沙棘籽油中维生素E检测方案(毛细管柱)

超星期北京豫维科技有限公司联系人：水先生电话：18911849923中国药物应用与监测2017年6月第14卷第3期 Chinese Journal of Drug Application and Monitoring， Vol.14， No.3， June 2017 沙棘籽油中维生素E含量的CGC法测定 沈 琪，王 梅(新疆医科大学药学院，新疆乌鲁木齐830011) [摘要] 目的：研究沙棘籽油中脂肪酸成分，定量分析并建立毛细管气相色谱法(CGC)测定沙棘籽油中维生素E( Vit E)含量的方法。方法：采用溶剂回流提取法提取沙棘油中挥发油成分，并用气相色谱-质谱联用法(GC-MS)对其进行定性、定量分析。采用岛津GC-2010 plus气相色谱仪，以正三十二烷为内标物对 Vit E进行测定，并对该方法进行方法学考察。结果：从沙棘籽油中分离鉴定出28个化合物；采用Rtx-5毛细管色谱柱(30m×0.25 mm， 0.25 um)；柱温为程序升温：150℃保持13 min，以10 ℃·min的升温速率升至300℃，保持8 min； FID检测器温度为300℃；进样口温度为310℃；无分流进样。在此条件下， Vit E和内标物分离良好，在0.02~0.43 mg*mL 浓度范围内呈良好线性关系， r=0.9996。结论：建立以CGC测定沙棘籽油中维生素E含量的方法，灵敏、准确、重复性好，可作为沙棘籽油中Vit E的含量测定方法。 [关键词] 沙棘油；维生素E；毛细管气相色谱法 [中图分类号]R917 [文献标识码] A [文章编号] 1672-8157(2017)03-0154-03 Determination of vitamin E content in the oil from seed of Hippophae rhamnoides by CGC SHEN Qi， WANG Mei(College ofPharmacy， Xinjiang Medical University， Urumqi 830011， China) IABSTRACT]| Objective： To analyze the fatty acids composition in the oil from seed of Hippophae rhamnoides， and establisha capillary gas chromatography (CGC) method to determine the content of vitamin E in the seed oil of Hippophae rhamnoides.Methods： Oil was extracted from Hippophae rhamnoides seed by heated reflux solvent. GC-MS was adopted to determine itschemical constituents. The quantification of the vitamin E (Vit E) content was conducted by GC-2010 plus. Dotriacontane was actedas the internal standard. Results： Totally 28 chemical constituents were extracted. The GC system consisted of a Rtx-5 capillarycolumn (30 mx 0.25 mm， 0.25 um). Column temperature was temperature programming including 150 ℃ for 13 min， rose to 300℃by the rate of 10℃minand maintained 300 ℃ for 8 min. The temperature of FID detector and the injection was 300 C and 310 ℃respectively. The splitless injection was adopted， Vitamin E was separated satisfactorily from dotriacontane. The calibration curve forVitamin E was linear in the range of 0.02 -0.43 mgmL(r=0.9996). Conclusion： The capillary GC method was sensitive andreliable. It could be used to determine the content of vitamin E in the Seed oil of Hippophae rhamnoides. [KEY WORDSIHHippophae rhamnoides oil； Vitamin E； Capillary gas chromatography (CGC) 沙棘(Hippophae rhamnoides Linn.)