奶制品中三聚氰胺检测方案(毛细管柱)

超高惰性气相色谱柱及配件应用文集三—食品安全 安捷伦DB-5MS UI毛细柱在气相色谱质谱联用法测定三聚氰胺中的应用 关键词 DB-5MS UI 色谱柱气质联用 三聚氰胺 作者 摘要 陈亮 河北三元食品有限公司 试样经超声提取、固相萃取净化后，进行硅烷化衍生，安捷伦 DB-5MS UI 毛细柱作为分析柱，采用气相色谱分离，衍生产物采用选择离子监测质谱扫描模式 (SIM)，用化合物的保留时间和质谱碎片的丰度比定性，外标法定量，确认了乳制品中三聚氰胺气相色谱·质谱联用分析方法。方法的线形曲线范围0.05~2.0ug/ml，曲线相关系数为0.998，定量检出限0.05mg/kg。不同基底样品高低添加浓度的加标回收率为75.0~90.0%，相对偏差均小于10%。 2008年，三聚氰胺事件给本就在与国外品牌竞争中处于劣势的国内乳品行业以沉重打击，同时也引发了人们对食品安全的更加广泛的关注，三聚氰胺的检测方法对提高乳制品质量、保护公众健康安全意义重大。 为提高检测质量，本文通过应用安捷伦 DB-5MS UI 毛细柱分离，质谱法定性定量，进一步就检测方法参数进行了调整、确认。经检测实验，证实该法准确、简便、实用。 1材料与方法 1实验部分 1.1仪器与试剂 岛津GC/MS GC-2010/GCMS-QP2010气相色谱-质谱联用仪，配有电子轰击电离离子源(EI)。 甲醇：色谱纯；吡啶：优级纯；衍生化试剂：N，0-双三甲基硅基三氟乙酰胺(BSTFA)+三甲基氯硅烷 (TMCS)(99+1)，色谱纯；乙酸铅；除非另有说明，所有试剂均为分析纯，水为GB/T 6682 规定的一级水；氨水：含量为25%~28%；三氯乙酸；三氯乙酸水溶液(1%)；氨化甲醇溶液(5%)，量取5mL氨水和95mL甲醇，混匀；三聚氰胺标准品： CAS 108-78-01，纯度大于99.0%；乙酸铅水溶液(22g/L)；三聚氰胺标准储备液：准确称取100mg(精确到0.1mg)三聚氰胺标准品于100 mL容量瓶中，用甲醇水溶液(1：1)溶解并定容至刻度，配制成浓度为1 mg/mL的标准储备液，于4℃避光保存；三聚氰胺标准溶液：准确吸取三聚氰胺标准储备液1mL于100mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，此标准溶液1 mL 相当于10pg三聚氰胺标准品，于4℃冰箱内储存，有效期3个月。混合型阳离子交换固相萃取柱(90mg/6mL)；氮气：纯度大于等于 99.999%；氦气：纯度大于等于 99.999%。 1.2分析条件 1.2.1气相色谱条件 色谱柱安捷伦 DB-5MS UI毛细柱，30m×0.25mm×0.25pm (部件号：122-5332UI)；柱温升温程序：起始温度70℃，保持1min， 以10℃ /min 的速率升温至200℃，保持10 min， 后运行：以40℃ /min 的速率升温至240℃，保持2 min； 进样口温度：250℃；载气：高纯氦气，流量1ml/min；不分流进样。 1.2.2质谱条件 离子源：电子轰击(EI)离子源，电离能量：70eV；离子源温度：230℃；传输线温度：280℃；全谱扫描，质量扫面范围m/z25~800； 溶剂延迟 10min。 1.3样品前处理 1.3.1液态奶、奶粉、酸奶和奶糖等 称取5g(精确至0.01 g) 样品于50mL具塞比色管，加入25mL三氯乙酸溶液(1%)，涡漩振荡30s， 再加入15mL三氯乙酸溶液，超声提取15min，加入2mL乙酸铅溶液(22g/L)， 用三氯乙酸溶液定容至刻度。充分混匀后，转移上层提取液约30mL至50mL离心试管，以不低于4000 r/min 离心10min。