鸡蛋和鸡肉中氟虫腈及其代谢物残留检测方案(液相色谱仪)

「应用纪要WatersTHE SCIENCE OF WHAT'S POSSIBLE. 「应用纪要] Oasis PRiME HLB净化及UPLC-MS/MS检测鸡蛋和鸡肉中的氟虫腈及其代谢找的残留 贺小蔚 应用优势 简单、快速且有效的净化方案去除动物源性样品中脂肪和磷脂 快速、灵敏的UPLC-MS/MS分析 高效、省时的整体应用解决方案 关键词 氟虫虫及代谢物， Oasis°PRiME HLB小柱，ACQUITY UPLC° BEH C，，色谱柱，动物源性样品 背景 氟虫腈是一种杀虫剂，可杀灭跳蚤、螨和虱，被世界卫生组织列为"对人类有中度毒性"的化学品。欧盟法律规定，氟虫腈不得用于人类食品产业链中的畜禽。近期"毒鸡蛋"事件已波及欧洲17个国家，比利时、荷兰和西班牙等国销毁了大量可能被杀虫剂氟虫腈污染的鸡蛋。欧盟规定蛋中氟虫氟及其代谢物的限量(MRL)为0.005 mg/kg。为针对此次欧洲"毒鸡蛋"事件，本研究建立UPLC-MS/MS超高效液相色谱-质谱联用法检测鸡蛋和鸡肉中的氟虫，及代谢物氟虫腈砜、氟甲腈、氟虫腈硫醚。该检测方法提取简单效果好，灵敏度高，重现性好，定量准确。 简介 鸡蛋的总脂质含量约占其重量的11%(除去蛋壳)，磷脂含量约为0.35%。使用OasisPRiME HLB小柱进行通过式净化可以去除鸡蛋提取液中脂肪和磷脂。应用本净化方案可以得到满意的回收率。 仪器条件 UPLC-MS/MS仪器条件如下所示。表1列出了本应用的目标化合物、MRM多反应监测通道和质谱参数。 UPLC条件 LC系统： ACQUITYUPLC色谱柱： ACQUITYUPLC° BEHC，1.7 pm， 100 mmx2.1mm流动相： A：水(含5mM乙酸铵和0.1%甲酸) B：甲醇 梯度洗脱程序： 时间 流速 梯度 (min) (mL/min) A% B% 曲线 初始 0.4 50 50 6 0.5 0.4 25 75 6 3.0 0.4 25 75 6 3.5 0.4 1 99 6 4.5 0.4 1 99 6 6.0 0.4 50 50 1 进样体积： 2uL 柱温： 35°C 洗针液和样品管理器冲洗液： 甲醇/水(50：50)溶液 密封清洗液： 甲醇/水(10：90)溶液 MS条件 质谱仪： Waters Xevo°TQ-S 离子源： ESI- 离子源温度： 150°C 脱溶剂气温度： 450°C 脱溶剂气流速： 800L/Hr 锥孔气流速： 150 L/Hr 数据管理系统： MassLynx°v4.1 样品前处理 样品提取：取2.0g均贡样品(鸡蛋或鸡肉样品)于50mL离心管中，然后添加一定浓度的标准品或QC样品，加入10mL水溶液，漩涡混合30s，再加入10mL乙腈，涡旋振荡10 min，加入QuEChERS盐包(用于CEN方法的DisQuE提取盐包，部件号186006813)后大力振摇1 min， 在6000 rpm的转速下，离心5 min。 样品净化：将Oasis° PRiME HLB小柱(6 cc， 200 mg，部件号186008057)安装在预先清洁过真空萃取装置上。无需打开真空泵及执行小柱活化步骤。取约0.5mL上清液，使其通过OasisPRiME小柱并弃去滤液。然后再取1.5 mL上清液，使其靠重力再次通过小柱并收集滤滤过膜后待上机分析。 化合物名称 英文名称 保留时间min 离子对m/z 锥孔电压/V 碰撞能量/V Fipronil 387.1/282.1 48 氟甲腈 Desulfinyl 2.67 387.1/351.1* 20 14 氟虫腈 Fipronil 2.80 435.1/250.1 8 32 435.1/330.1* 22 氟虫腈硫醚 Fipronil 2.92 419.1/262.0* 8 34 Sulfide 419.1/383.1 16 氟虫腈砜 Fipronil 3.15 451.1/281.9 26 32 Sulphone 451.1/415.1* 24 *为定量离子 表1.每种目标化合物的MRM通道和质谱条件。 