黑豆馏油软膏中桉油精和冰片的含量检测方案(毛细管柱)

北京豫维科技有限公司联系人：水先生电话：18911849923安徽医药 Anhui Medical and Pharmaceutical Journal 2013 Jun；17(6)·958· 气相色谱法同时测定黑豆馏油软膏中桉油精和冰片的含量 宋 莉，黄 艳，刘雪峰 (陕西省食品药品检验所，陕西西安 710061) 摘要：目的 建立黑豆馏油软膏中桉油精和冰片的的定量方法，更好地控制产品质量。方法 采用 Rtx-WAX毛细管柱(柱长30 m，内径0.25 mm，膜厚度为0.25 p.m)，以环己酮为内标，流速：1.5 mL·min，程序升温：初始温度为60℃，持续7 min，以每分钟15℃的速率升温至140℃，保持5 min； FID 检测器。结果 气相色谱法测定，桉油精油0.3206~8.0158 pg范围内线性关系良好(r=0.9999)，冰片在0.1652~4.1307 pg范围内线性关系良好(r=0.9999)；桉油精平均回收率(n=6)为 98.7%，RSD=1.5%，冰片平均回收率(n=6)为98.9%，RSD=1.6%。结论 该方法能准确地进行桉油精和冰片的定量测定，且灵敏度高，重复性好，快速简便，可用于黑豆馏油软膏的质量控制。 关键词：黑豆馏油软膏；桉油精；冰片；气相色谱法 Determination of eucalyptol and borneol in HeidouLiuyou Ointment by GC SONG Li，HUANG Yan，LIU Xue-feng ( Shanxi Institute for Food and Drug Control，Xi'an 710061，China) Abstract：Objective To establish a GC method for the determination of eucalyptol and borneol in Heidou Liuyou Ointment. Methods The column was Rtx-WAX(30 m×0.25 mm×0.25 wm) ，and the gas flow rate was 1.5 mL· min-. Cyclohexanone was selected as in-ternal standard. The temperature program of column oven was set as follows： 60 ℃ for 7 min，increased to 140 ℃ at a rate of 15℃·min- and held for 5 min. The detector was FID. Results Under this condition，eucalyptol showed good linear relationship in the rangebetween 0.320 6 and 8.015 8 ug(r=0.999 9) and borneol showed good linear relationship in the range between 0. 165 2 and 4.130 7ug(r=0.999 9). The average recoveries of eucalyptol and borneol(n=6) were 98.7% and 98.9% with RSD 1.5% and 1.6%，respec-tively. ConclusionThe method is simple，rapid and can determine the content of eucalyptol and borneol accurately with higher sensitivi-ty，which can be used as the determination control method for Heidou Liuyou Ointment. Key words： Heidou Liuyou Ointment； eucalyptol； borneol； GC 黑豆馏油软膏由黑豆馏油，桉油，氧化锌和冰片四味药组成，其功能主治为消炎，收敛，止痒，使角质再生。用于神经性皮炎，亚急性、慢性皮炎及慢性湿疹等。现行质量标准收载于《卫生部药品标准》中药成方制剂第十二册，标准中只对氧化锌的含量进行了测定，对其主要成分桉油精和冰片并没有含量测定方法。为了更好的控制该制剂的质量，完善其质量标准，采用气相色谱法同时测定制剂中的桉油精和冰片的含量：方法专属性强、灵敏度高、重复性好，从而可有效地控制黑豆馏油软膏的内在质量。 仪器与试药 Aglient 6890N 型气相色谱仪， FID 检测器； SartoriusBP211D、BS224S 电子分析天平； KD500DE 型超声清洗仪。 冰片对照品、桉油精对照品均购自中国食品药品检定研究院，批号分别为：110743-200905(含量以98.0%计)、110788-201004(含量以99.6%计)。黑豆馏油软膏样品由西安康华药业有限公司生产，批号为110804、110805、110806。各原料及阴性对照样品均由西安康华药业有限公司提供。 ( 所用试剂均为分析纯，购买自天津化学试剂有限公司。 ) ( [8] 李永宏，徐 建. GC 法测定痰咳净片中龙脑的含量.安徽医 药，2009，13( 1 2)： 1 498-1499. ) ( [9] 吴小英.毛细管气相色谱法测定卡泊三醇中甲酸残留量[.安 徽医药，2012，16(3)：308-309. ) ( [10 ] 贾 林，刘菊平，金水铭.气相色谱法测定托吡酯中有机溶剂残 ) 2 含量测定 参照中国药典2010年版一部"及文献报道有关桉油精12-6和冰片的含量测定方法71，确定方法如下。 