上清液待净化。 1.3.2奶酪、奶油和巧克力等 称取5g(精确确0.01g)样品于50mL具塞比色管中，用5mL热水溶解(必要时可适当加热)，再加入20mL三氯乙酸溶液(1%)，涡漩振荡30s， 再加入15mL三氯乙酸溶液超声提取及以下操作同1.3.1。若样品中脂肪含量较高，可以先用乙醚脱脂后再用三氯乙酸溶液提取。 1.3.3样品净化 依次用3mL甲醇、5mL 水活化阳离子交换固相萃取柱(90mg/6mL)。准确移取 5mL的待净化虑液至固相萃取柱中。再用3mL水、3mL甲醇淋洗，弃淋洗液，抽近干后用3mL氨化甲醇溶液(5%)洗脱，收集洗脱液，50℃下氮气吹干。 1.3.4样品衍生化 将“1.3.3”制备的氮气吹干残留物中分别加入600pL吡啶(优尤级)和200pL衍生化试剂 (BSTFA) + (TMCS) (99+1)，震荡混合均匀，在70℃烘箱中衍生30min后， GC-MS法定量确认检测。 2结果与讨论 2.1样品提取 乳制品中三聚氰胺的提取一般采用酸性溶液提取[1]，在此条件下另外再加入乙酸铅溶液，沉淀样品中的蛋白和脂肪，经充分混合超声提取，样液过滤后，更加利于净化过程中滤液经固相萃取柱净化。 待测样品中4个离子(m/z99、171、327和342)的丰度比与标准品的相同离子丰度比相差不大于20%。以离子 m/z 327 定量。 2.5线性范围及检出限 在上述条件下，以外标法定量，测定工作曲线。线性方程为Y=738184.3X-13938.5，相关系数r2=0.998。定量限为 0.05mg/kg。 2.6方法的回收率、准确度与重现性 分别取一定质量的奶粉、牛奶、奶酪样品，分别测定高低浓度的加标回收率为75.0~90.0%。平行测定6份样品，考察方法的精密度。三聚氰胺含量的相对标准偏差均小于10%，符合方法的要求。 表1三聚氰胺的回收率及测定精密度(n=6) 样品 空白样/(mg/kg) 添加量/(mg/kg) 回收量/(mg/kg) 回收率/% RSD/% 奶粉 0 0.2 0.17 85.0 8.7 1.0 0.90 90.0 6.5 牛奶 0 0.2 0.15 75.0 9.3 1.0 0.81 81.0 7.2 0.2 0.15 75.0 9.4 奶酪 1.0 0.83 83.0 7.3 2.7实际样品的测定 应用上述方法，对市售婴幼儿乳粉及液体奶进行了抽样检测，检测结果均是未检出。 这一结果也说明经过国家食品安全部门的严格监管，各乳品生产企业的高度重视和积极管控，当前乳制品的质量已经有了极大改善，已能够满足公众对放心奶的需求。 图1三聚氰胺标准品总离子流图 图2三聚氰胺标准品质谱图 ( 参考文献： ) 1. GB/T 22388—2008 试样经超声提取、固相萃取净化后，进行硅烷化衍生，安捷伦 DB-5MS UI 毛细柱作为分析柱，采用气相色谱分离，衍生产物采用选择离子监测质谱扫描模式（SIM），用化合物的保留时间和质谱碎片的丰度比定性，外标法定量，确认了乳制品中三聚氰胺气相色谱-质谱联用分析方法。方法的线形曲线范围 0.05～2.0ug/ml，曲线相关系数为 0.998，定量检出限 0.05mg/kg。不同基底样品高低添加浓度的加标回收率为 75.0 ～90.0%，相对偏差均小于 10%。2008年，三聚氰胺事件给本就在与国外品牌竞争中处于劣势的国内乳品行业以沉重打击，同时也引发了人们对食品安全的更加广泛的关注，三聚氰胺的检测方法对提高乳制品质量、保护公众健康安全意义重大。为提高检测质量，本文通过应用安捷伦 DB-5MS UI 毛细柱分离，质谱法定性定量，进一步就检测方法参数进行了调整、确认。经检测实验，证实该法准确、简便、实用。