饮料中糖检测方案(液相色谱仪)

HPLC法测定饮料中糖 刘平年 摘要：应用氨基柱和示差检测器分离测定了饮料中的果糖、葡萄糖和蔗糖，对示差检测器的使用进行了讨论。 关键词：HPLC，糖，示差检测器，饮料 1． 剂和仪器 1．1试剂 乙腈（色谱级，美国天地），水（超纯水），果糖、葡萄糖、蔗糖购自上海试剂公司 1．2仪器 WATERS HPLC:WATER 401示差检测器，WATERS 510Pump，UBONDPAK NH2氨基柱，U6K进样器 2． 实验 2．1色谱条件 流动相：水－乙腈80：20，流速：1.0ml/min，进样量：20ul，操作温度：室温（以空调恒温），检测器灵敏度：X8 2．2样品制备 称取果糖、葡萄糖、蔗糖各100mg于10ml容量瓶，溶解后稀释至刻度，实验配制成0.25mg/ml、0.5 mg/ml、1 mg/ml、5 mg/ml、10 mg/ml作为标准曲线。 吸取待测饮料10ml，定容至50ml，混匀后用0.45um膜过滤。 3． 结果与讨论 3．1保留时间和分离情况 在上述色谱条件下，分别对含三种糖的标准溶液及两种饮料进行了分析，色谱图见图1 a，果糖、葡萄糖，蔗糖标准谱图 b，青苹果饮料谱图 c，苹果醋饮料谱图 1.果糖，2.葡萄糖，3.蔗糖 图1，标准溶液及两种饮料的色谱图 3．2标准曲线 标准曲线入下表： 组分 线性回归方程 相关系数 果糖 Y=232047x - 5816 r=0.9999 葡萄糖 Y=353396x - 24126 r=0.9991 蔗糖 Y=342804x - 74198 r=0.9954 3．3操作温度对示差检测器的影响 理论上对示差检测器的操作温度有很严格的要求,文献上的值一般为0.001℃,但实际上很难达到这个值,本方法在操作时采取检测器及柱子均不控温,而实验室由空调整体控温,并减少室内空气的流动,这样能使仪器整体处于相对稳定的温度下,系统平衡时间较短,一般1、2个小时便能平衡，平衡后基线不易变化。下面是在5小时内进行不同样品测定的保留时间变化的情况。 组分 保留时间（min） RSD（％） 果糖 7.238 7.225 7.195 7.301 7.265 7.178 7.205 7.198 0.56 葡萄糖 7.598 7.598 7.468 7.665 7.601 7.515 7.538 7.498 0.87 蔗糖 8.825 8.828 8.708 8.898 8.851 8.708 8.748 8.808 0.73 3．4流动相对示差检测器响应的影响 流动相对检测器的影响主要是气泡问题，如流动相未脱气或脱气不完全基线便不能稳定，而且出现鬼峰，所以流动相脱气一定要彻底，一般用超声脱气10分钟就可以了。至于预混或在线混合问题不是很大。 3．5参比液对检测器响应的影响 一般在实验中参比液均为静态参比，参比液的操作对色谱响应的影响相当大，经实验，用水作参比液比用流动相作参比响应小，而用新鲜的流动相作参比液比用隔夜的参比液响应值可增加4倍。所以参比液应采用脱气完全的新鲜的流动相，在线混合的系统可取废液管流出的已混合的流动相，可以保持参比池和流动池中溶液的一致。 4． 结论 这是一个应用Waters401示差检测器测定糖的实列，由于仪器型号较老，测试条件不易控制。我们采用控制室温，主要是空调加减少空气流通的方法来稳定系统温度，应用新鲜流动相来做参比液，应用超声脱气来控制参数，实现了这一测试。 1 2 12 3 3 12 3