血浆中氯吡格雷活性代谢物的萃取及LC-MS/MS检测方案(固相萃取仪)

基于 Cleanert C2 SPE 柱的血浆中氯吡格雷活性代谢物的萃取及 LC-MS/MS 检测方法 一背景 氯吡格雷是一种新型的噻吩并吡嗪类衍生物，具有抗血小板聚集作用及抗血栓形成作用。氯吡格雷口服后即可被人体快速吸收并代谢，其主要代谢产物为氯吡格雷酸，氯吡格雷的活性代谢物为氯吡格雷氧化成含氧化合物之后水解而成的一种硫醇衍生物，该化合物极不稳定，在血浆中很难检测到。 本文通过衍生化方法，并采用 Cleanert C2 SPE 柱建立了血浆中氯吡格雷活性代谢物的前处理方法，为氯吡格雷的人体生物等效性研究提供参考方法。 二目标物信息 表1目标物信息 氯吡格雷 氯吡格雷活性代谢物 氯吡格雷活性代谢物衍生物 O .OCH3 N SCI OCH3 HOOC HS' CI .OCH H3CO MP-AM 三材料及仪器 Cleanert C2柱(150mg/3mL)； Cleanert M08 正压型固相萃取装置； Venusil MP C18(2)(2.1*50mm， 5um， 110A)；2-溴-3‘-甲氧基苯乙酮(MPB)。 四样品处理方法 4.1样品衍生化 采血后立即向每份血样中加入25uL 500 mM 溶解于乙腈中的MPB， 轻轻混合(静止10min)， 3000rpm 离心30 min 以分离血浆。将血浆样品保存于-80℃待测。 4.2样品净化 (1)样品预处理：精密吸取血浆 400uL，加入550uL1%蚁酸，涡旋振荡使混匀。 (2)活化：将Cleanert C2 柱先后用 300uL 甲醇和 300pL 纯水进行预处理。 (3)上样：再将血浆混合物上样至处理过的Cleanert C2 柱上。 (4)淋洗：用500pL1%蚁酸和500pL 50 mM 醋酸铵水溶液冲洗柱子。 (5)洗脱：先后用150pL 甲醇和 100pL 50 mM 醋酸铵进行洗脱 将洗脱物进行 LC-MS/MS分析。 五仪器检测条件 5.1 HPLC条件 色谱柱：： Venusil MP C18(2)(2.1*50mm， 5um， 100A) 流速：200pL/min；流动相：0.1%甲酸水/乙腈(55/45，v/v) 柱温：30℃；进样量：3pL 5.2质谱条件 扫描模式：：电喷雾电离正模式 采集模式：多反应监测 (MRM) 表2质谱参数 Q1 Q3 DP CE 504 212 65 27 504 184.1 70 40 504 152.1 65 52 六结果 对血浆样品进行氯吡格雷活性代谢物加标实验，加标回收率均高于93%，本方法对目标物的 LOQ 低至 0.5ng/mL。 图1氯吡格雷标准溶液色谱图(浓度为30ng/mL)XCd-NRMBpirst52402120DafiorBanpe3(W 空白)cf2DI41014vif(TuboSpa) Nak 5150g8 图2血浆色谱图 图3血浆加标色谱图 七结论 本方法采用 Cleanert C2小柱对血浆中氯吡格雷活性代谢物进行萃取分析，样品基质对分析物没有明显干扰，回收率高于93%。该方法适用于血浆中氯吡格雷活性代谢物的日常监测分析。 八订货信息表 产品名称 规格/包装 订货号 Cleanert C2 150mg/3mL S021503 Cleanert M08正压型固相萃取装置 8位 SPE-M08 氮吹仪 24位 NV24A-I Venusil MP C18(2) 2.1*50mm， 5um， 110A VA950502-2 甲醇 HPLC， 4*4L AH230-4 乙腈 LC-MS 级，4*2.5L/箱 LC015 水 LC-MS级，4*2.5L/箱 LC365 1.5mL棕色进样样品瓶 100/pk 1109-0520 进样样品瓶瓶盖 100/pk 0915-1819