实验结果 基质匹配校准曲线和基质效应 每种化合物使用空白基质配置标准曲线，在0.1ug/L-5pg/L范围内6个不同浓度具有良好的线性关系，相关系数R²>0.99，见表2。 化合物名称 鸡蛋 鸡肉 R2 基质效应%* R2 基质效应%* 氟虫腈 0.999 2.6 0.993 16.9 氟虫腈砜 0.998 -21.4 0.994 -8.5 氟虫腈硫醚 0.996 -6.2 0.996 -5.6 氟甲腈 0.997 -8.6 0.992 -3.6 *该值为正是离子增强效应，负为离子抑制效应 表2.相关系数及基质效应。 方法回收率和稳定性 使用空白鸡蛋和鸡肉样品进行添加回收实验。三个不同的添加浓度分别为2 pg/kg、5 pg/kg、10 pg/kg， 每个添加浓度平行三次重复测定，平均回收率及RSD结果见表3和表4.谱图见图1-2。 化合物名称 添加浓度2 ug/kg 添加浓度5 ug/kg 添加浓度10 pg/kg 回收率% RSD%(n=3) 回收率% RSD%(n=3) 回收率% RSD%(n=3) 氟虫腈 72.3 6.4 84.1 11.1 81.8 8.3 氟虫腈砜 71.8 4.4 76.1 9.6 73.4 4.2 氟虫腈硫醚 75.8 6.8 85.5 8.5 87.2 7.4 氟甲腈 78.3 4.5 79.5 1.3 76.9 3.8 表3.鸡蛋样品回收率及RSD结果。 化合物名称 添加浓度2 ug/kg 添加浓度5 pg/kg 添加浓度10 pg/kg 回收率% RSD%(n=3) 回收率% RSD%(n=3) 回收率% RSD%(n=3) 氟虫腈 84.5 7.7 89.3 9.4 95.9 6.1 氟虫腈砜 85.8 4.4 94.4 1.9 103.2 1.1 氟虫腈硫醚 83.2 4.6 88.4 4.2 101.1 1.5 氟甲腈 91.2 6.2 82.4 6.6 103.6 3.7 表4.鸡肉样品回收率及RSD结果。 图1、2分别为鸡蛋和鸡肉空白样品的色谱图及样品添加谱图(出峰顺序分别为氟甲腈、氟氟腈、氟虫腈硫醚、氟虫腈砜)。 图1.空白鸡蛋样品和鸡蛋样品添加四种目标物总离子流流。 图2.空白鸡肉样品和鸡肉样品添加四种目标物的总离子流图。 净化效果 图3为Oasis°PRiME小柱去除磷脂的效率的比较色谱图；显示了使用OasisPRiME小柱成功去除了95%以上的磷脂和80%以上的总脂肪。 图3.使用Oasis°PRiME HLB进行通过式净化；几乎完全去除了样品提取物中的磷脂。 ( 结论 ) 本方案使用简单有效的样品净化方法，可以同时检测动物源性样品中氟虫腈及其3种代谢物的残留。在三个不同添加浓度下，氟虫虫及其3种代谢物在鸡蛋和鸡肉样品中的方法回收率在72-103%之间， RSD<10%，方法定量限为2 pg/kg， 基质效应的结果均<22%. 采用Oasis° PRiME HLB小柱的简单通过式净化方案能够去除提取液中80%以上的总脂肪和95%以上的磷脂，能够保证最小的基质效应。 使用ACQUITY UPLC° BEH C..色谱柱进行梯度洗脱既保证四种目标物的分离，同时有达到了将其与杂质的分离，尽可能的减小基质对目标峰干扰。 扫一扫，关注沃特世微信 沃特斯中国有限公司 沃特世科技(上海)有限公司 北京：010-52093866 THE SCIENCE OF WHAT'S POSSIBLE. 上海：021-61562666 广州：020-28296555 成都：028-67653588 香港：852-29641800 免费售后服务热线：800(400)8202676WWw.waters.com Oasis PRiME HLB净化及UPLC-MS/MS检测鸡蛋和鸡肉中的氟虫腈及其代谢物的残留 本方案使用简单有效的样品净化方法，可以同时检测动物源性样品中氟虫腈及其3种代谢物的残留。在三个不同添加浓度下，氟虫腈及其3种代谢物在鸡蛋和鸡肉样品中的方法回收率在72-103%之间，RSD＜10%，方法定量限为2 μg/kg，基质效应的结果均<22%。