动物性食 品中常山酮残留量检测方案(液相色谱仪)

使用高效液相色谱法测定动物性食品中常山酮残留量 应用简讯 食品检测与农业 作者 前 言 吴翠玲 安捷伦科技(中国)有限公司 常山酮(Halofuginone)，为新型广谱抗球虫药，对多种鸡球虫均有较强的抑杀作用，被广泛用于养鸡业。随着常山酮广泛大量地使用，食品残留和环境污染问题也越来越突出。本方法参照食品安全国家标准GB 29693-2013，建立了动物性食品中常山酮残留分析的高效液相色谱法。本方法适用于鸡的肌肉和肝脏组织中常山酮残留量的检测。 常山酮分析 对试料进行样品前处理。称取试料4±0.04g于 50mL离心管中，加胰蛋白酶50mg， 加水2mL (肝脏组织)或水10mL(肌肉组织)，涡旋1 min，用10%碳酸钠溶液调 pH至8.0，于40°℃水浴下酶解3h；取出，放至室温，加10%碳酸钠溶液 2mL， 涡旋1 min， 加乙酸乙酯 20mL，涡旋1 min， 在冰水浴中静置3 min， 立即 5000 rpm 离心2 min， 将上清液转入另一离心管中。下层液用乙酸乙酯20mL重复提取一次，合并两次上清液(乙酸乙酯相)于同一离心管中。加入0.125 mol/L 乙酸铵溶液 10mL， 振摇1min， 静置 2 min。将上层乙酸乙酯相移入另一离心管中，再加0.125 mol/L 乙酸铵溶液 10mL， 重复萃取一次，合并两次水相至同一离心管中，于40℃氮吹，除尽残余乙酸乙酯，备用。 利用 Agilent Bond Elut Plexa 高级聚合物固相萃取小柱对备用液进行净化，并使用配备了 Agilent Poroshell 120 EC-C18色谱柱的高效液相色谱系统对目标物进行快速分析，如图1所示为固相萃取操作流程，如表1所示为液相色谱分析条件。 图1.固相萃取操作流程图 表1.液相色谱条件 液相色谱仪： Agilent 1200 液相色谱系统-二极管阵列检测器 (DAD) 色谱柱： Agilent Poroshell 120 EC-C18， 4.6×100 mm， 2.7 pm 流动相： A) 0.05 mol/L 乙酸铵水溶液 B)乙腈 梯度洗脱： 时间(min) B(%) 0 5 5.1 9 9.1 13 24 流速： 1mL/min 进样量： 25pL 柱温： 30°℃ 检测波长： 243nm 运行时间： 13 min 图2.500 pg/L常山酮标准溶液色谱图(A、B)和光谱图(C) 图 3. 500 pg/L 常山酮标准溶液(红色)、鸡肉基质空白(绿色)和鸡肉中添加125 pg/kg 常山酮的加标试样(蓝色)的色谱图 图4.500 ug/L 常山酮标准溶液(红色)、鸡肝基质空白(绿色)和鸡肝中添加125 ug/kg 常山酮的加标试样(蓝色)的色谱图 表2.鸡肉空白样品加标回收率 添加水平 (pg/kg) 回收率(%) 平均回收率(%) RSD (%) 76.69 12.5pg/kg 70.09 72.62 4.90 (n=3) 71.09 85.30 125 pg/kg (n=3) 85.98 84.61 2.15 82.55 84.74 250 pg/kg (n=3) 93.29 91.36 6.45 96.05 表3.鸡肝空白样品加标回收率 图5.鸡肝中添加 125pg/kg 常山酮的加标试样连续进样(n=6)所得色谱叠加图 添加水平 (ug/kg) 回收率(%) 平均回收率(%) RSD (%) 82.86 12.5 pg/kg (n=3) 81.55 82.02 0.89 81.64 82.67 125 pg/kg (n=3) 85.50 82.95 2.92 80.68 85.39 250 ug/kg (n=3) 85.55 85.72 0.50 86.21 消耗品订购信息 Agilent 可控针阀：部件件12131005 Agilent Vac Elut 20 固相萃取装置：部件号12234103 图6.常山酮基质匹配标准曲线和线性范围(鸡肝基质，50-1000 pg/L) ( Agilent Mega Bond Elut Plexa 固相萃取小柱： 500mg， 6mL， 部件号12259506 ) 如图2-4所示，本文所述高效液相色谱法适用于鸡肉和鸡肝中常山酮残留的检测，基质对检测结果无明显干扰。通过计算，得到此方法检测限为 5 ug/kg、定量限为 12.5 ug/kg。 ( Agilen t Poroshell 120 EC-C18色谱柱：4.6×100mm， 2.7 pm， 部件号695975-902 ) 如图5所示，鸡肝中添加 125 pg/kg 常山酮的加标试样连续进样6次考察其色谱系统重复性，常山酮峰面积 RSD 值为1.09%，表明仪器系统具有很好的稳定性；本文所述方法在50-1000 pg/L线性范围内常山酮的线性相关性良好，相关系数R均大于0.9999， 如图6所示；如表2、3所示，在12.5-250 pg/kg 的添加水平下，鸡肉和鸡肝空白样品中常山酮的回收率为 72.0%-91.0%， RSD ≤ 7%(n=6)， 表明该方法的准确度和精密度完全能满足喹诺酮类药物多残留分析的要求。 查找当地的安捷伦客户中心： www.agilent.com/chem/contactus-cn 免费专线：800-820-3278，400-820-3278(手机用户) 联系我们： LSCA-China_800@agilent.com 在线询价： www.agilent.com/chem/erfq-cn www.agilent.com 安捷伦对本资料可能存在的错误或由于提供、展示或使用本资料所造成的间接损失不承担任何责任。 本文中的信息、说明和技术指标如有变更，恕不另行通知。 回安捷伦科技(中国)有限公司，2016 2016年12月22日，中国印刷 5991-7797CHCN Agilent Technologies Agilent Technologies     常山酮 (Halofuginone)，为新型广谱抗球虫药，对多种鸡球虫均有较强的抑杀作用，被广泛用于养鸡业。随着常山酮广泛大量地使用，食品残留和环境污染问题也越来越突出。本方法参照食品安全国家标准 GB 29693-2013，建立了动物性食品中常山酮残留分析的高效液相色谱法。本方法适用于鸡的肌肉和肝脏组织中常山酮残留量的检测。