食盐中叶酸含量检测方案(液相色谱仪)

thermoscientific 食盐中叶酸含量的测定 田海玉刘绿叶金燕赛赛飞世尔科技(中国)有限公司 关键词 Ultimate 3000 食盐 叶酸亲水柱线性回收率 引言 叶酸由蝶啶、对氨基苯甲酸和L-谷氨酸组成，别名蝶酰谷氨酸，是B族维生素的一种，在人体内发挥着重要的生理作用：作为辅酶，其在体内生化反应中起传递作用；参与嘌呤和胸腺嘧啶的合成，并进一步合成 DNA 和RNA；参与氨基酸代谢，在甘氨酸与丝氨酸、组氨酸和谷氨酸、同型半胱氨酸与蛋氨酸之间的相互转化过程中充当一碳单位的载体；参与血红蛋白及甲基化合物等的合成。 色谱条件 基于叶酸的生理作用，女性在怀孕期间对叶酸的需求量比正常人高4倍；怀孕早期，叶酸缺乏可导致胎儿畸形。虽然含叶酸的食物较多，由于其光热不稳定性，容易失去活性，所以人体真正能从食物中获得的叶酸并不多。为提高人体对叶酸的摄入量，在食用产品(孕妇奶粉或食盐)中人为添加一定量的叶酸是一种重要解决方案。因此发展一种可靠的分析方法，检测这些产品中叶酸含量可保证食品的营养性和安全性。 柱温：30℃ 流动相：A：乙乙； B：20mM甲酸铵缓冲液(pH=3.0) 色谱柱： Hypersil GOLD aQ， 4.6×250 mm， 5 pm 流速：1.2 mL/min 检测波长：280 nm 梯度条件： 本文采用 Ultimate 3000 液相系统，配置紫外-可见光检测器，在 Hypersil GOLD 亲水改性柱上对叶酸标准品和实际样品进行分离分析，考察其线性范围、重现性、检出限和定量限以及加标回收率等。 仪器 Time/min A% B% -6 0 100 0 0 100 5 0 100 15 50 50 20 50 50 20.1 0 100 Ultimate 3000 系列 泵：HPG-3400 RS (S/N：8081235) 自动进样器： WPS-3000 TRS (S/N： 8081781) 柱温箱： TCC-3000RS (S/N： 8080686) 检测器：VWD3100 (S/N：8079580) 色谱软件： Chromeleon Chromatography Data System 7.2 叶酸标准品购自国药集团，食盐样品由江苏某客户提供。叶酸标准溶液：分别称取一定量的叶酸标准品，经10%氨水溶解，配制浓度分别为1.00 ug/mL、0.50 ug/mL、0.20 pg/mL、0.10 pg/mL 和 0.05 pg/mL，过滤，待测。食盐样品溶液：称取一定量的食盐，经10%氨水溶解，配制浓度为20000 ug/mL， 过滤，待测。(叶酸在碱性溶液中比较稳定) 结果与讨论 1.叶酸标准品线性曲线 图1.不同浓度叶度标准品色谱图(0.05 pg/mL-1.0 ug/mL) 表1.不同农度叶酸标准品积分表 Concentration/ Retention Area/mAU*min ug/mL Time/min 0.05 12.02 0.0480 0.1 12.02 0.0957 0.2 12.01 0.1915 0.5 12.01 0.4579 1.0 12.01 0.9191 由图1和表1可知，以乙腈和甲酸铵为流动相，在亲水改性的色谱柱上得到峰型尖锐、对称的叶酸色谱峰。在0.05 pg/mL-1.0 ug/mL浓度范围内，线性方程为Y=0.9091C-0.0006，线性关系良好(R=0.99999)。 2.叶酸标准品重现性分析 图2.连续进样5针5 ug/mL色谱图 表2.样品连续进样5针5 pg/mL Injection Number Retention Time/min Area/pA*min 1 12.02 4.5510 2 12.02 4.5488 3 12.02 4.5448 4 12.02 4.5448 5 12.03 4.5500 RSD/% 0.01 0.21 由图2和表2可知，以 5 pg/mL 叶酸标准品作为研究对象，连续进样5针，考察分析方法的重现。保留时间和峰面积的 RSD 值分别为 0.01%和0.21%。 3.叶酸标准品检出限和定量限分析 图3.浓度分别为0.005 pg/mL(红色)和0.01 pg/mL(黑色)的标准样品色谱图 表 3.0.005 ug/mL和 0.01 pg/mL标准样品色谱图积分表 Con./pg/mL Retention Time/min Area/mAU*min S/N 0.005 12.06 0.0053 6.2 0.01 12.02 0.0097 10.4 对叶酸标准品进行稀释，测试不同浓度样品峰的信噪比，有图3和表3可知，该分析方法下叶酸的检出限和定量限约为0.005 ug/mL 和 0.01 ug/mL。 4.食盐样品分析及加标回收率 图4.浓度为20000 pg/mL 的样品色谱图 Component Retention Area/ Amount/ Name Time/min mAU*min ug/mL 叶酸 12.05 0.6202 0.6829 将准备好的食盐样品溶液进样分析，由图4可知，峰型尖锐、对称，经保留时间定性确认为叶酸色谱峰。由表4所示，经过计算，该溶液中叶酸含量为 0.6829 pg/mL， 经过换算可得食盐样品羊叶酸含量约为 0.0341 pg/mg， 与客户提供的0.03-0.04 pg/mg 范围吻合。 图5.20000 pg/mL样品溶液中加入一定量叶酸标准品色谱图 赛默飞色谱及痕量元素分析 赛默飞世尔科技(中国)有限公司 www.thermofisher.com 表5.20000 pg/mL样品溶液中加入一定量叶酸标准品积分表 Area/ Amount/ Added Component RetentionName Time/min mAU*min ug/mL Amount/ F Recovery/% pg/mL 叶酸 12.06 0.8132 0.8951 0.2000 106.1 在食盐样品中添加一定量的叶酸标准品，溶解后进样分析，由图5和表5可知，叶酸检出量为 0.8951 pg/mL， 测得添加量为 0.2122 pg/mL， 回收率为106.1%。 结论 本文采用 Ultimate 3000 液相系统，发展了一种食盐中叶酸检测的方法： ·方法得到的叶酸色谱峰峰型尖锐、对称，保留时间适宜 ·方法线性范围较宽，线性关系良好，可实现叶酸的定量分析； ·方法具有良好的保留时间和峰面积重复性，证明该方法稳定性较好。 SCIENTIFIC 支持手机用户)A Thermo Fisher Scientific Brand