1.3.2，1.3.3)采用丙酮洗2次，60℃干燥，然后置入100ml烧杯，加入10ml 72%H SO4 ，20℃水解3h，然后加入90ml蒸馏水，室温过夜，次日用已称恒重的3号砂芯埚过滤，水洗残渣至pH6.5，将滤液经适当稀释，取1ml稀释液加4ml蒽酮试剂，100℃保温 10min ，于620nm测OD 由葡萄糖标准曲线求出糖量，乘上系数0.9，求得纤维素，将残渣80℃烘干，干燥器冷却30min，称重；在550℃马福炉中灰化4小时，干燥器冷却 30min ，称重，前者称重数减去后者称重数即为木质素含量。而经我们改进后的方法就直接按上面方法(1.3.3，1.3.4)，所测结果见表1。 表1三个菌株在不同培养时间的木质素和纤维素的含量 (单位：%) 菌株 0天7天14天21天28天35天42天49天 木 Z17 16.63 13.76 12.7812.0111.5911.0210.349.89 质 921 16.6314.04 13.19 12.68 11.9811.1810.73 10.3 素 102416.6314.4313.5812.5912.0511.42 11.0210.87 纤 Z17 30.3528.7426.9625.8624.99 24.29 23.92 23.12 维 921 30.35 28.7326.56 25.21 24.2623.85 23.42 22.72 素 102430.3528.62 27.56 27.0626.6225.88 25.525.03 三个菌株的木质素由接种前含16.63%经49d培养分别减少至9.89%、10.30%、10.87%，纤维素含量由接种前含30.35%经49d培养后分别减少至23.12%、22.72%、25.03%，说明木质素、纤维素含量都明显减少，同我们以往所做的分析结果基本相似。并且有以下几方面优点：(1)节约试剂：按照王玉万(1987)方法，纤维素含量的测定需要蒽酮试剂，并且蒽酮试剂需要现配现用，相对来说我们的方法比较简便，同时减轻了工作量；(2)减少人员，节约电源：王玉万的方法灰化需要 4h ，现在只要3h 就可灰化好。而且所测结果同以往我们所做的分析结果基本相似。说明在不考虑酸溶木质素含量和不需了解培养物中木质素、纤维素的绝对含量时，本测定方法是可行的。