水产品鳗鱼中硫丹检测方案(气相色谱仪)

水产品鳗鱼中硫丹的检测 孙茂营；詹小冈 厦门龙鹏食品有限公司，厦门，361000 摘要：硫丹作为一种农药，多见报道于农作物中残留的检测，而对于在水产中的检测还未见过，本文重点研究硫丹在水产品鳗鱼中检测的方法，使用乙腈提取，正己烷除脂，过PSA 固相萃取柱，进气相色谱使用电子捕获检测器检测。 关键词：鳗鱼 硫丹 气相色谱 电子捕获检测器 1、引言 硫丹属于一种有机氯农药多用在农作物，但由于日本在一批输日活鳗中检测到硫丹，要求我国出口日本的鳗鱼必须检测硫丹。硫丹的检测方法多见于农作物的检测，对于鳗鱼中硫丹残留的检测，目前CIQ有检测，但使用凝胶渗透色谱法除杂质，成本较高，对于企业很难承受。为了能够开发一种既经济又可靠的方法，本文将重点研究检测方法。 2、实验部分 2.1仪器 GC-2010(配ECD检测器、自动进样器) 日本岛津公司 色谱柱Rtx-5(30m ×0.25mm ×0.25cm) 固相萃取装置(24孔) 美国 Waters DBL-100离心机 上海飞鸽 均质机 德国 Iega 旋转蒸发仪 2.2试剂 超纯水 α-硫丹(纯度≥99%)优级纯 美国 sigma 公司 β-硫丹(纯度≥99%)优级纯美国 sigma 公司丙酮分析纯天津永大公司乙腈分析纯天津永大公司正己烷分析纯天津永大公司PSA 固相萃取柱美国 Supelco 高纯氮气(纯度>99.999%) 林德气体 2.3标准溶液的配制及工作曲线的制作 准确称量 0.01g(精确至0.1mg)α-硫丹和β-硫丹，将其分别放入两个100ml 的容量瓶中，使用丙酮定容至100ml，得到的浓度为 100cg·ml-1的α-硫丹和β-硫丹标准储备液，各取 1ml放入10ml的容量瓶中，用丙酮定容至10ml，即得到1og·ml的混合标准溶液。在将其分别稀释至0.1、0.05、0.02、0.01og·ml-的供工作曲线绘制的标准溶液。 2.4实验方法 取鳗鱼肉(各使用部位)约200g，将其绞成肉泥，称取5g放入50ml的A茶色离心管中，加入20ml的乙腈，在B茶色离心管中加入20ml的乙腈，将A茶色离心管均质机同时用B茶色离心管中的乙腈清晰均质机刀头，放入超声波清洗机中超声 5min， 离心5min (2500r/min)，将上清夜倒入120ml的分液漏斗中，将B茶色离心管中的乙腈倒入A茶色离心管中，摇匀，再超声提取一次。合并两次的上清夜于分液漏斗中，在分液漏斗中加入20乙腈饱和正己烷，剧烈振摇，静置20min。将下层液放到茄型瓶中旋转蒸发至干，用2ml的乙腈溶解残渣，准备过固相萃取柱。 准备固相萃取柱，用5ml的乙腈活化，加入用乙腈溶解的残渣，用茄型瓶收集，用10ml的乙腈洗脱。将其旋转蒸发干，用1ml的丙酮溶解，准备进机器分析。 2.5硫丹的 GC-ECD测试条件 色谱柱： Rtx-5(30m × 0.25mmx0.25cm) 载气：高纯氮气(纯度>99.999%) 进样口温度：280℃ 检测器温度：300℃ 柱温箱温度 0~4min 40℃ 25℃/min 升温至220℃ 维持15min10℃/min 升温至260℃ 维持10min 载气控制方式：压力控制 压力119Kpa 进样方式：无分流进样 分馏时间： 1min 分流比：10 进样量：1od 2.6定量方法 采用外标法进行定量测定。响应值(峰面积)可以用 HPLC仪器软件自动积分或根据峰形手动积分。根据硫丹标准品的峰面积和浓度的关系作出峰面积一浓度(ogml)标准工作曲线。将每个样品的峰面积的值(或平均值)代入标准工作曲线即可算出各个样品中硫丹的浓度。 2.7实验准确度、精密度和检出限 2.7.1精密度的测定 配制不同浓度水平的α、β硫丹混合标准溶液置于1ml的离心管中，在4℃冰箱中保存。(1)日内差测定：一天内分别进行四次重复进样测定：(2)日间差测定：测定过程中分四天进样测定，测出各浓度响应值(峰面积)的变变系数(C.V.)以确定测定方法的精密度。 