在药理活性指导下,利用各种化学和色谱手段从瓜蒌薤白白酒汤活性部位中分离得到10 个化合物,通过化学及波谱手段鉴定了它们的化学结构,分别为thymidine (1) ,adenosine(2) ,2 ,3 ,4 ,9-tetrahy-dro-1-methyl-1H-pyrido[3 ,42b]indole-3-carboxylic acid (3) ,2 ,3 ,4 ,9-tetrahydro-1H-pyrido [ 3 ,42b ] indole-3-carboxylic acid(4) ,D-tryptophan(5) ,syringin(6) ,daucosterin (7) ,stigmasterol-3-O-β-D-glucoside (8) ,succinic acid(9) ,β-sitosterol (10) 。
天然产物研究与开发NATURAL PRODUCT RESEARCH AND DEVELOPMENT2003 Vo1.15 No.19 2003 Vo1.15 No.110天然产物研究与开发 瓜蒌薤白白酒汤活性成分研究Ⅳ:含氮及其它类化合物 何祥久 邱 峰 姚新生3 (沈阳药科大学中药学院 辽宁沈阳 110016) 摘 要 在药理活性指导下,利用各种化学和色谱手段从瓜蒌薤白白酒汤活性部位中分离得到10个化合物,通过化学及波谱手段鉴定了它们的化学结构,分别为 thymidine(1) ,adenosine(2) ,2,3,4 ,92tetrahy2dro212methyl21 H2pyrido[3,42b]indole232carboxylic acid(3) ,2 ,3 ,4,92tetrahydro21 H2pyrido[3 ,42b ]indole232carboxylic acid(4) ,D2tryptophan(5) ,syringin(6) ,daucosterin(7),stigmasterol232O2B2D2glucoside(8) ,succinicacid(9) ,B2sitosterol(10)。 瓜蒌薤白白酒汤是汉代名医张仲景的著名经典方剂,出自《金匮要略》,主治胸痹。在临床上,瓜蒌薤白白酒汤主要用于冠心病、心绞痛、急性心肌梗塞、心律失常及心肌炎等疾病,是中医治疗心血管系统疾病的重要方剂。国内外,人们对其研究主要局限于临床和药理活性研究的报道,而对其基础研究特别是此复方发挥作用的物质基础研究尚未见报 道。鉴于上述研究现状,计划用我们研究中药复方的思路[2,3],对瓜蒌薤白白酒汤的活性成分进行研究,以期能阐明其作用的物质基础及组方依据。 在活性指导下我们对此复方进行了系统分离。我们从此复方的活性部位正丁醇层中分离到10个化合物。通过化学及波谱学手段,对这10个化合物进行了结构鉴定。 小板聚集仪。 实验部分 111 仪器与材料 熔点在 Yanaco 显微熔点测定仪上测定(未校正),NMR在500MHz 核磁共振仪上测定,IR在Bruker 红外义定仪上测定。柱层析和薄层层析用硅胶为青岛海洋化工厂产品,ODS 和 Sephadex L H220 为 Pharmacia 公司产品,预制硅胶板为Merck 公司产品。上海医科大学博高实业公司M G2196 型血 ( 收稿日期:2002209202 修回日期:2002209216 ) ( 3通讯联系人(Corresponding author) ) 制备型 HPLC为LC210(日本分析工业株式会社),示差检测器。色谱柱为 Econosphere C18 (22mm ×250 mm,Alltech,USA),流动相为 MeOH2HzO,流速6 ml/ min。 HPL C用熔剂为色谱纯,其余溶剂为分析纯。 中药栝楼和薤白购自辽宁省药材站,由沈阳药科大学中药学院孙启时教授鉴定为 Trichosantheskirilowii Max. 和 Allium macrostemon Bge.. 112 化学成分的提取分离 栝楼15千克和薤白10千克混合,用10倍量的 60%乙醇回流提取3次,合并60%乙醇提取液,减压回收溶剂得提取物浸膏。浸膏用水溶解后,依次用等体积的乙酸乙酯、水饱和正丁醇萃取3次,得乙酸乙酯层、正丁醇层和水层等三部分。经抗血小板聚集活性测试表明,正丁醇层抗血小板聚集活性最强,因此对正丁醇层作了进一步分离。正丁醇层448克上D101大孔吸附树脂,水2乙醇梯度洗脱,得水、10%、30%、50%和乙醇洗脱等五部分,其中10%30%乙醇2水溶液及乙醇洗脱部分活性最强。再经硅胶柱层析、Diaion HP220、ODS及 Rp18 HPLC等分离手段,分别得到化合物1~10。 2 结构鉴定 1211 Thymidine(1) 白色粉末,熔点184~185 ℃。在 IR 中3312cm尖峰表明分子中可能存在-OH或·NH,1700cm和1659cm处的两个强峰说明分子中存在两个羰基,从它们的峰位分析,羰基应与供电基团相连。