鸡蛋中氟虫腈及其代谢物检测方案(气质联用仪)

thermoscientific GC-MSMS 用于鸡蛋中氟虫腈及其代谢物的快速检测 作者 邓武剑1，吴卫东2 1.赛默飞世尔科技(中国)有限公司 2.深圳出入境检验检疫局 关键词 TSQ 8000EVO， QuEChERs， 氟虫腈及其代谢物，鸡蛋 摘要 本文建立了一种运用 QuEChERs 前处理结合三重四极杆气质联用仪(GC-MS/MS)分析鸡蛋中的氟虫腈及其代谢物的快速检测方法。该方法用乙腈提取，经盐包(MgSO4，NaCl，柠檬酸钠)盐析，净化管(预装MgSO4， PSA，C18)净化，仪器用 TSQ 8000 Evo 的 Time-SRM模式进行数据采集，用外标法进行定量。结果表明，该方法中氟虫腈及其代谢物在浓度 1.0 pg/L~200 pg/L 的范围内呈现良好线性，线性相关系数(R²)均大于0.999，检出限均为1.0 ug/kg，三个浓度水平的样品添加(2 pg/kg、5 pg/kg， 10 pg/kg)，回收率范围为：85.8%~113.5%。该方法能满足鸡蛋中氟虫腈残留限量最严格的要求 0.005 mg/kg. 一、前言 近日，受杀虫剂氟虫腈污染的“毒鸡蛋”风波在欧洲愈演愈烈，不但导致荷兰、比利时和德国的零售商下架数以百万计的鸡蛋，英国、法国也通报发现了进口自荷兰的问题鸡蛋。 鸡蛋作为老百姓日常生活中常见的食物，因其蛋白质含量高，含有人体必需的8种氨基酸，和人体蛋白质组成极为相似，极易被人体吸收，所以鸡蛋深受广大消费者所喜爱。有关鸡蛋的安全问题引起民众广泛关注。 氟虫腈英文通用名为 Fipronil， 商品名 Regent(锐劲特)，是一种苯并吡唑类新型高活性杀虫剂，主要用于防治蔬菜、水稻、烟草、棉花、畜牧业、公共卫生、贮存用品及地面建筑中各类别的作物害虫以及卫生害虫。同时，氟虫腈对人体也有一定的毒性作用，人如大剂量食用可致肝功能、肾功能和甲状腺功能损伤，它被世界卫生组织列为“对人类有中度毒性”的化学品，联合国粮农组织和世界卫生组织农药残留联席会议(JMPR)建立的氟虫腈人体安全摄入量(ADI)为每天每公斤体重不超过 0.0002 mg。另外，氟虫腈在外界环境中能够代谢生成毒性更高的氟虫腈砜和 氟虫腈硫醚等化合物，最常见的为氟虫腈(MB-46030)、氟甲腈(MB-46513)、氟虫腈砜(MB-46136)、氟虫腈硫醚(MB-45950)，其结构式见图1。 图1.氟虫青及其代谢物结构式 欧盟法法(EU) No.1127/2014 规定，氟虫不不得用于人类食品产业链的畜禽养殖过程，在食品中的氟虫腈残留不能超过0.005 mg/kg； 在 GB 2763-2016《食品安全国家标准食品中农药最大残留限量》2中明确了氟虫虫在谷物、蔬菜中的最大残留限量，对于其在蛋类和禽类中的最大残留限量没有做出规定。GB 2763-2016中规定了氟虫腈的检测方法有： SN/T 1982-2007《进出口食品中氟虫腈残留量检测方法气相色谱-质谱法》③和 NY/T 1379-2007《蔬菜中334种农药多残留的测定气相色谱质谱法和液相色谱质谱法》④， SN/T 1982 虽然检出限低(0.002 mg/kg)，但由于其用CI源，在仪器使用上较为麻烦，应用有局限性；NY/T 1379-2007是用El源的方法，但是其用的是单四极杆(GCMS)方法，检出限(0.01mg/kg) 难以满足欧盟限量(0.005mg/kg)要求。 因此，建立快速、灵敏、准确的鸡蛋中氟虫腈检测方法，有着非常必要的现实意义。 二、实验部分 2.1仪器和试剂 质谱仪： TSQ 8000 Evo (赛默飞世尔科技，美国)； 气相色谱仪： Trace 1310 GC 配 Al1310 自动进样器(赛默飞世尔科技，美国)； 色谱柱： TR-Pesticide ll 30 m*0.25 mm*0.25 um (PN：26RD142F)； 2.2仪器方法 1)气相色谱方法： 升温程序：60℃保持1.0 min， 40 ℃ /min 升温到170℃，再以10℃ /min 升温到260℃(3 min)； 进样口温度：270℃，进样量：11pL； 进样方式：不分流进样，不分流时间：：11.0 min： 载气流速：1.2mL/min(恒流)； 隔垫吹扫：恒定隔垫吹扫，吹扫流量：5.0 mL/min； 2)质谱方法：离子源温度：300℃；传输线温度：280℃；扫描方式：采用 Acquisition-Timed 方式， Time-SRM扫描，化合物保留时间及特征离子信息如表1所示。 表1氟虫腈类化合物的保留时间及离子信息 序 号 英文名 中文名 RT (min) Q1 Q3 CE 1 388.01 333.05 15 Fipronil- desplfinyl 氟甲腈 9.08 333.05 231.03 15 333.05 281.04 10 420.1 255.1 30 2 Fipronil-splfide 氟虫腈硫醚 10.34 351 255 15 420.1 351.1 10 368.8 214.9 30 3 Fipronil 氟虫腈 10.54 366.9 212.9 28 366.9 244.9 20 383 241 10 4 Fipronil-splfone 氟虫腈砜 11.6 335 255 10 383 255 15 2.3样品前处理 称取 10g样品， 加10 mL乙腈，均质机25000 rpm 均质0.5 min， 置于-20℃下放置 10 min； 取出样品，加入 QpEChERS 法的盐包(4g MgSO4， 