盐酸金刚乙胺片中溶出度检测方案(毛细管柱)

北京豫维科技有限公司联系人：水先生电话：18911849923中国药事2013年第27卷第1期45 毛细管气相色谱法测定盐酸金刚乙胺片的溶出度 张 丽，信婷婷1，岳青阳，张 迪，修 鸣(辽宁省食品药品检验所，沈阳 110023；!上海同联生物技术有限公司) 摘要： 目的建立GC法测定盐酸金刚乙胺片溶出度的方法。方法照《中国药典》2010年版二部附录溶出度测定法中第二法，以蒸馏水500 mL为溶剂，转速50 r· minl， 30 min 时采样。采样后以 GC法测定，经氢氧化钠碱化处理，正己烷提取，以金刚烷为内标物质，采用分流进样法，以RESTEK Rtx-5毛细管色谱柱((30m×0.32 mm ×0.25 um)为分析柱进行分离测定。结果盐酸金刚乙胺在3.98~79.60 ug范围内线性关系良好(r=0.9999)；平均回收率为99.82%， RSD=0.56%(n=9)。结论该方法简便、快速、准确，能有效控制盐酸金刚乙胺片的质量。 关键词： 盐酸金刚乙胺；盐酸金刚乙胺片；溶出度；毛细管气相色谱法 中图分类号：R927.11 文献标识码：A 文章编号：1002-7777(2013) 01-0045-04 Capillary GC Determination of Dissolution of Rimantadine Hydrochloride Tablets Zhang Li， Xin Tingting'， Yue Qingyang， Zhang Di and Xiu Ming ( Liaoning Institute for Food and DrugControl， Shenyang 110023； Shanghai Tonglian Biotech Co. Ltd) ABSTRACT： Objective To establish a GC method for detecting dissolution of rimantadine hydrochloridetablets. Methods According to Appendix X C Ⅱ of ChP (2010 edition) Vol. Ⅱ， sampling was performedunder conditions of dissolution medium 500 mL of water and rotating speed 50 rpm at 30min. Then thedissolution solution of the tablets was taken and analyzed by the GC method.The solution was alkalizedwith sodium hydroxide， and diluted by n-hexane， and then separated by Rtx-5 capillary column(30 m×0. 32 mm×0.25 pm) with split injection， using adamantine as the internal reference. Results A goodlinearity of rimantadine hydrochloride was achieved in the range of 3.98-79.60 ug， with average recoveryof 99.82%，RSD=0.56%(n=9). Conclusion The method is accurate， simple， rapid method with goodreproducibility for the quality control of rimantadine hydrochloride tablets. KEY WORDS： rimantadine hydrochloride； rimantadine hydrochloride tablets； dissolution；capillarygas chromatography 盐酸金刚乙胺 (Rimantadine Hydrochloride)为抗病毒药，通过抑制病毒颗粒在宿主细胞内脱壳，防止病毒复制。