从该化合物的CNMR和DEPT谱可以看出,该化合物有1个甲基,2个亚甲基,4个次甲基和3个季碳共10个碳信号。在80~90 ppm 之间有4个碳信号(3个次甲基和1个亚甲基),分析其H2HCOSY谱,可以得出如下片段: 表1 化合物1的氢及碳信号归属 Table 1 The H and 3C NMR chemical shifts of compound 1 编号 氢信号 文献值 碳信号 文献值 No. Proton Reference' Carbon Reference' 2 152.4 154.2 3 4.5(H,s) 4.65(H,s) 4 166.3 168.9 5 111.5 114.0 6 7.79(H,q,J=1.4 Hz) 7.62 138.1 140.1 1.87(3 H,d,J=1.4 Hz) 1.88 12.4 14. 6.26(H,t,J=6.7 Hz) 6.25 88.8 89.2 2.21(2H,m) 2.36 41.2 41.2 4.38(H,m) 4.45 72.2 87.83 3.88(H,m) 4.01 86.3 73.13 5 3.70(H,o) ,3.73(H.o) 3.75,3.83 62.8 63.9 注:1“a”在CD3OD 中测定,“b”在 D20中测定。 23文献归属有误。 Note :1 a"measured in CD3OD, “b"measured in D20. 23are error in documents. 结合'HNMR中6125 ppm(H,t,J=618 Hz)的信号,发现该分子中含有一个脱氧核糖。对照文 献4,5报道 Thymidine 的数据,发现化合物1的数据与其基本一致。因此化合物1鉴定为胸腺嘧啶脱氧核苷(Thymidine)。从该化合物的二维图谱分析发现,文献中的3'与4'碳信号的归属有误,应按表1归属。 212 Adenosine(2) 白色粉末,熔点231~2322℃,碘化铋钾显桔黄色,提示该化合物分子中可能含有氮原子。IR(KBr)中,3334cm²强尖峰说明分子中可能含有-OH或- NH,1666cm处为C=C及C=N双键伸缩振动的吸收,1604、1572 和1470cm 为芳香环的吸收。在CNMR中,共有10个碳信号,其中在60~90 ppm 之间的5个碳信号与核糖数据基本一致。HNMR中,最低场处有两个芳氢单峰信号,分别位于8133和8112 ppm处,在7133(2 H,s)处是-NH2上二个质子信号,5186(H,d,J=612 Hz)为核糖上端基质子信号,通过分析该化合物碳谱及氢谱数据,发现与文献[61报道的腺苷基本一致。综上分析,化合物2鉴定为腺苷(Adenosine)。 213 2,3,4,92Tetrahydro212methyl21 Hpyrido[3,42b]indole232carboxylic acid(3) 淡黄色粉末,碘化铋钾反应阳性。IR(KBr)中,3295 cm处尖峰为的-NH吸收峰,1643 cm处的基峰为-COOH吸收峰,1577,1454cm²为芳环的吸收峰。HNMR的低场区共有四个芳氢信号,它们分别位于7169(H,d,J=710 Hz) ,7150(H,d,J=710 Hz) ,7124(H,t,J=710 Hz) 及 7119 (H,over2lapped) ,通过它们之间的耦合常数及二维H2'H2COSY谱可以看出这四个芳芳为1,22二取代苯环上四个氢信号。在最高场,1165处是一个甲基信号。在H2'H COSY谱中,8 3130(H,ddd,J=1210,810 ,214 Hz)的言信号与:4110(H,dd,J=1210,810 Hz)是一对偕质子信号,它们之间除了相互存在偕耦外,且同时与:3155(H,dd,J=810 ,214 Hz)处的质子耦合。81165处甲基与:4145(H,d,J=419 Hz)之间为邻耦关系。在CNMR中共有 13个碳信言,其中最低场处17216 ppm为羧酸羰基信号,其余在100~140 ppm之间的8个碳信号为芳香碳信号。通过上述分析,结合文献7,该化合物鉴定为:2,3,4,9tetrahydro212methyl21 H2pyrido [3,42b]indole232carboxylic acid。 214 2,3,4,92Tetra hydro21H2pyrido[3,42b] indole232carboxylic acid(4) 淡黄色粉末,碘化铋钾反应阳性,提示该化合物可能含有氮原子。ElMS显示该化合物的分子量为216。IR(KBr)中,3343cm处强尖峰为-NH吸收信号,1635cm为为羧酸羰基的吸收信号。比较化合物4与化合物3的氢谱,发现它们在低场区十分相似在高场区化合物4较化合物3少了一个甲基,提示化合物4可能是化合物3的1位去甲基的化合物,其质谱中的分子离子峰证明了这一推论。