为胡颓子科(Elaeagnaceae)沙棘属植物，是蒙药、藏药习用药材。从沙棘中提取分离得到的沙棘油，富含大量营养活性物质，近年来逐渐引起医药界的重视，并在其资源、药理、制剂、临床等方面进行了系统研究，证实沙棘油是一个药理活性强、高效、安全的药物-21。现代研究表明，沙棘油具有防治胃溃疡、保护化学性肝损伤、促进创面修复等作用。维生素E(Vitamin E， Vit E) ( [基金项目]新疆维吾尔自治区优秀青年科技创新人才培养工程项目(qn2015yx018)；沙棘油纳米乳的制备研究(CXCY096) ) ( [通信作者]王梅，女，副教授，研究方向：药物新剂型和药物传 输系统。E-ma i l： wm630@163.com ) ( [作者简介] 沈琪，女，硕士研究生，研究方向：药物新剂型。 E-mail： 2529110682@qq.com ) 是沙棘油中天然抗氧化剂，含量越高，油越稳定，作为沙棘油中的重要有效成分，具有多种功效。本文以VitE为沙棘油质量控制的主要指标，通过加热回流法提取沙棘籽油，用GC-MS对其进行成分分析，并建立以CGC测定沙棘油中 Vit E含量的方法，旨为沙棘油的开发利用提供理论参考。 仪器与试药 Perkin-Elemer Autosystem XL-Turbemass型气质联用色谱仪(美国PE公司)； GC-2010 plus型气相色谱仪(日本岛津公司)； AB135-S型万分之一天平(瑞士Mettler公司)。 沙棘籽油(实验室自制，沙棘药材购自阿勒泰地区，纯度99.9%)； Vit E对照品(中国食品药品检定研究院，纯度98%，批号：G3D7-DS8F)；正三十二烷 (美国Sigma 公司，纯度97%)；正己烷、甲醇(色谱纯，天津市福晨化学试剂厂)；氢氧化钾(分析纯，天津市光复科技发展有限公司)。 2 方法与结果 2.1 沙棘籽油提取 通过溶剂回流提取法，将沙棘籽中的沙棘籽油溶于石油醚，回收石油醚后得到沙棘籽油。得油率为8.9%。 2.2 沙棘籽油中脂肪酸成分分析及结果 色谱条件：采用PE-5MS柱(60 m×0.25 mm，0.25 pm)；柱温为程序升温：50℃保持3 min， 以3℃·min 的升温速率升至200℃，5℃min 升至280℃，保持30 min； 进样口温度为300℃；分流比为50：1；载气为 He (99.99%)；进样量为0.8 pL。通过GC-MS全分析共鉴定出沙棘籽油中28种化合物。 2.3 沙棘籽油中 Vit E含量定定 23.1 色谱条件采用Rtx-5毛细管色谱柱(30m×0.25mm，0.25 um)；柱温为程序升温：150℃保持13 min， 以10℃.min的升温速率升至300℃，保持8 min； 进样口温度为310℃；FID检测器温度为300℃；载气为N，流速1mL.min ；无分流进样；进样体积为1uL。 2.3.2溶液的制备 内标物溶液：精密称取正三十二烷适量，加正己烷溶解并稀释成1 mgmL的溶液，摇匀，即得。 对照品溶液：精密称取Vit E对照品适量，加正己烷溶解并稀释成含1mg*mL的溶液，摇匀，即得。 供试品溶液9-10：称取沙棘籽油0.5 g， 置25 mL棕色量瓶中，精密加入乙醚-正己烷(2：1)2.5mL，甲醇2.5 mL， 静置2h，再精密加入2 molL氢氧化钾甲醇溶液1mL，于60℃水浴中摇匀，静置5 min， 加蒸馏水至刻度。吸取上层溶液置10 mL试管中，精密加入内标溶液3mL，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 2.3.3 系统适用性实验 将上上3种溶液各1.0 uL，按“2.3.1”项下方法分别进样分析，色谱图结果显示，Vit E与正三十二烷色谱峰的分离度大于2.6， Vit E理论塔板数大于5000，色谱峰形对称，见图1。 2.3.4 线性关系 分别精密吸取对双品储备液0.05、0.10、0.50、0.70、0.90、1.10、1.30 mL置25 mL棕色量瓶中，前处理后吸取上层脂肪酸甲酯，置10 mL试管中，精密加内标溶液3mL，摇匀。分别自动进样lpL， 以进样量(X， ug)为横坐标，峰面积比值(Y，对照品/正三十二烷)为纵坐标，绘制标准曲线，线性回归方程为：Y=0.7057X+0.002， r=0.999 6。