用于抗A型禽流感病毒效果优于金刚烷胺，而肝、肾和神经系统较金刚烷胺小，能有效杀死病毒减轻全身性或呼吸系统疾病症状、抑制甲型H1N1流感病毒[2-31。现行质量标准[4-5]中采用紫外分光度法和 GC 法检测其片剂的溶出度。前者需需有毒物质2，4-二硝基氟苯衍生；后者使用填充柱法，灵敏度较低、耗时较长，且溶 出度方法较不合理。本文参照现行标准及相关文献L6-8]改进了溶出度试验方法，筛选了更合理的皂化条件，建立了毛细管气相色谱法测定盐酸金刚乙胺片溶出度的方法，该方法灵敏度高、专属性强、准确，重现性好，能更好地对该制剂的质量进行控制。 1 仪器与试药 1.1 仪器 SHIMATSU GC2010 Plus 气相色谱仪， GCsolution工作站(2.32.00版)； RCZ-8D型药物溶 ( 作者简介：士主约 药w.uwerchrr a . com 邮箱wat er1102@163 ) 出仪(天津大学精密仪器厂)。 1.2 试药 盐酸金刚乙胺片(A公司，规格：0.1g，批号：0610023)、金刚烷对照品(B公司，批号：11042075436，含量：99.7%)及盐酸金刚乙胺工作对照品(A公司，批号：1105089，含量：99.8%)。正己烷为色谱纯，其他试剂试药均为分析纯。 2 色谱条件 色谱柱：： 以 RESTEK Rtx-5毛细管色谱柱(30m×0.32mm×0.25um)为分析柱， FID检测器。进样口温度：220℃；检测器温度：250℃。分流比：1：5。柱温：：150℃。载气为N2，恒流洗脱：2.0 mL·min。进样量：2uL。理论板数按金刚乙胺峰计算不低于3000。在此条件下待测组分与溶剂及内标物质均有较好的分离度，见图1。 1.溶剂(正己烷)；2.内标物质(金刚烷)；3.金刚乙胺。 图1 系统适用性色谱图 3 溶液的制备 3.1 内标溶液 精密称取干燥至恒重的金刚烷对照烷 0.01755g，置500 mL量瓶中，加正烷烷溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。 3.2 供试品溶液 取本品，照溶出度测定法(《中国药典》2010年版二部附录XC第二法)，以水500 mL 为溶出介质，转速为50 rpm，依法操作，经30 min 时，取溶液10mL， 经0.45 um 微孔滤膜滤过，精密量取续滤液2mL， 加1 mol·L氢氧化钠溶液5mL，振摇15 min，加内标溶液1mL提取，静置分层，取有机层作为供试品溶液。 3.3 对照品溶液 精密称取干燥至恒重的盐酸金刚乙胺对照品0.01024 g， 置50mL量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取上述溶液2 mL， 加1mol·L氢 氧化钠溶液5 mL， 振摇15 min， 加内标溶液1 mL提取，静置分层，取有机层作为对照品溶液。 4 方法学考察 4.1 辅料干扰试验 取处方量空白辅料及盐酸金刚乙胺片样品，分别置溶出杯中，按本文的溶出度测定法操作，按上述色谱条件分别进样2uL，记录色谱图。结果表明辅料对测定无干扰，见图2。 图2 溶出度辅料干扰试验色谱图 4.2 线性关系考察 取干燥至恒重的盐酸金刚乙胺对照品19.90 mg，置100 mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀；稀释成浓度约为0.05，0.1，0.2，0.5，1 mg·mL白的溶液，作为系列标准溶液。分别精密量取上述溶液各2mL，依法操作，精密量取2uL， 注入气相色谱仪，记录峰面积，用供试品峰面积与内标峰面积比(Y)与绝对进样量(X)进行线性回归，经计算， 得回归方程： Y=5.8287X-1.364×10 r=0.9999 结果表明，盐酸金刚乙胺在进样量为3.98~79.60 ug之间的线性关系良好。 4.3 精密度试验 取浓度为0.2 mg·mL'的对照品溶液，分别重复进样6次，依法测定峰面积，RSD 为0.50%。 4.4 稳定性试验 取浓度为0.2mg·mL的对照品溶液，室温放置0，2，4，66，，8h，分别进样测定峰面积，RSD=0.61%，表明溶液在8h内基本稳定。 