通过与文献对照,结合上述分析,该化合物鉴定为:2,3,4,92tetrahydro21 H2pyrido [3, 42b ]indole232carboxylic acid。 215 D2Tryptophan(5) 化合物5为白色粉末,熔点281~281℃,溶于水及甲醇。碘化铋钾和茚三酮反应阳性,EIMS显示分子量为204。通过与标准品薄层及其质谱数据对照,该化合物鉴定为:D2tryptophan (D222amino232indole propionic acid) 216 Syringin(6) 白色针晶(氯仿2甲醇),熔点192~193 ℃,在薄层上该化合物具有很强的紫外吸收,提示分子中有较长的共轭体系存在。在红外图谱中,1586cm及1508 cm的吸收显示分子中存在苯环结构,3391cm处的强吸收说明分子中多羟基的存在。HNMR及 H H COSY谱显示,分子中存在反式耦合的烯希,化学信号分别为6160 ppm(H,dt,J=1610,510 Hz),6184 ppm(H,d,J=1610 Hz),其中6160处的质子与:4157处的质子有较强的相关峰(烯丙耦合)。此外,在低场区:6188(2 H,s)的芳氢信号可能是苯环上两个化学等同的芳香氢核。85175为糖端基质子,结合CNMR,DEPT及 COSY,该单糖为B2D2glucopyranose。HNMR中的83175(6H,s)及CNMR中的85615说明分子中存在两个CH02基团,综上分析,结合文献8],该化合物鉴定为 Syringin[4 (32hydroxypropenyl)22, 62dimethoxyphenyl232D2glucopyranose]。 217 Daucosterin(7) 白色粉末,熔点285~286℃,Liebermann2Bur2chard 及 Molish 反应均为阳性,酸水解检出葡萄糖,酸水解的普元部分与β2谷甾醇共薄层R相同,分析 该化合物的氢谱及碳谱数据,与文献报道的胡萝卜苷一致,因此化合物6鉴定为胡萝卜甙(Daucos2terin)。 218 Stigmasterol232O2B2D2glucoside(8) 白色方晶(吡啶),熔点264~265 ℃,Lieber2mann2Burchard 及 Molish 反应均为阳性,酸水解检出莆萄糖,比较该化合物的氢谱及碳谱数据,发现与文献报道7的 Stigmasterol232O2B2D2glucoside 基本一致,因此该化合物鉴定为:豆甾烯醇232O232D2吡喃葡萄糖苷(Stigmasterol232O2B2D2glucoside)。 219 Succinic acid(9) 无色方晶(甲醇2水),熔点181~182℃。 IR(KBr)中,在 2500~3500 cm 之间有羧酸宽吸收峰,1694cm 为羰基伸缩振动的吸收峰。在CNMR中,只有两个碳信号,其中:17917为羧酸羰基的碳信号,83115是亚甲基信号。通过与文献报道的琥珀酸数据比较,两者基本一致,因此化合物9被鉴定为琥珀酸(succinic acid)。 2110 B2Sitosterol(10) 化合物10为无色片状结晶(氯仿2甲醇),熔点139~1400℃。在薄层上10%硫酸喷雾显紫红色。通过与标准品共薄层,鉴定为β2谷甾醇 (B2sitos2terol)。 致谢 栝楼和薤白由沈阳药科大学中药学院孙启时教授鉴定,在此深表感谢 ! ( 参考文献 ) ( 许沛源.方剂学.北京:人民卫生出版社,1995.371~373 ) ( 2 何祥久,邱 峰,姚新生1中药复方研究现状和思路1化 学进展,2001,13(6):481~485 ) ( 3 姚新生,胡 柯1中药复方研究思路1化学进展,1999, 11(2):192~196 ) ( 4 Ericson L E,Widoff E,Bauhidi Z G . S t udies of growth f ac2tors for streptococcus faecalis occurring in m a rine algae. ActaChem Scand ,1953 ,7(6):974~979 ) ( 5 Chenon M T . Carbon213 magnetic resonance,A b a sic set of parameters for the i n vestigation of t a utomerism in purines estabolished from carbon213 3 magnetic resonance. J Am Chem Soc ,1975 ,97(16):4627~2636 ) ( 6 Okuyama T,Shibata S, H oson M ,et al. E ff e cts of Chinesedrugs "Xiebai" and " Dasuan" o n human