结果表明： Vit E在0.02~0.43 mgmL"范围内，线性关 图1GC图谱 A-对照品，B-供试品；1-正己烷，2-VitE，3-正三十二烷 Fig 1 GC chromatograms A- reference substance， B - sample； 1-n-hexane， 2-Vit E，3-n-dotriacontane 系良好。 2.3.5 精密度实验 精密吸取对照品溶液(0.43 mg*mL')，连续进样5次，计算 Vit E与内标峰面积比值 的RSD为0.47%(n=5)，结果表明仪器的精密度良好。 2.3.6 重复性实验 取沙棘籽油0.05 g， 共6份，按“2.3.2”项下方法制备，按“2.3.1”项下色谱条件进行测定，计算 Vit E与内标峰面积比值的RSD为0.48%(n=6)，表明方法重复性良好。 2.3.7 稳定性实验 称取沙棘籽油0.05 g，按“供试品溶液制备”项下方法制备，分别于配制后0、2、4、6、8h进样测定，计算 Vit E与内标峰面积比值的RSD为1.40%，结果表明样品在8h内稳定。 2.3.8 加样回收率实验 精密称取已知准确Vit E(0.047mg*mL )含量的沙棘籽油共9份，每份0.05 g，置25 mL量瓶中，分别精密加入 Vit E对照品溶液储备液(1 mgmL)0.5 mL、0.7 mL、1.1mL，每个浓度制备3份，按“2.3.2”项下方法制备，按“2.3.1”项下色谱条件进行测定，结果显示 Vit E的平均回收率为96.83%， RSD为0.54%，详见表1。 2.3.9 样品含量测定 取自提沙棘籽油3批，按“2.3.2”项下方法制备，按“2.3.1”项下色谱条件进行测定，详见表2。 3 讨论 GC-MS 测得沙棘籽油中脂肪酸的总离子流图，经与标准谱库的质谱数据检索核对，共鉴定出28种化合物，将峰面积进行归一化法处理后，沙棘籽油中亚油酸(44.5%)和油酸(37.52%)的相对含量高于沙 表1 加样回收率实验结果.n=9 Tab 1 Result of sample recovery rate test. n=9 取样量/g 供试品 加入量 峰面积 测得量 回收率/% 含量/mg /mg 比值 /mg 0.050 0 0.053 9 0.166 7 0.1109 0.215 4 96.90 0.0500 0.0539 0.166 7 0.111 1 0.215 7 97.10 0.0500 0.053 9 0.1667 0.112 0 0.2156 97.00 0.0500 0.053 9 0.2333 0.150 1 0.281 2 97.43 0.0500 0.053 9 0.233 3 0.149 5 0.2804 97.07 0.050 0 0.053 9 0.233 3 0.1500 0.2812 97.43 0.050 0 0.053 9 0.3667 0.2242 0.406 2 96.08 0.0500 0.0539 0.3667 0.2245 0.4067 96.22 0.0500 0.053 9 0.3667 0.224 5 0.4067 96.22 表2 沙棘籽油中 Vit E的含量. n=3 Tab 2 Determination of contents of Vit E in Hippophaerhamnoides oil. n=3 批次 Vit E的含量/mgg RSD/% 2.944 2 3.000 1.08 2.944 棘油标准(SL 493-2010沙棘籽油)中脂肪酸组成指标。亚麻酸成分略低，这可能是干燥恒重时亚麻酸因氧化损失。 《中国药典》中采用CGC内标法测 Vit E的含量，选择的毛细管柱为100%二甲基聚硅氧烷固定液填。参考文献[2使用Rtx-5型毛细管色谱柱，经实验确定检测器温度为300℃，进样口温度为310℃， 柱温使用程序升温：150℃保持13 min，以10℃min 的升温速率升至300℃，保持8 min，沙棘油中指标性成分能与内标物达到很好的分离并均能被检测出。因沙棘油中化学成分复杂，杂照文献19-101将加入甲醇和氢 氧化钾甲醇溶液后的静置时间分别定为2h和5 min，Vit E与内标物的分离效果更好。考查结果：供试品溶液中沙棘籽油浓度为 0.018gmL"， 测得供试品溶液中Vit E浓度为 0.054 mg*mL，即1g油中含3 mg VitE。 ( [参考文献] ) ( [1] 车锡平，关晓红，郭峰，等.沙棘籽油的毒性实验研究[J].沙 棘，2007，20(4)：31-33. ) ( [2] 臧茜茜，邓乾春，从仁怀，等.沙棘油功效成分及药理功能研 究进展[].中国油脂，2015，40(5)：76-81. ) ( [3] S odergren E ， Cederberg J， Vessby B， et al. 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