1 g NaCl， 0.5 g柠檬酸二钠，11g柠檬酸三钠， PN：60105-344)，涡旋震荡1 min； ·摇床2500 rpm， 5 min； ·离心，9500 rpm， 5 min； ·取上清液1mL于2mL净化管中(150 mg MgSO4， 50mg PSA， 50 mg C18； PN： 60105-204)，涡旋1min；·离心 12000 rpm， 5 min； ·取上清液过滤膜，上机分析； 2.4样品基质溶液：按照2.3的程序处理鸡蛋样品，得到基质溶液 2.5标准溶液的配制 取适量的氟虫腈类化合物标准品混合储备液，用样品基质溶液稀释成标准系列溶液，浓度分别为：1.0 pg/L、5.0 ug/L、10 pg/L、20 pg/L、50 pg/L、100 pg/L、200 pg/L。 3.2方法的校正线性曲线和检出限 氟虫腈类化合物的线性相关系数均大于0.999，四种化合物的检出限分别为： 上述条件下，4种氟虫腈及其代谢物均能得到有效的分离，鸡蛋样品加标浓度2.0 ug/kg 的色谱质谱图如图2所示。 图2.样品加标图(2.0pg/kg) 表2.氟虫腈类化合物的线性方程及相关系数、检出限 序号 英文名 中文名 线性方程 线性范围 相关系数(R²) 检出限(ug/kg) 1 Fipronil-desplfinyl 氟甲腈 Y=3.982e3X+2.115e3 1.0 ug/L~200 ug/L 0.9995 1.0 2 Fipronil-splfide 氟虫腈硫醚 Y=1.549e3X+1.236e3 1.0 pg/L~200 pg/L 0.9997 1.0 3 Fipronil 氟虫腈 Y=1.815e4X+7.027e3 1.0 pg/L~200 pg/L 0.9991 0.5 4 Fipronil-splfone 氟虫腈砜 Y=1.940e3X+1.801e3 1.0pg/L~200 pg/L 0.9996 1.0 Fipronil-desulfinyl Fipronil-sulfide 图3.氟虫腈及其代谢物的线性曲线(1.0~200 pg/L) 3.3回收率 1.0 pg/kg、1.0 pg/kg、0.5 pg/kg、1.0 pg/kg，详细信息见表2，曲线图见图3。 对鸡蛋样品，考察了三个加标水平(2.0pg/kg、5.0 pg/kg、10.0 pg/kg)， 每个水平平行三份，加标回收率在85.8-113.5%之间，详见表3，加标样品2.0 pg/kg 的谱图见图4。 表3.样品加标回收 序号 Compound Name 中文名 加标测得浓度 Recovery (2pg/kg))(5pg/kg) (10 pg/kg) (2ug/kg)% (5pg/kg)% (10 pg/kg ) 1.87 4.76 10.60 93.5 95.2 106.0 Fipronil-desulfinyl 氟甲腈 1.80 4.63 9.05 90.2 92.7 90.5 1.96 4.82 9.73 98.0 96.4 97.3 2.17 4.29 9.48 108.5 85.8 94.8 2 Fipronil-sufide 氟虫腈硫醚 2.22 4.50 8.71 111.0 90.0 87.1 2.08 4.38 9.22 104.0 87.6 92.2 2.24 4.89 10.60 112.0 97.8 106.0 3 Fipronil 氟虫腈 2.27 5.12 9.32 113.5 102.4 93.2 2.18 5.06 9.96 109.0 101.2 99.6 4 Fipronil-sulfone 氟虫腈砜 1.75 4.52 11.22 87.5 90.4 112.2 1.84 5.02 9.35 92.0 100.4 93.5 1.82 4.83 10.66 91.0 96.6 106.6 ( 参考文献 ) ( 1 . AAJOMD A， RAVANEL P， TISSMT M. F i pronil Met a bolism a n d Dissipation i n a S i mplif i ed AqpaticEcosystem[J] J Agric Food Chem， 2013，51：1347-1352 ) ( 2. GB 2763-2016《食品安全国家标准食品中农 药 最大残留限 量 》 ) ( 3 . SN/T 1982-2007《进出口食品中 氟 虫腈残留 量 检测方 法气相色谱-质谱法》 ) 4. NY/T 1379-2007《蔬菜中334种农药多残留的测定气相色谱质谱法和液相色谱质谱法》 SCIENTIFIC 支持手机用户)A Thermo Fisher Scientific Brand 本文建立了一种运用 QμEChERs 前处理结合三重四极杆气质联用仪（GC-MS/MS）分析鸡蛋中的氟虫腈及其代谢物的快速检测方法。该方法用乙腈提取，经盐包（MgSO4，NaCl，柠檬酸钠）盐析，净化管（预装 MgSO4，PSA，C18）净化，仪器用 TSQ 8000 Evo 的 Time-SRM 模式进行数据采集，用外标法进行定量。结果表明，该方法中氟虫腈及其代谢物在浓度 1.0 μg/L~200 μg/L 的范围内呈现良好线性，线性相关系数（R2）均大于 0.999，检出限均为 1.0 μg/kg， 三个浓度水平的样品添加（2 μg/kg、5 μg/kg，10 μg/kg）， 回收率范围为：85.8%~113.5%。该方法能满足鸡蛋中氟虫腈残留限量最严格的要求 0.005 mg/kg。