4.5 回收率试验 取盐酸金刚乙胺对照品约0.0128，0.0200，0.0240g， 各3份，精密称定，置100 mL量瓶中，按处方量加人空白辅料，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过。精密量取续滤液2mL， 按“3.3”项下方法配制。按“2”项下色谱条件，按内标法计 算回收率。结果，平均回收率为99.82%，RSD=0.56%(n=9)。 5 溶出度试验 5.1 溶出曲线 取样品，照溶出度测定法(《中国药典》2010年版二部附录 XC 第二法)，以水500 mL 为溶出介 质，转速分别为50 rpm 和75 rpm，依法操作，经1，7，15，20，30，40 min 分别取样10 mL(同时补充溶出介介)，经0.45um 微孔滤膜滤过，精密量取续滤液2 mL， 按“3.2”项下方法配制供试品溶液。按“2”项下色谱条件，按内标法计算累计溶出量，结果见图3。 a.浆法50 rpm溶出均一性曲线(A公司)； b. 浆法50 rpm溶出均一性曲线(B公司)； c. 浆法75 rpm溶出均一性曲线(A公司)； d. 浆法75 rpm 溶出均一生曲线(B公司)。 图3溶出均一性曲线 结果显示，转速为 50 rpm， 取样时间为 30 min时能溶出完全，故选择转速 50 rpm， 取样时间 30 min。 5.2 样品溶出度测定 取本品6片，照溶出度测定法(《中国药典》2010年版二部附录 XC第二法)，以水 500 mL 为溶出介质，转速为50 rpm， 依法操作，经30 min 时，取溶液10 mL，经0.45 um微孔滤膜滤过，精密量取续滤液2mL， 按“3.2”项下方法配制供试品溶液。按“2”项下色谱条件，按内标法计算出每片的溶出量。连续3个批号样品的溶出度测定结果见表1。 表1 连续3个批号样品的溶出度测定结果 % 批号 1 2 3 4 5 6 均值 110201 98 96 92 100 91 98 96 110202 95 96 95 95 92 93 94 110203 80 85 91 91 97 95 90 讨论 盐酸金刚乙胺片在国内仅有两个企业生产，其现行标准为国家食品药品监督管理局标准(试行)YBH02392003和国家药品监督管理局标准(试行)WS-(X-258)-2004Z。YBH02392003中采用填充柱法测定其溶出度，灵敏度低、峰形较差、分析时间长。WS-(X-258)-2004Z用采用紫外分光光度法，测定前需要衍生化，过程繁琐，且其衍生化试剂2，4-二硝基氟苯有剧毒不利于环保。本文建立的溶出度测定法为毛细管柱法，灵敏度更高、操作简便、准确，能更好地控制盐酸金刚乙胺的质量。 YBH02392003中溶出度测定法为《中国药典》2010年版二部附录 XC 第三法，以200 mL 水为溶出介质。本文建立的方法参照 USP34 版中盐酸金刚乙胺片的溶出度方法，以500 mL水为溶出介质， 方法简便。其取样量应根据使用说明书，取半次或一次口服剂量为宜，避免由于取样量过少而无法满足检测灵敏度的需要。本试验以甲醇为溶剂，主要考虑到各化合物的溶解行为且适用于质谱分析，在试验条件摸索阶段，曾试用乙腈、氯仿提取，结果虽极性杂质减少但目标化合物峰面积减小，仅为甲醇提取峰面积的1/3，最终确定溶剂为甲醇。 3.2 色谱柱及柱温的选择 分别采用了 C18、C8色谱柱进行试验，结果表明，采用25 cm C8色谱柱分离效果最佳；流动相采用乙腈-水体系，非常适合于质谱检测，且各化合物极性差距小，等度洗脱即可很好地分离。尝试20，30，45℃3种柱温，发现在45℃柱温下，6种目标化合物的峰形及分离度均优于另外2种柱温。 3.3耐用性试验 采用TIANHE Kromasil C8色谱柱(4.6mm×250 mm，5 pm) 代替 Waters C8色谱柱(4.6mm×250 mm， 5 um)， 进行了分离度和检测限试验，结果表明该方法色谱柱耐用性良好。 目前，检测中药制剂和保健品中添加化学药的的常用方法有薄层色谱法4、高效液相色谱法5、液质联用法等L6-8]。其中，薄层色谱法和高效液相色谱法由于受到专属性的制约，只能作为初筛方法，其结果均需采用液质联用法进行最终的确证，才能作为药品监管部门的处罚依据。本文建立了6种最为常用的肾上腺皮质激素类药物的液质联用测 ( CoeocoeoeoeDeoeocococococoeocococococococococoeoeocococococoeococococococoeocococococococpcocoeo ) (上接第47页) 其溶出介质体积比原方法更符合漏槽效应。 