火锅底料中罂粟碱、吗啡、那可丁、可待因和蒂巴因检测方案(生化耗材)

引领分析科技尽在北京谱朋-企业QQ：4006 165163 引领分析科技尽在北京谱朋-企业QQ：4006 165163 Bond Elut Plexa PCX 结合 LC-MS/MS分析火锅底料中的罂粟碱、吗啡、那可丁、 作者 前言 李典晏、梁茉刚深圳计量质量检测研究院吴霞 罂粟壳是干燥之后的罂粟果壳，其成分包括罂粟 碱、吗啡、那可丁、可待因、蒂巴因等多种生物碱，长 安捷伦科技(中国)有限公司 期食用含有罂粟壳的食品将导致慢性中毒，最终上瘾。 一些不法商贩利用罂粟壳的上瘾特性，在火锅底料中使 用罂粟壳，以此牟取暴利。火锅底料成分复杂，对其中主要的罂粟壳生物碱测定有很大的干扰，本文使用BondElut Plexa PCX 阳离子交换固相萃取柱结合LC-MS/MS建立了火锅底料中罂粟碱、吗啡、那可丁、可待因和蒂巴因的分析方法。该方法罂粟碱、吗啡、那可丁、可待因、蒂巴因的定量限分别为6 ug/kg、30ug/kg、6 ug/kg、30 ug/kg、6ug/kg。罂粟碱、那可丁和蒂巴因添加浓度范围为6ng/kg~120 ug/kg， 吗啡、可待因添加浓度范围为30 ng/kg~600ug/kg 时，回收率为 吗啡 蒂巴因 65%~110%，RSD≤10%(n=3)。方法具有很好的稳 定性和良好的回收率结果。 那可丁 引领分析科技尽在北京谱朋-企业QQ：4006 165163 1实验部分 1.1仪器与试剂 液相色谱-串联质谱仪 罂粟碱、吗啡、那可丁、磷酸可待因和蒂巴因标准品：上海安谱科学仪器有限公司 内标：：小吗啡-D3，可待因-D3： 上海安谱科学仪器有限公司 1.2样品前处理 称取混匀的火锅底料样品2g(精确至0.01g) 至50mL 离心管中，依次加入已知浓度的标准品和内标溶液、5ml 0.1mol/L HCL 溶液、5 ml乙腈，涡旋混合2min， 加入10ml正己烷，漩涡30s，振荡提取 30min。 以10000r/min 转速离心3min，弃去正己烷层，过 Bond Elut Plexa PCX(60mg，3ml)固相萃取柱净化，净化过程如下所示： 1.3液相和质谱条件 液相色谱柱为亚二微米C18， 2.1x50mm Column。流动相A：水(含0.1%体积比的甲酸)，B：乙腈，柱温30℃；进样量4L，流速为0.3 mL/min。洗脱梯度表见表1. 表1梯度洗脱程序 Time(min) B% 0.00 10.0 2.50 45.0 2.60 90.0 引领分析科技尽在北京谱朋-企业QQ：4006 165163 3.50 90.0 3.60 10.0 质谱参数(ESI+模式)： MRM参数见表2。 表2五种罂粟壳生物碱的 MRM 参数 项目 母离子 定量子离子 碰撞能量 定性子离子 碰撞能量 离子化方式 罂粟碱 340.2 202.1 35 171.1 48 ESI+ 吗啡 286.2 201.1 34 165.1 51 ESI+ 那可丁 414.2 220.2 31 353.2 33 ESI+ 可待因 300.2 215.1 34 165.1 50 ESI+ 蒂巴因 312.2 58.1 16 251.2 38 ESI+ 吗啡-D3 289.4 185.2 40 165.2 53 ESI+ 可待因-D3 303.5 215.3 35 165.2 60 ESI+ 2 结果与讨论 根据5种生物碱类化合物的结构和文献报道，可以采用电喷雾离子源正离子模式检测，经过优化后的色谱图见图1。 图 1 5种罂粟壳生物碱标准物质的 MRM 谱图(从上往下分别为：总离子流图；罂粟碱： 1ppb；吗啡：5ppb；那可丁1ppb；可待因 5ppb；蒂巴因1ppb) 分别向空白火锅底料中添加标准品测试回收率，回收率结果在65%~110%， RSD 在 1.2%~8.9%之间，见表3.空白样品和加标样品的谱图分别如图2、图3所示，可以看出样品经 Bond ElutPlexa PCX 净化后，基质效应很小，可以达到很好的净化效果和很高的回收率结果。 图 2 空白样品的 MRM 谱图(从上往下分别为：总离子流图；罂粟碱；吗啡；那可丁；可待因；蒂巴因) 引领分析科技尽在北京谱朋-企业QQ：4006 165163 图3 加标样品的 MRM 谱图(从上往下分别为：总离子流图罂粟碱： 6ppb；吗啡： 30ppb；那可丁6ppb；可待因 30ppb；蒂巴因6ppb) 表3火锅底料中的罂粟碱、吗啡、那可丁、可待因、蒂巴因添加回收率结果 化合物 添加浓度回收率%(6ug/kg) RSD% 添加浓度回收率%(60ug/kg) RSD% 添加浓度回收率%(120ug/kg) RSD% 罂粟碱 105 5.5 106 5.5 104 3.8 那可丁 76 2.2 83.1 3.4 77.4 3.1 蒂巴因 88 8.3 84.1 8.5 76.4 5.5 化合物 添加浓度回收率%(30ug/kg) RSD% 添加浓度回收率%(300ug/kg) RSD% 添加浓度回收率%(600ug/kg) RSD% 吗啡(内标法) 79 5.3 72.1 4.8 67.4 6.2 可待因(内标法) 105 7.5 78.5 8.9 73.5 1.2 3结论 利用安捷伦科技的 Bond Elut Plexa PCX 固相萃取柱和高灵敏度液质联用技术，可以实现对问题火锅底料中罂粟碱、吗啡、那可丁、可待因、蒂巴因的检测确证分析，为罂粟碱类生物碱的快速筛查确证分析提供了有力的解决方案。 引领分析科技尽在北京谱朋-企业QQ：4006 165163 4订货须知 安捷伦 Vac Elut 20 固相萃取装置， P/N.12234103 Bond Elut PLexa PCX60mg， 3mL， P/N.12108603 服务热线：：8008203278 服务热线：： 液相色谱柱为亚二微米 C18 ，2.1x50 mmx1.8um 流动相 A :水（含 0.1% 体积比的甲酸）， B:乙腈，柱温 30℃；进样量 4µL，流速为 0.3 mL/min，洗脱梯度见表1