粪便样品中花生四烯酸检测方案(固相萃取仪)

应用 Cleanert MAS-M 对粪便样品中花生四烯酸进行萃取 一背景 不饱和脂肪酸是构成体内脂肪的一种脂肪酸，人体必需的脂肪酸。花生四烯酸(AA)是一种在生物体内含量较高，分布最广的多不饱和必需脂肪酸。对粪便样品中花生四烯酸的研究，可为体内脂肪酸代谢提供一定参考信息。 本实验采用Cleanert MAS-M对粪便样品进行净化处理，建立了粪便样品中花生四烯酸含量检测方法。 二目标物信息 图1花生四烯酸结构图 三材料与仪器 Cleanert MAS-M 96 孔萃取板； Cleanert M96 生物样品前处理仪； Cleanert V96 氮吹浓缩仪；96孔接收板；PTFE 过滤头； VenusilASB C18 (2.1*50mm， 3um， 150A)； API 4000+LC-MS/MS 串联质谱。 四样品处理方法 4.1样品前处理 称取 50mg粪便样品加入5mL 离心管中，向其中加入 0.5mL 1%甲酸水，涡旋混匀 2min，再向其中加入1.5mL甲醇，涡旋， 6000r/min 离心 5min， 取上清液；重复上述步骤再提取一次，合并上清液，过 0.22um PTFE 滤头，向其中加入 0.6mL氨水，使上样液中含有4%氨水，待净化。 4.2净化过程 所用 SPE 为 Cleanert MAS-M 96 孔萃取板 活化：甲醇600pL，水600pL 上样：待净化液全部上样，上样液弃去 淋洗：水600pL，甲醇600pL，弃去 洗脱：3%甲酸乙腈溶液 600uL， 使用96孔收集板将洗脱液分别收集。 将收集板放置于96位氮吹仪上，将温度设定为45℃，开启氮气将洗脱液氮吹至近干，并用100pL乙腈/水(7/3，v/v)将样品重溶，进样检测。 五仪器检测条件 5.1 HPLC 条件 色谱柱：： Venusil ASB C18 (2.1*50mm， 3um， 150A) 流速：200uL/min 柱温：30℃ 进样量：5pL 流动相：乙腈/水(75/25，，v/v) 5.2质谱条件 扫描模式：：电喷雾电离负模式 采集模式：多反应监测(MRM) 表1质谱参数 化合物 Q1 Q3 DP CE 花生四烯酸 303.0 259.1 -109 -18 303.0 230.9 -85 -29 303.0 205.1 -107 -20 303.0 177.1 -90 -30 六结果 图1花生四烯酸标准溶液色谱图(浓度为5ppm) 图2粪便样品色谱图 图3粪便样品加标色谱图(加标浓度为 10mg/kg) 实验所用的粪便样品中含有约 3mg/kg 的花生四烯酸，计算加标回收率时需要扣除样品中目标物的含量。 表2回收率数据 加标浓度 平均加标回收率 LOD 10mg/kg 88.9% 1ug/kg 七结论 本实验采用 Cleanert MAS-M 96孔板对粪便样品中的花生四烯酸进行批量样品高通量前处理。实验结果表明Cleanert MAS-M 能够有效除去物扰物，并能够对花生四烯酸进行定量萃取，回收率达到88.9%，可以满足日常对批量生物样品分析的需求。 八订货信息表 产品名称 规格/包装 订货号 Cleanert MAS-M 96孔板， 50mg/2mL MS-M-0502W PTFE 滤头 0.22um， 200/pk AS041320 Cleanert V96 氮吹浓缩仪 与96孔板匹配 NV96-G Cleanert M96 生物样品前处理仪 与96孔板匹配 SPE-M96 96孔接收板 2mL/well，与96孔板匹配 96SP2036-Y Venusil ASB C18 2.1*50mm， 3um， 150A VS930502-0 乙腈 LC-MS 级，4*2.5L/箱 LC015 水 LC-MS级，4*2.5L/箱 LC365 甲醇 HPLC， 4*4L AH230-4 1.5mL棕色进样样品瓶 100/pk 1109-0520 进样样品瓶瓶盖 100/pk 0915-1819 样品瓶内插管 100/pk 0609-0357