奶粉中三聚氰胺检测方案(液相色谱仪)

奶粉中的三聚氰胺检测 一.什么是三聚氰胺       一种三嗪类含氮杂环有机化合物，重要的氮杂环有机化工原料。简称三胺，又叫2 ,4 ,6- 三氨基-1,3,5-三嗪、1,3,5-三嗪-2,4,6-三胺、2,4,6-三氨基脲、蜜胺、三聚氰酰胺、氰脲三酰胺分子式C3N6H6、C3N3(NH2)3，分子量126.12。 性状为纯白色单斜棱晶体，无味，密度1.573g／cm3 (16℃)。常压熔点354℃（分解）；快速加热升华，升华温度300℃。溶于热水，微溶于冷水，极微溶于热乙醇，不溶于醚、苯和四氯化碳，可溶于甲醇、甲醛、乙酸、热乙二醇、甘油、吡啶等。低毒。在一般情况下较稳定，但在高温下可能会分解放出氰化物。 　　呈弱碱性（pKb=8），与盐酸、硫酸、硝酸、乙酸、草酸等都能形成三聚氰胺盐。在中性或微碱性情况下，与甲醛缩合而成各种羟甲基三聚氰胺，但在微酸性中（pH值5.5～6.5）与羟甲基的衍生物进行缩聚反应而生成树脂产物。遇强酸或强碱水溶液水解，胺基逐步被羟基取代，先生成三聚氰酸二酰胺，进一步水解生成三聚氰酸一酰胺，最后生成三聚氰酸。 二. 三聚氰胺的用途 一种基本有机化工中间产品，主要是作为生产三聚氰胺甲醛树脂（ MF ）的原料。三聚氰胺还可以作阻燃剂、减水剂、甲醛清洁剂等。该树脂硬度比脲醛树脂高，不易燃，耐水、耐热、耐老化、耐电弧、耐化学腐蚀、有良好的绝缘性能、光泽度和机械强度，广泛运用于木材、塑料、涂料、造纸、纺织、皮革、电气、医药等行业。其主要用途有以下几方面： 　　 （ 1 ）装饰面板：可制成防火、抗震、耐热的层压板，色泽鲜艳、坚固耐热的装饰板，作飞机、船舶和家具的贴面板及防火、抗震、耐热的房屋装饰材料。 　　 （ 2 ）涂料：用丁醇、甲醇醚化后，作为高级热固性涂料、固体粉末涂料的胶联剂、可制作金属涂料和车辆、电器用高档氨基树脂装饰漆。 　　 （ 3 ）模塑粉：经混炼、造粒等工序可制成蜜胺塑料，无度、抗污，潮湿时仍能保持良好的电气性能，可制成洁白、耐摔打的日用器皿、卫生洁具和仿瓷餐具，电器设备等高级绝缘材料。 　　 （ 4 ）纸张：用乙醚醚化后可用作纸张处理剂，生产抗皱、抗缩、不腐烂的钞票和军用地图等高级纸。 　　 （ 5 ）三聚氰胺甲醛树酯与其他原料混配，还可以生产出织物整理剂、皮革鞣润剂、上光剂和抗水剂、橡胶粘合剂、助燃剂、高效水泥减水剂、钢材淡化剂等。 三.三聚氰胺的危害       目前三聚氰胺被认为毒性轻微，大鼠口服的半数致死量大于3克/公斤体重。据1945年的一个实验报道：将大剂量的三聚氰胺饲喂给大鼠、兔和狗后没有观察到明显的中毒现象。动物长期摄入三聚氰胺会造成生殖、泌尿系统的损害，膀胱、肾部结石，并可进一步诱发膀胱癌。1994年国际化学品安全规划署和欧洲联盟委员会合编的《国际化学品安全手册》第三卷和国际化学品安全卡片也只说明：长期或反复大量摄入三聚氰胺可能对肾与膀胱产生影响，导致产生结石。 四．三聚氰胺的检测方法 材料与方法 1.1仪器与试剂 1.11仪器: STI 500 高效液相色谱仪,配紫外检测器,高速冷冻离心机,旋涡混合器,Oasis MCX固相萃取小柱(60mg/3ml) 1.12试剂: 三聚氰胺标准品(99.5%),标准储备液(1mg/ml)用甲醇配置,4℃保存;标准中间液用20%甲醇溶液由储备液稀释; 标准工作液用20%甲醇溶液由标准中间液稀释;甲醇和乙腈(色谱纯),柠檬酸,辛烷磺酸钠,氨水,乙酸铅(分析纯);超纯水 1.2样品前处理 1.21样品前处理步骤： 标准样品配制： 取 50mg三聚氰胺标准品， 以 20%甲醇溶解定容至 50mL 得到 1000ppm的标 准溶液，使用时，以提取液(1%三氯乙酸)稀释至所要的浓度。 