在本文的色谱条件下， USP 方法中的内标物质正二十烷出峰时间约为27 min， 且峰形不理想。本文采用金刚烷为内标物质，无需皂化且与主峰分离度良好，故选用金刚烷为内标物质。 ( 参考文献： ) ( [1] J ohnson DC. Study o f antiviral agents adamantanamine andrimantadine [J]. Postgrad Med， 1988， 83(2)：136-136. ) ( [2] Nicholson KG. Use of Ant ivirals in In f luenza in the Elder- ly： Prophylaxisand T h erapy [ J]. G e rontology， 1996， 42 ： 280-280. ) 定方法，其他肾上腺皮质激素类药物也可参考本法进行测定。本法可以为药品监督检验部门打击制假售假提供技术支持，对维护药品市场秩序，保障人民群众用药安全具有一定意义。 ( 参考文献： ) ( [1 董昕，张薇，吕狄亚，等.高效液相色谱-离子阱质谱串联技术应用于鉴别中药中添加的西地那非类似物的研究[J]. 药物分析杂志，2009，29(11)：1909-1913. ) ( 董宇，王晓黎，高广慧.检测中药制剂中非法掺人的氢氯噻嗪的方法[J].沈阳药科大学学报，2008，25(8)：646- 649. ) ( [3 ] 中华人民共和国药典临床用药须知(化学药和生物制品卷) [M].北京： 中 中医药科技出版社，2010：597. ) ( [4] 王全一，矫筱蔓，董宇.中成药中四种雌激素的薄层鉴别方 法研究 [J]. 实 用药物与临床，2011 ， 14( 2 ) ： 134-135. ) ( [5] 吴公平，雷玉萍，廖彬.反相高效液相色谱法同时测定清咽类保健食品中非法添加化学药品曲安西龙等7种成分的研究 [ J].药物分析杂志，2010，30(12)：23 9 1-2394. ) ( L6」 李丹，文红梅，崔春福，等. LC-MS/MS法快速测定中成药、保健食品中非法添加的36种化学成分[J].药物分析 杂志，2010，30(8)：15 2 7-1532. ) ( L7] 来国防，程宾，鲁静.LC-MS法测定抗风湿类中药非法添 加化学药物成分[J].中国 药 师，2010，13( 4 )：453-455. ) ( [8] 姚羽，李慧义，张明启，等.检测镇静安神类中成药中非法添加化学药品的方法研究[J].中国药学杂志，2007，42 (3)： 2 24-227. ) ( (本文编辑 郑丽娥) ) ( [3] 蒋虹，金光.奥司他韦、利巴韦林和盐酸金刚乙胺对甲型H1N1流感病毒的 一 致作用[J] . 中国比较医学杂志， 2011， 1 2(2)：2 3 -25. ) ( 中国药典 [S].二部，2010：附录86-87. ) ( 44 国家食品药品监督管理局标准(试行) YBH02382003[S] 2003. ) ( [6] 张丽，张迪..4气相色谱法测定盐酸金刚乙胺中3种有关物质 [J].中国药师，2012，15 ( 10)：14 5 0-1452. ) ( [ 7] 国家药品监督管理局标准(试行) W S1-( X -25 1 ) -2004Z [S].2004， ) ( [8 USP [ S] .34 版. ) ( (本文编辑 邹宇玲) ) 网址：www. yuweichina.com邮箱watercom 目的建立GC法测定盐酸金刚乙胺片溶出度的方法。方法照《中国药典》2010年版二部附录溶出度测定法中第二法,以蒸馏水500mL为溶剂,转速50r.min-1,30min时采样。采样后以GC法测定,经氢氧化钠碱化处理,正己烷提取,以金刚烷为内标物质,采用分流进样法,以RESTEK Rtx-5毛细管色谱柱(30 m×0.32 mm×0.25μm)为分析柱进行分离测定。结果盐酸金刚乙胺在3.98～79.60μg范围内线性关系良好(r=0.9999);平均回收率为99.82%,RSD=0.56%(n=9)。结论该方法简便、快速、准确,能有效控制盐酸金刚乙胺片的质量。