五味子提取物中天然产物检测方案(液相色谱仪)

[应用纪要]THE SCIENCE OF WHAT'S POSSIBLE. 「应用纪要] Waters 利用SFE和SFC提取和分离五味子提取物中的天然产物 Andrew J. Aubin和Jo-Ann M. Jablonski 沃特世公司(美国马萨诸塞州米尔福德市) 应用优势 Prep 100g SFC系统是一款高度可靠的质谱引导制备级超临界流体色谱仪器，适用于天然产物提取物中的化合物分离。 沃特世解决方案 Prep 100q SFC系统 SFE 500系统ACQUITY UPC2@系统 ChromScope"软件 MassLynx@/FractionLynxI软件 Empower@3软件 Viridis@ BEH OBDTPrep色谱柱 ACQUITY UPC? BEH色谱柱 ACQUITY@QDa@检测器 关键词 分离，纯化，制备型色谱， Prep 100q SFC， 五味子，五味子素A，天然产物，提取物， SFE. UPC? 简介 五味子被广泛用作传统中药药材已有数百年之久的历史。五味子中含有多种有机化合物，其中联苯[a，c]环辛二烯木脂素是许多研究人员都很感兴趣的化合物。在本研究中，我们主要探讨了利用Prep 100q SFC系统从干五味子的超临界流体萃取(SFE)提取物中分离五味子素A (CAS 61281-38-7，也称为五味子甲素，见图1)的可行性。本文所介绍的原理、技术和工具适用于天然产物样品中任意化合物的分离。 图1.五味子素A的化学结构(式量416.5)。 实验 样品描述和提取 利用配备100mL提取容器的SFE 500超临界本体萃取系统对50g粗略剁碎的干燥五味子(StarWest Botanicals， Sacramento，CA，USA)进行60分钟的提取。采用动态提取方法，总流速为50 g/min， 提取压力为200 bar， 并使用99%的CO，和1%的异丙醇做为提取溶剂。提取温度设置为40℃。提取得到约30mL的暗黄色溶液供后续的所有实验使用。在这类定性工作中，使用SFE能够获得不含颗粒物的浓缩提取物，无需再进行过滤、蒸发或者提取之后的其其制备步骤，极大地提高了整体工作流程的速度。我们没有进行优化提取条件的实验，因为已有研究表明，温度或压力的变化对五味子的提取率影响很小1。同一作者还比较了使用SPE萃取法与使用传统溶剂萃取法(甲醇、氯仿/甲醇、己烷和石油醚)提取五味子的效果，结果表明，与SFE相比， 传统溶剂萃取法几乎没有优势。 ACQUITY QDa检测器条件 扫描范围： 150-600m/z 电离模式： ESi+ 数据类型： 质心 锥孔电压： 10V 采样速率： 2 Hz 探头温度： 600℃ ESI毛细管电压： 1.5kV 数据管理 制备型SFC(Prep 100q SFC系统) MassLynx/FractionLynx分析型SFC(ACQUITY UPC2 系统)-Empower 3SFE 500 - ChromScope v1.5 结果与讨论 尽管五味子木脂素有四十种以上?，但五味子素A是含量较为丰富的一种，而且由于具有抗病毒和抗炎作用3，，它在药用提取物中的作用突出。我们使用ACQUITY UPC?系统对五味子的SFE粗提取物进行了分析型色谱分析(图2和3)，在约1.9 min处观察到了一个较大的峰。 ACQUITY UPC?QDa数据确证了该峰的m/z为417.3，与五味子素A(M+H)一致，而且是含量最高的化合物。仅使用简单的1-10%梯度，粗提取物中的五味子素A与相邻峰之间就实现了良好的分离。采用之前所述的技术4将分析型分离放大至Prep 100g SFC系统。 图2.采用ACQUITY UPC?分离五味子的SFE提取物。流速2.5 mL/min， 梯度为5 min内从1%增加到10%，1600 psi， 40℃， 进样体积2pL， UV220nm。 图3.采用ACQUITY UPC?分离五味子的SFE提取物。流速2.5 mL/min， 梯度为5 min内从1%增加到10%，1600psi， 40℃，进样体积2uL，总离子流色谱图150-600m/z。插图为1.9 min处色谱峰的质谱图。 我们通过质量触发(在本例中， m/z 417， 图4)的制备型运行收集五味子素A。