去乙酰毛花苷注射液中有关物质检测方案(气相色谱仪)

应用文集 ThermoFisherS CIENTIFIC DGLC-21 双三元串联快速分析去乙酰毛花苷注射液有关物质 关键词： 串联；去乙酰毛花苷；有关物质；双三元 DGLC-21 Rapid analysis of related substances in Deslanoside injection byDGLC with tandem mode Key words： tandem mode， Deslanoside injection， related substances， DGLC 引言 在梯度分析方法中，色谱柱在梯度程序中分离样品后，还需要再经过冲洗与平衡阶段才能进行下一个样品分析。在这段时间里，进样器、柱温箱与检测器都处于闲置状态，若将该段时间用于下一个样品分析，则分析时间可节省20%~50%。运用双三元串联与柱切换技术，将右泵用于在线分析样品，左泵用于离线清洗与平衡，色谱系统共享进样器、柱温箱和检测器，两根色谱柱交替使用进行样品分析。 本文利用双三元液相串联技术快速分析去乙酰毛花苷注射液中有关物质，分析时间可节省约50%。 测试条件 仪器： Ultimate DGP 3600 系列，包括带有在线脱气单元的双三元梯度泵；带有一个十通阀的柱温箱；紫外检测器。连接图见图1。 色谱柱： Acclaim 120A Ci8，5um 4.6×150mm (PN：059148， SN：003534，003816) 柱温：30℃ 检测波长：220nm 进样量：20pL 流动相：A：水，B：甲醇-乙腈(14：22) 梯度程序：见表1 图1仪器连接图 表1梯度程序 左泵(离线清洗与平衡) 右泵(分析) 时间(min) 流速(ml/min) B% 时间(min) 流速(ml/min) B% 0 1.0 52 0 1.0 38 18 1.0 52 15 1.0 38 19 1.0 38 21 1.0 52 25 1.0 38 25 1.0 52 样品前处理方法 取本品做为供试品溶液。精密量取供试品溶液 1ml 置100ml量瓶中，用流动相A稀释至刻度，制成每1ml约含去乙酰毛花苷2.0ug的溶液，做为对照品溶液。 结果和讨论 对照品和样品色谱图 图2对照品与样品比较谱图 图3样品溶液色谱图 表2样品测定结果 No. Peak name Ret.Time Area Height Rel.Area Resolution (min) (mAU*min) (mAU) (%) 1 n.a. 3.873 1.6466 12.297 2.81 4.79 2 n.a. 5.093 1.1044 5.796 1.89 6.16 3 n.a. 7.313 0.1130 0.440 0.19 3.04 4 去乙酰毛花苷 8.727 54.6012 171.834 93.28 2.62 5 n.a. 10.117 0.9429 2.720 1.61 32.10 6 n.a. 24.553 0.1292 0.625 0.22 n.a. Total： 58.5373 193.713 100 去乙酰毛花苷保留时间与峰面积重复性 表3去乙酰毛花苷保留时间与峰面积重复性 Sample No. Sample Name Ret.Time(min) Area(mAU*min) 17 Sample 8.640 54.7141 18 Sample 8.727 54.6012 19 Sample 8.640 54.556 20 Sample 8.737 54.5700 21 Sample 8.637 54.4501 22 Sample 8.733 54.5637 Average： 8.686 54.5758 Rel.Std.Dev： 0.59% 0.16% 串联分析与药典方法比较 图4药典方法 图5串联分析 结论 本文运用双三元串联分析去乙酰毛花苷注射液中有关物质，通过柱切换技术达到高通量快速分析，在线样品分析时间为26分钟，较药典方法分析时间节省约49%。 在双三元串联应用中，应最大程度使待测成分在两根色谱柱上具有相同保留行为，同时应满足系统适应性要求，以利于定性和定量分析。 在有关物质分析应用中，应先按照药典方法进行方法确认(重现性)，在此过程中可以筛选适合的色谱柱，同时能够确定样品中的杂质信息，有助于设置系统切换时间。由于软件自动设置切换时间时，可能会导致部分杂质信息丢失，因此应基于前述信息中通过修改软件设置改正系统切换时间以保证杂质信息的完整。 在系统切换之前，应保证进样器、柱切换阀和色谱柱之间的管路系统已清洗干净(可适当提高流速)且系统回复到分析流动相初始状态，以避免溶剂引起干扰。 在程序文件中设置进样器旁路 (InjectValveToLoad)模式使进样器在进样完成后处于抽取样品状态，与离线平衡色谱柱处于相同流动相的环境中，从而避免在下次进样中因梯度变化造成干扰。 在程序文件中应始终保持命令 (NextColumn) 处于程序中的最后，即始终处于End 的前一行，才能在下一次进样时进行色谱柱切换。 。      本文运用双三元串联分析去乙酰毛花苷注射液中有关物质，通过柱切换技术达到高通量快速分析，在线样品分析时间为26 分钟，较药典方法分析时间节省约49%。在双三元串联应用中，应最大程度使待测成分在两根色谱柱上具有相同保留行为，同时应满足系统适应性要求，以利于定性和定量分析。在有关物质分析应用中，应先按照药典方法进行方法确认（重现性），在此过程中可以筛选适合的色谱柱，同时能够确定样品中的杂质信息，有助于设置系统切换时间。由于软件自动设置切换时间时，可能会导致部分杂质信息丢失，因此应基于前述信息中通过修改软件设置改正系统切换时间以保证杂质信息的完整。