2.1 色谱条件 Rtx-Wax 毛细管柱(柱长30 m，内径0.25mm，膜厚度为0.25 um)；流速为1.5 mL·min，柱温为程序升温：初始温度为60℃，持续7 min，以每分钟15℃的速率升温至140℃，保持5 min；检测器为 FID。理论板数按环己酮峰计算应不低于10000. 2.2 溶液的制备 2.2.1 内标溶液 取环己酮适量，精密称定，加乙酸乙酯制成每1mL含1 mg的溶液，作为内标溶液。 2.2.2 对照品溶液 取冰片对照品8mg、桉油精对照品15mg，精密称定，置10 mL量瓶中，加内标溶液适量使溶解并稀释至刻度，摇匀。 2.2.3 供试品溶液 取本品约2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入内标溶液25 mL，超声处理20 min，摇匀，置冰箱中使基质凝固后滤过，取续滤液放置室温，作为供试品溶液。 ( 留量量.分析测试技术与仪器，2004，10(2)：126-128. ) ( [11] 国家药典委员会.中国药典：二部[S].北京：中国医药科技出版 社，2010：附录61-65. ) ( (收稿日期：2012-12-03，修回日期：2013-03-20) ) 北京豫维科技有限公司联系人：水先生电话：18911849923 2.2.4 阴性对照溶液 分别取缺桉油精和缺冰片的阴性样品，按供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液。 2.3 阴性干扰试验 取对照品溶液、供试品溶液及阴性对照溶液，按上述色谱条件测定，记录色谱图。结果表明样品色谱中，桉油精和冰片峰与相邻成分峰达到基线分离，且阴性对照无干扰。见图1。 2.4 方法学考察 2.4.1 线性关系考察 精密称取桉油精油照品80.48 mg，冰片对照品42.15 mg，置10 mL量瓶中，加内标溶液使溶解并定容至刻度，摇匀，作为对照品浓溶液。精密吸取浓溶液3mL 置10 mL量瓶中，再精密吸取浓溶液各1mL，分别置于2、5、10、25 mL量瓶中，加内标溶液定容至刻度，摇匀，作为标准曲线系列。精密吸取上述溶液各1 pL注入气相色谱仪，测定。分别以进样量为横坐标，A值(对照品峰面积与内标峰面积的比值)为纵坐标，绘制标准曲线，桉油精回归方程为：Y(A)=1.1348X(进样量) +0.0208，r=0.9999，冰片回归方程为：Y(A)=1.102 5X(进样量)+0.018 1，r=0.999 9，结果表明，桉油精在0.3206~8.0158 pg范围内线性关系良好，冰片在0.1652~4.1307 ug范围内线性关系良好。 图1 对照品(A)、黑豆馏油软膏样品(B)、桉油精阴性对照(C) 及冰片阴性对照(D)GC 图 注：1.桉油精( eucalyptol) ，2.冰片( borneol)，3.环己酮( Cyclohexanone)。 2.4.2 精密度试验 按上述色谱条件，精密吸取同一份供试品溶液各1pL，连续进样6次，以A值(对照品峰面积与内标峰面积的比值)计算 RSD(n=6)，桉油精为0.69%，冰片为0.50%. 2.4.3 稳定性试验 取同一批供试品溶液(批号为110806)，在上述相同色谱条件下分别于0、2、5、9、12、18 h进样测定，以A值(对照品峰面积与内标峰面积的比值)计算RSD(n=6)，桉油精为1.7%，冰片为1.2%，结果表明供试品溶液在18h内基本稳定。 2.4.4 重复性试验 取同一批样品(批号为110806)6份，按“2.2.3”项下方法制备供试品溶液，按上述色谱条件进行测定，结果6份样品中桉油精含量平均值(n=6)为17.1 mg *g ，RSD为1.1%；冰片含量平均值( n=6) 为9.3 mg'g：RSD 为1.1%。 2.4.5 回收率试验 取重复性项下已知含量的同一批样品(批号为110806)6份，每份约1g，精密定定，分别精密加入桉油精浓度为2.213 4g·L、冰片浓度为1.037g·L的混合对照品溶液各5 mL，按“2.2.3”项下方法制备供试品溶液；并按上述色谱条件进行测定，计算回收率，桉油精平均回收率(n=6)为98.7% ，RSD 为1.5%；冰片平均回收率(n=6)为98.9%，RSD 为1.6%。 2.5 样品测定 再取不同批号的黑豆馏油软膏(110804和110805)，按“2.2.3”项下方法制备供试品溶液，按上述色谱条件进行测定，用外标法测定含量，结果桉油精含量分别为17.0 mgg和16.9 mgg，冰片含量分别为9.4 mgg-1和9.3mg'g 3 讨论 对不同提取方法进行了研究，分别考察了静置过夜，超声提取和振荡提取不同时间对含量结果的影响，结果发现超声处理20 min 得到的含量值最大，故选择此方法作为样品处理方法。 实验发现，软膏基质对色谱柱有较大的损害，如果不除去基质，长时间进样后色谱峰的分离效果会变差，理论板数也会 下降，考虑到冷冻可以除去基质，故将样品冷冻后滤过，放置到室温进行测定，结果发现冷冻后虽然含量值会有所下降，冷冻前后样品中桉油精的含量 RD 为1.7%，冰片为2.2%，但冷冻可以极大的延长色谱柱的寿命，故实验选择了超声后冷冻的方式除去基质。 另外考察了不同厂家的色谱柱(DB-WAX，柱长30 m，内径250 pm，膜厚度0.5 pm) 进行试验，结果分离度良好，样品含量值较稳定，理论板数符合要求，说明方法耐用性良好。 ( 参考文献： ) ( [1] 国家药典委员会.中国药典： ：一 一部[S].北京：中国医药科技出版 社，2010：136，389. ) ( [2] 王 棋.气相色谱法测定复方艾叶油乳膏中桉油精含量[.中 国药业，2010，19(3)：31 - 32. ) ( 3] 李晓波.野菊花注射液中桉油精、龙脑和樟脑含量测定研究.长春中医药大学学报，2010，26(4)：277-278. ) ( [4] 赖东美，胡珊梅，李玲玲. 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