2.2 提取： 称取饲料/奶粉样品 5g (或牛奶 10ml)，加入 50ml 1%三氯乙酸提取液，充 分混匀，加入 2mL 2%乙酸铅溶液，超声 20min。然后取部分溶液转移至 10mL 离心管中，8000rpm/min 离心 10min，取上清液 3mL 过混合型阳离子交换小柱 (PCX)。 2.3 净化(MCX小柱，60mg/3mL) ： 1) 活化及平衡：3mL甲醇，3mL水 2) 上样：加入提取液 3mL 3) 淋洗：3mL水；3mL 甲醇；弃去淋洗液并将小柱抽干。 4) 洗脱： 5mL 5%氨化甲醇(v/v)洗脱。 (5%氨化甲醇的配制： 5mL氨水+95mL 甲醇)。 5) 浓缩：50℃，氮气吹干，20%甲醇/水定容至 2mL。 3.1色谱条件 色谱柱为热电Hypersil GOLD C8 4.6×250mm;流动相为辛烷磺酸钠-柠檬酸, 乙腈混合溶液(称取2.16克辛烷磺酸钠和2.10克柠檬酸于1L的容量瓶中,用水溶解并稀释至刻度,9;1,V:V)检测波长为240nm,流速为1.0nm/min,进样量为20ul.柱温40℃ 关于三聚氰胺的问答 1、 为什么按照奶粉的国家标准进行检测，三聚氰胺没有被检查出来？ 答：我国国家标准中，对奶粉的检测主要是蛋白质、脂肪、细菌含量等的检测，三聚氰胺是一种化工产品，是不允许加到食品中去的，所以在检查中没有这个项目的检测。所以在正常情况下，很少有人会想到去做该项目的检测。 2、 食品中为什么会加三聚氰胺？ 答：食品中进行蛋白质含量检测是一项常规的检测项目，做蛋白质含量的方法很多，最经典的是用凯氏定氮的原理，在这种方法的检测中，食品中加入三聚氰胺可以增加里面中的含氮总量，氮总量增加，从而蛋白质含量增加，这就是食品企业中添加三聚氰胺的缘由。 3、 为什么液相色谱是三聚氰胺检测的主要仪器？ 答：目前做三聚氰胺检测的主要设备是GC-MS、HPLC-MS和HPLC，前两者由于既可定性也可定量及高灵敏度和适用范围，是国家质检机构做三聚检测的主要设备，但由于这种设备价格十分昂贵，一般的食品生产企业很难承受，所以，通过标准品定性、液相色谱设备定量就成为了大多数企业的选择。 4、 液相色谱是不是只能用做三聚氰胺的检测？没有其它的用途？ 答：高效液相色谱（HPLC）是一种现代液体色谱法，其基本方法是将具一定极性的单一溶剂或不同比例的混和溶剂作为流动相，用泵将流动相注入装有填充剂的色谱柱，注入的式样被流动相带入柱内进行分离后，各成份先后进入检测器，用记录仪或数据处理装置记录色谱图或进行数据处理，得到测定结果。简单地说，液相色谱是一种分离技术，不同的样品只要选择相应的色谱条件和色谱检测器，大都可以得到满意的检测结果。现有自然界的已知物质中，70-80%的物质都可以用液相色谱来进行检测。仅在食品行业中，食品里含有的毒素、添加剂、农药残留等很多都是用液相色谱的方法。并不只是单单检测三聚氰胺。 5、 做三聚氰胺检测是不是必须要用进口设备？国产的仪器不行？ 答：经过我公司工程师的实验证明，国产的液相色谱完全可以胜任三聚氰胺的检测。