饲料中喹乙醇检测方案(生化耗材)

引领分析科技尽在北京谱朋-企业QQ：4006 165163 作者 张聪聪1，吴翠玲1 1安捷伦科技(中国)有限公司 固相萃取结合 HPLC-MS/MS法测定饲料中的喹乙醇应用简讯食品检测与农业 前言 2017年央视3.15晚会曝光了动物体内的兽药残留问题，有关养殖户在饲料中非法添加喹乙醇这种“新型瘦肉精”的报道引起了广大消费者的关注。 喹乙醇商名快育灵，是喹恶啉类二氧化物，喹乙醇能够抑制肠道内的有害菌，保护有益菌群，增加饲料对动物的消化能力，从而促进动物的生长发育。因其价格低廉，并能有效的预防疾病，因此被大量使用。然而喹乙醇的违规滥用导致毒性蓄积，不仅可以使动物中毒或死亡，而且残留在肉食品中对人体产生较大危害。农业部已限制使用喹乙醇，并执行严格休药期。因此，建立一种简单高效的检测方法，对于喹乙醇的安全监管有重要意义。 本文建立了一种固相萃取结合 HPLC-MS/MS法测定饲料中喹乙醇的方法。方法用甲醇水(甲醇：水=5：95)提取饲料样品，使用 AgilentBond Elut PPL (Part No.12105005)固相萃取小柱净化，经 Poroshell 120 SB-AQ (P.N.685775-914)色谱柱进行快速分析。 喹乙醇分析 将饲料样品匀质混合均匀。称取 2g样品于50mL离心管中，加入 20mL 甲醇水提取液(甲醇：水=5：95)，涡旋均匀后至于摇床中，室温下以200r/min 的震荡速度避光震荡 45min。提取液在 8000r/min下离心10min，取上清液备用。 引领分析科技尽在北京谱朋-企业QQ：4006 165163 取 2mL 备用液， 经Agilent Bond ElutPPL 固相萃取小柱净化后，使用配备了Poroshell 120 SB-AQ (P.N.685775-914)色谱柱的液质联用系统进行分析。如图1所示为固相萃取净化流程。 图1.固相萃取操作流程 仪器条件 色谱条件 色谱柱： Poroshell 120 SB-AQ 色谱柱 柱温：35C° 流动相A：水相(0.1%甲酸) 流动相B：乙腈(0.1%甲酸) 进样量：5uL 表1梯度洗脱程序 时间((min) A% B% 0 95 5 0.5 95 5 1.0 85 15 5.0 55 45 5.5 2 98 7.5 2 98 7.6 95 5 质谱条件 离子源：ESI* 干燥气温度：300C° 干燥气流速： 7L/min 雾化器压力： 35psi 鞘气温度：350C° 鞘气流速：11L/min 毛细管电压：3000V 表2多反应监测模式监测的离子对 前级离子 子离子 碎裂 碰撞 (m/z) (m/z) ：) 电压(V) 能量(eV) 212 110 264 143 110 结果与讨论 如图2~4，表3所示，本文所示固相萃取结合液相色谱串联质谱法适合不同种类饲料中喹乙醇的测定。方法在25ng/mL~1000 ng/mL(基质空白液配制)范围内线性相关，R=0.996，在200~1000 ug/Kg 添加水平下，回收率范围为 78%~92%， RSD≤3.6，方法在不同饲料中的定量限为200ug/Kg，检测限为60ug/Kg。 引领分析科技尽在北京谱朋-企业QQ：4006 165163 表3.喹乙醇在不同饲料中的空白加标回收率 结论 饲料 添加水平 回收率 RSD 种类 (ug/Kg) (%) (%) 86.9 200 87.7 1.0 85.9 81.4 鸡预混合 400 86.2 3.2 81.8 78.2 1000 81.2 1.8 81.3 89.0 猪浓缩 200 90.4 1.3 91.3 81.8 400 87.5 3.6 83.2 图3.喹乙醇 200ppb标品(绿色)及鸡预混饲料基质标(红色)、200 ug/Kg添加样品(蓝色)、基质空白(黑色)的 MRM 叠加色谱图。 图4.喹乙醇200ppb标品(绿色)及猪浓缩饲料 基质标(红色)、200 ug/Kg添加样品(蓝色)、基质空白(黑色)的MRM 叠加色谱图。 本文方法所采用的 Agilent Bond Elut PPL (PartNo.12105005)固相萃取小柱是一款极性改性的苯乙烯烯二乙烯基苯聚合物， PPL 可以保留极性较强的化合物。由于填料粒径很大，该固定相方便粘性或富含颗粒的水溶性样品通过，同时其高比表面积和强疏水作用确保了洗脱的高回收率和重现性。 色谱柱：Poroshell 120 SB-AQ 2.1x100mm,2.7μm,(P.N. 685775-914)柱温：35℃流动相A：水相（0.1%甲酸）流动相B：乙腈（0.1%甲酸）进样量：5μL表1 梯度洗脱程序