然后取出并浓缩收集到的馏分，并采用之前所述的ACQUITY UPC?方法进行分析。使用SFC作为纯化工具时，样品的干燥或浓缩比传统的HPLC方法更快，因为收集物中仅含有机溶剂(残留的助溶剂和补偿溶剂，通常是甲醇)。根据UV220nm的峰面积(图5)分析可知，所收集馏分的纯度显著提高，从粗提取物中的约29%提高到了92%以上。 图4.采用Prep 100q SFC系统分离五味子的SFE提取物。流速100mL/min， 梯度为5 min内从1%增加到10%，100 bar， 40℃，进样体积120pl；上图-PDA 220nm，下图-ACQUITY QDa总离子流色谱图150-600 m/z。绿色条形区域表示执行收集的区域。 图5.采用ACQUITY UPC?分离所收集的馏分。流速2.5mL/min， 梯度为5 min内从1%增加到10%， 1600Psi， 40℃， 进样体积0.5ul，UV220nm。 ( 结论 ) 采用超临界流体萃取技术成功提取了五味子 m采用ACQUITY UPC?分析是SFE提取物，并选择目标化合物(五味子素A)进行了纯化 采用Prep 100g SFC系统， 通过质谱引导的收集方法实现了SFE提取物的纯化 采用ACQUITY UPC?分析纯化的馏分，结果表明馏分的纯度显著提高，从29%提高到了92% 成功验证了仅采用超临界流体技术的萃取、分析、纯化和二次分析工作流程的可行性 ( 参考文献 ) ( 1 . C hoi Y.H. et al. Optimum SFE Condition for Lignans of S chisandra chinensis Fruits. Chromatographia Vol.48， No.9/10， November 1998. ) ( 2. A merican Herbal Pharmacopoeia and TherapeuticCompendium， Schisandra Berry， Editor：Roy Upton， October 1999. ) ( 3. Z heng S. et al. A Concise Total Synthesis of Deoxyschizandrinand Exploration of Its Antiprolifeerative Effects and Those of Structurally Related Derivatives. Chem. Eur. J . 2012， 18，3193-3198. ) ( 4. H udalla C . J. et al. UPC’Stra t egy for S c aling SFC Methods：Applications for Preparative Chromatography. WatersApplication Note， 2014， Part Numb er 7200050 6 4E N . ) 扫一扫，关注沃特世微信 THE SCIENCE OF WHAT'S POSSIBLE. Waters， The Science of What’s Possible， ACQUITY， UPC?， Empower， Viridis， MassLynx和QDa是沃特世公司的注册商标。OBD， ChromScope和FractionLynx是沃特世公司的商标。其它所有商标均归各自的拥有者所有。 利用SFE和SFC提取和分离味子提取物中的天然产物 利用SFE和SFC提取和分离味子提取物中的天然产物 五味子被广泛用作传统中药药材已有数百年之久的历史，含有多种有机化合物，其中联苯[a,c]环辛二烯木脂素是许多研究人员都很感兴趣的化合物。在本研究中，我们主要探讨了利用Prep 100q SFC系统从干五味子的超临界流体萃取（SFE）提取物中分离五味子素A（CAS 61281-38-7，也称为五味子甲素）的可行性。本文所介绍的原理、技术和工具适用于天然产物样品中任意化合物的分离。采用Prep 100q SFC系统，通过质量触发的收集方法实现了SFE提取物的纯化，采用ACQUITY UPC2分析纯化的馏分，结果表明馏分的纯度显著提高，从29%提高到了92%。