枸杞中多糖检测方案(气质联用仪)

枸杞多糖的气相色谱-质谱分析 1i前言 枸杞为我国传统的滋补中药材，研究表明枸杞中含有多种营养成分，其中的有效成分枸杞多糖有着广泛药理学作用，具有抗衰老、降血糖、提高免疫力等功效。本文采用气相色谱谱谱联用技术对其结构和组成进行了初步的研究。 2实验部分 2.1试剂与仪器 枸杞，乙醇，三氯甲烷，正丁醇，三氟乙酸，吡啶，衍生化试剂( BSTFA+TMCS 99：1) GC-MS3100型气质联用仪，超声波仪，离心机，涡旋混合器，氮吹仪，烘箱，天平 2.2样品处理 2.2.1枸杞多糖的提取 称取一定量的枸杞粉末样品于锥形瓶中，按液料比10：1加入蒸馏水进行超声提取1h，离心，合并上清液，加入95%乙醇水溶液沉淀过夜，再离心，合并沉淀，于105℃烘箱中烘干，得到枸杞粗多糖。 2.2.2SSevag法脱蛋白 称取一定量的粗多糖，加蒸馏水使其溶解，然后加入三氯甲烷(多糖水溶液体积的20%)，再加入正丁醇(三氯甲烷体积的20%)，振摇，使其充分混匀，静置分层，弃去下层三氯甲烷和中间层变性蛋白，然后往上清液中再加入95%乙醇沉淀过夜，离心，合并沉淀，105℃烘干得脱蛋白多糖。 2.2.3多糖的水解与衍生 称取约10mg 脱蛋白多糖，加入10mL 4mol/L的三氟乙酸溶液，密封于100℃恒温水解 4h，水解过程中每隔30min 涡旋混合一次，水解完成后冷却至室温，用0.45pm滤膜过滤，取5mL滤液氮吹至干，冷却至室温，加入200pL吡啶和 200pL衍生生试剂(BSTFA+TMCS 99：1 )，涡旋混合1min ，于60℃烘箱中衍生1h后，放置冰箱中待上机分析。 东西分析 2.3仪器条件 2.3.1气相色谱仪条件 色谱普：Equity-5(30mx0.25mmx0.25pm)石英毛细管柱；载气流量(氦气)：1ml/min 柱箱升温程序：80℃保持1min ，以20℃/min升至180度 再以5℃/min升至260度保持5min。汽化室：260℃；柱前压：60kPa；进样方式：分流进样，分流比30：1；进样量：0.4pL，吹扫流量：2 ml/min. 2.3.2质谱仪条件 离子源：EI源；电子能量： 70eV；离子源温度：200℃；接口温度：260℃；溶剂延迟：5min；扫描方式：全扫描定性，扫描范围：35~550u。 3结果与讨论 枸杞多糖经提取、纯化和水解后，与试剂 ( BSTFA+TMCS 99：1 )进行衍生化后上GC-MS分析检测，衍生物总离子流图见下图。根据 NIST标准谱图库检索结果，并结合人工分析对各组分进行定性，主要检测出阿拉伯糖、甘露糖、木糖、葡萄糖等，详细结果见表1. 图5 枸杞5号总离子流图 表1枸杞多糖 GC-MS检测结果 序号 保留时间 英文名称 结构式 1 9.44 D-Ribofuranose，1，2，3，5-tetrakis-O-(trimethylsilyl)- 8i si 2 9.86 D-Xylopyranose，1，2，3，4-tetrakis-O-(trimethylsilyl)- 81 0 6 0 si 3 10.12 L-Altrose，2，3，4，5，6-pentakis-O-(trimethylsilyl)- $i一 0 0 4 10.29 .beta.-DGalactofuranose 1，2，3，5，6-pentakis-O-(trimethylsilyl)- Si 8i sf 81 5 10.70 Glucopyranose， pentakis-Otrimethylsilyl 一 -$i0 $i0 东西分析 序号 保留时间 英文名称 结构式 6 10.79 Arabinofuranose，1，2，3，5-tetrakis-O-(trimethylsilyl)- 81 81 8i 7 10.98 .alpha.-LMannofuranose 6-deoxy-1，2，3，5-tetrakis-0-(trimethylsilyl)- 31 81 8 11.19 Gulose， 2，3，4，5，6-pentakis-O-(trimethylsilyl)- $i 0 81 9 11.72 D-Altrose， 2，3，4，5，6-pentakis-O-(trimethylsilyl)- 0 81 81 10 12.13 L-Ribofuranose，1，2，3，5-tetrakis-O-(trimethylsilyl)- 8i si 11 12.45 Mannose， 2，3，4，5，6-pentakis-O-(trimethylsilyl)-，D- $i 81 12 13.70 Glucopyranose，1，2，3，4，6-pentakis-O-(trimethylsilyl)-，D- 81 $i -- -