platelet a ggrega2 tion. Planta Medica ,1989 ,55:242 ) ( 7 Della Greca M,Monaco P, Previtera L. Stigmasterols fromTypha latifolia.J Nat P rod,1990 ,53(6): 1 430 ) 8 彭军鹏,乔艳秋,姚新生1得自小根蒜及薤中的几种含氮 化合物1中国药物化学杂志,1995,5(2):134~139 THE ACTIVE CONSTITUENTS RESEARCHOF GUALOU XIEBAI BAIJIUTANG(M:NITROGENCONTAINING COMPOUNDS AND OTHERS HE Xiang2jiu,QIU Feng,YAO Xin2sheng (School of Traditional Chinese Materia Medica, Shenyang Pharmaceutical University ,Shenyang 110016,China) AbstractAIM Research the material bases of actions of Gualou xiebai baijiutang. METHODS Guided bybioactivities,using chemical and chromatographic ways to isolate and purify the prescription,through chemicaland spectral ways to identify the structures. RESUL TS 10 compounds were isolated from the active parts.CON2CLUSION Compound 2 had good activity against platelet aggregation induced by ADP. Key words Gualou xiebai baijiutang;active constituents; nitrogen2containing compounds;anti2platelet aggre2gation 《天然产物研究与开发》杂志社广告管理实施办法 本刊是由国家科委和国家新闻出版署批准的国内外正式发行的综合性学术双月刊,是我国唯一专门报导天然产物研究与开发的科技刊物。本刊由中国科学院成都文献情报中心、中国科学院成都地奥制药公司和国家天然药物工程技术研究中心合办。学科横跨生物、化学、生物化学和药学。内容既有基础研究,又包括应用技术;既注重学术价值和社会效益,又重视开发应用价值和经济效益。 刊物内容主要包括植物(重点是天然药物)、动物、微生物等天然产物的资源分布、鉴定、分析、提取、改性、合成、仿生和利用方面的研究论文、实验报告、综述或报道、开发动向等。 自一九八九年创刊以来,本刊已先后被英国大英图书馆、美国化学文摘社、中国国家图书馆、中国科技信息所等国内外大型权威文献机构全部典藏,被美国《化学文摘》《中国药学文摘》《中国生物文文》、中国化学化工数据库、中国生物医学光盘数据库、中国农林数据库等收录。据《美国化学文摘资料来源索引》统计,1992年在美国《化学文摘》收录的150多个国家和地区的14000多种期刊中,本刊排列第755名;在我国(包括台湾)入围美国《化学文摘》千名表的45种期刊中,本刊排名第29位。 一九九五年本刊被评为四川省首届优秀期刊,二 年荣获四川省第二届优秀期刊。 本刊将接受广告业务,为客户策划、创意、设计出精美的广告版面。提高企业的知名度,树立起良好的企业形象,在市场经济大潮中为企业产品参与激烈的市场竞争拓展广阔的天地。 欢迎来人、来电、来函洽谈各类广告业务。 广告收费标准(单位:元) 广告规格 刊登一期 刊登三期(半年) 刊登六期(全年) 全版彩色 3000 6000 10 000 全版黑白 1200 3 000 5000 半版黑白 800 1800 3400 广告要求 11广告的版式由客户自行设计或委托本杂志社设计。 21 广告内容必须真实,符合《广告管理条例》规定,并出具有关证明文件。 地址:成都市人民南路四段九号 中国科学院《天然产物研究与开发》杂志社 邮编:610041 ( 电话:(028)85223853,(028)85210304 传真:(028)85220439 电子信箱:bj @ clas.ac.cn ) ( 户名:中国科学院成都文献情报中心 开户行:四川省农行总府支行华丰分理处 帐号:900201040000742 ) ◎Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd. 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