硫酸链霉素中有关物质检测方案(液相色谱仪)

上海通微分析技术有限公司Unimicro (Shanghai) Technologies Co.， Ltd. 兽药硫酸链霉素有关物质的测定 1.背景介绍 硫酸链霉素为O-2-甲氨基-2-脱氧-α-L-葡吡喃糖基-(1→2)-O-5-脱氧-3-C-甲酰基-0-L-来苏呋喃糖基-(1→4)-N1，N3-二脒基-D-链霉胺硫酸盐。硫酸链霉素属于氨基糖苷类抗生素，化学结构中缺少强紫外特征吸收基团，难以采用常规紫外检测器检测。采用通用型的蒸发光散射检测器(ELSD)不需物质具有光学吸收特性，可以很好的实现硫酸链霉素的检测。因此本实验按照《中国人民共和国兽药典》2015版的要求，采用液相色谱蒸发光散射检测器(HPLC-ELSD)建立了硫酸链霉素中有关物质的测定方法，方法准确、灵敏、简便快速，可以有效实现兽药硫酸链霉素的质量控制。 2.样品制备 取本品适量，加水溶解并稀释制成成1mL中约含链霉素3.5 mg的溶液，作为供试品溶液；精密量取适量，用水定量稀释制成每1mL中约含链霉素 35 ug、70 ug、140pg的溶液，作为对照溶液(1)、(2)、(3)。 3.测试条件 仪器 EasySep@-1020液相色谱系统，配备 ELSD检测器 色谱柱 Bischoff ProntoSIL C18 AQ PLUS，250×4.6 mm， 5 um 流速 0.5 mL/min 柱温 35°C 流动相 0.15 mol/L三氟乙酸溶液 载气流量 2.5 L/min 漂移管温度 85℃ 4.测试结果 1)色谱图 图1对照溶液(1)色谱图 图2对照溶液(2)色谱图 序号保留时间名称 峰面积% 峰面积理论塔板数 1 11.002硫酸链霉素100 10783 5620 总计 100 10783 序号保留时间名称 峰面积% 峰面积理论塔板数 1 10.904硫酸链霉素100 26769 5820 总计 100 26769 序号 保留时间名称 峰面积% 峰面积 理论塔板数 1 10.875 硫酸链霉素 100 61678 6382 总计 100 161678 图3对照溶液(3)色谱图 图4供试品溶液色谱图 序号保留时间名称 峰面积% 峰面积理论塔板数 1 5.244 1.892 115014 5542 2 6.497 0.03523 2142 11559 3 6.862 0.07953 4835 10252 4 7.548 0.1352 8222 10167 5 8.658 0.1947 11838 14106 6 9.994 0.02526 1536 13991 7 10.747硫酸链霉素 97.28 5914797 6469 8 11.493 0.05578 3391 195004 9 11.658 0.0253 1538 10 11.848 0.2008 12205 62659 11 13.748 0.02871 1746 77895 12 16.295 0.04348 2644 118753 总计 100 6079908 2)线性关系考察 精密量取对照溶液(1)、(2)、(3)各10pL，分别注入液相色谱仪(每一浓度连续进样3针)，记录色谱图。以对照溶液浓度的对数值与相应峰面积的对数值计算线性回归方程： 表1硫酸链霉素标准曲线 组份名称 标准曲线 R2 硫酸链霉素 y=0.8399x+3.2707 1 图5硫酸链霉素标准曲线 5.结论 采用 EasySep@-1020 液相色谱系统，配备 ELSD 检测器，可以实现硫酸链霉素有关物质分析， 方法准确、灵敏度高，可以满足日常分析要求。 6.配置列表 仪器配置 EasySep@-1020二元梯度液相色谱仪 AS1020自动进样器 AT-330柱温箱 ELSD-UM5000检测器 Unimicro 色谱工作站 地址：上海市浦东新区张江高科技园区松涛路489号 C01座 邮编：201203 电话：021-3895358850801569(技术服务专线) 传真：021-38953636 邮箱： info@unimicrotech.com.cn 网址：www.unimicrotech.com.cn