2.7.2回收率的测定 用空白海水鳗鱼肉在匀浆后加入α、lβ硫丹混合标准品，使其浓度水平为0.004、0.01和0.05g.g。用2.4的处理方法处理，回收率根据下面的公式求得： 2.7.3检出限的测定 取空白组织或含有少α、β硫丹的组织，将其加入少量的α、β硫丹标准(如0.004cg.g)或不加α、：、fβ硫丹标准品，按照样品的处理方法处理，进样测定，即可求出检出限。 实验的具体方法如下：用空白的鳗鱼肉，加入α、β硫丹标准液，使其浓度为0.004cg.g的水平，再按照2.4的方法继续处理。将处理好的样品于4℃的冰箱中保存，待测。 3.结果与讨论 3.1色谱条件的选择 由于硫丹是含有氯的化合物，因此使用ECD 检测器起灵敏度叫高，有利于提高检出限，本方法使用的压力控制方式可以是α、β硫丹分离，并是二者和杂质相分离，较好的满足检测的要求，保留时间α硫丹21.45min，，β硫丹24.95min，α、β硫丹出峰位置的 1min 内无干扰。 图1样品硫丹的 HPLC色谱图 (a)硫丹标准物质；(b)空白鳗鱼肉样品；(c)空白鳗鱼肉添加硫丹标准物质 3.2前处理方法 由于鳗鱼是水产动物，体内含有大量的不饱和脂肪酸和其他物质，为了不影响检测，必须将鳗鱼中 的油脂和其他物质尽可能的除掉，本问使用乙腈-正己烷的液液萃取方法可以处理掉油脂，并使用PSA柱除杂质，有很好的效果，并能保证α、β硫丹的回收率。 3.3工作曲线 将配制的α、β硫丹混合标准溶液进行气相色谱进行测定，0.1、0.05、0.02、0.01cg·ml的响应面积对应下图： 图2标准曲线 图2标准曲线 标准曲线的线性关系良好， R²>0.999，满足本实验的要求。 3.4精密度 组织中硫丹的日内变异系数和日间变异系数，精密度是衡量方法准确度的标准之一。精密度测试数据表1所示： 表1精密度的测定 测定次数 1 2 3 4 变异系数(C.V，%) 日间差测定 130124 130424 129643 131285 0.37 日内差测定 132712 129071 131769 129568 0.75 日间相对标准偏差和日内相对标准偏差都很好，说明机器和标准品的稳定性很好。 3.5检出限 本文使用的计算检出限的方法为，使用空白海水鳗鱼肉添加最少量的标准品，其浓度响应值大于3倍噪音值的浓度为最低检出限。 表2硫丹检出限的测定结果 样品号 浓度(og.g) 响应值(峰面积) 1 0.004 45369 2 0.008 10356 当添加的浓度水平为 0.004og.g时其信噪比已经大于3(20)，可以满足出口日本的要求。 3.6加标回收率 添加浓度水平为4个浓度(0.01、0.02、0.05、0.10cg.g'鱼肉)，每个浓度水平做4个平行样品。数据如下表： 表3添加回收率实验 添加浓度(ogg) 平均响应面积 变异系数(C.V，%) 平均回收率(%) 0.1 115729 5.27 89.97 0.05 554223 10.89 85.03 0.02 228319 8.36 90.17 0.01 1016535 12.37 78.12 本方法的添加实验回收率高(78.12%~90.17%)，可以满足要求。 3.7测试实际样品 本实验选择10个样本，每个样本平行4次，数据如下： 表4测试样本数据 样本编号 检测出平均浓度(0.002cg.g) N.D. 2 N.D. 3 N.D. 4 N.D. 5 N.D. 6 N.D. 7 0.002 8 N.D. 9 N.D. 10 N.D. 4、结论 本文建立α、β硫丹的GC-ECD的检测方法，使用乙腈作为提取剂，用正己烷除脂肪， PSA柱除杂质，检测测灵敏度高，可以达到0.004og.g，添加回收率为85%左右，并且没干扰，相对于使用凝胶渗透色谱法前处理，成本较低，处理简单。硫丹属于高毒高残留的农药，在养殖的环节不可能使用，有可能养殖场周围的农田使用，使得养殖场的水域手污染而致，本方法检测的样本10个，仅有一个样本检测出硫丹，而且含量很低仅为 0.002cg.g。 — —