左旋肉碱片中左旋肉碱含量的测定检测方案(液相色谱仪)

余彦海金燕赛默飞(中国)有限公司 关键词：亲水液相色谱；电喷雾检测器；左旋肉碱 Key words： HILIC-HPLC； CAD； L-carnitine 引言 左旋肉碱是一种促使脂肪转化为能量的类氨基酸。对人体无毒副作用。特别适合人们配合有氧运动来减脂。效果比较明显。不同类型的日常饮食已经含有5-100毫克的左旋肉碱。左旋肉碱在人体的肝脏和肾中产生，并储存在肌肉、精液、脑和心脏中。 左旋肉碱分析方法，多以HPLC-UV测定，采用紫外低波长或者衍生化测定，或者以ELSD。紫外低波长检测易受到干扰，衍生化则操作繁琐， ELSD灵敏度较低；从分离机理来看，多以离子对试剂做流动相，以C18做固定相，导致方法稳定性和重复性较差。 本方法采用亲水液相色谱-电喷雾检测器测定左旋肉碱片中的左旋肉肉，以乙腈和简单低浓度醋酸缓冲盐做流动相，使左旋肉碱得到良好分离，可以作为左旋肉碱测定的成熟分析方法应用。 测试条件 仪器：T：UltiMate 3000系统，包括有带在线脱气单元的四元梯度泵，自动进样器，柱温箱，电喷雾检测器。 分析柱： ZIC-pHILIC， 150x4.6mm， 5pm，S/N： 218852； 柱温：50℃ CAD Ultra检测器： Nebulizer_TempCtrl=On Nebulizer_TemperatureNominal=35[℃] CAD.Data_Collection_Rate=5 [Hz] CAD_1.FilterConstant =Corona 进样量：：1pL 流动相条件：乙腈-5mM乙酸铵， pH6.35 流速：：0.5mL/min 取左旋肉碱片10片，称重，在研钵中研成细分，取约1g，精密称定，置100mL量瓶中，加甲醇90mL，超 图1左旋肉碱结构式 声处理5 min， 取出放冷。加甲醇至刻度，摇匀，过滤。取滤液1mL，用甲醇稀释成10mL，摇匀，过0.45um滤膜，即得。 结果与讨论 图2左旋肉碱标准品色谱图 重复性、线性关系 连续进样标准品测定本方法的线性关系及重复性，测定结果见图3，图4以及表1和表2。可见使用亲水液相色谱结合电喷雾检测器测定左旋肉碱能够获得很好的二次线性关系及重复性。 图3线性关系色谱图 图4重复性色谱图 表1左旋肉碱二次线性关系 Peak Name Cal.Type #Points Rel.Std.Dev.% Coeff.Det.% Offset Slope Curve 左旋肉碱 QOff 5 2.4436 99.9281 0.9084 10.4620 -1.5598 表2左旋肉碱重复性 Sample Name Ret.Time min Area pA*min 左旋肉碱_STD 0.54mg/mL 8.047 6.0250 左旋肉碱_STD 0.54mg/mL 8.050 6.0310 左旋肉碱_STD 0.54 mg/mL 8.047 6.0179 左旋肉碱_STD 0.54mg/mL 8.050 6.0464 左旋肉碱_STD 0.54mg/mL 8.057 6.1115 左旋肉碱_STD 0.54mg/mL 8.063 6.0655 左旋肉碱_STD 0.54mg/mL 8.060 5.9850 左旋肉碱_STD 0.54mg/mL 8.050 6.0716 0.078% 0.640% 取左旋肉碱片样品制备成供试品溶液后测定，结果见图5. 图5Sample 20120608测定谱图 结论 本方法采用亲水液相色谱，使用U3000-CAD联用测定保健食品中左旋肉碱的含量，能使左旋肉碱获得较好保留，并且通过优化色谱条件使样品中杂质与左旋肉碱峰获得较好的分离。若对于实际样品测试时，应使用梯度方法以除去主峰后杂质对下一针样品的影响。而对于亲水色谱，梯度组成是水相比例由低到高能加强清洗能力。 thermoscientific.com C 2012 Thermo Fisher Scientific Inc. All rights reserved. All trademarks are the property of Thermo Fisher Scientific Inc. and itssubsidiaries. Specifications， terms and pricing are subject to change. Not all products are available in all countries. Please consult your local sales representative for details. ThermoFisherSCIENTIFIC oThermo Fisher Scientific，San Jose， CA USA is ISO Certified.