牛奶中氟苯尼考检测方案(液相色谱配件)

牛奶中氟苯尼考检测的固相萃取方法 1、 前言 氟苯尼考是一种新型的兽医专用氯霉素类广谱抗菌药，逐渐取代传统氯霉素，普遍应用于家畜禽等各种传染性疾病的治疗。近年来，食品中的氟苯尼考残留对人类的健康造成了极大的威胁，也引起许多国家食品安全检验单位的注意。 表1氟苯尼考样品信息 样品名称 英文名 结构式 分子式 分子量 CAS编号 氟苯尼考 Florfenicol C12H14Cl2FNO4S 358.2 73231-34-2 二、适用范围 适用于牛奶、奶粉中氟苯尼考的检测。 三、实验部分 仪器、试剂与材料 主要仪器设备 高效液相色谱仪，紫外检测器，SPE固相萃取装置，氮气吹干仪，超声清洗仪，涡旋振荡仪，离心机。 试剂材料 浓缩牛奶，氟苯尼考标品，正己烷、乙腈（均为色谱纯），甲醇、乙酸乙酯、无水硫酸钠、氨水（均为分析纯）。 色谱柱：ZKAT-C18（5 μm，120 Å，4.6×250 mm，订货号：152200542） 四、样品制备 样品提取 准确称取牛奶2 g（精确到0.001），加入乙酸乙酯15 mL，高速匀质1 min，加入5 g无水硫酸钠，涡旋振荡1 min，摇床振荡10 min。4000 r/min转速离心5 min。将上清液转移至圆底烧瓶中，于45 ℃旋蒸至近干，用6 mL水溶解残渣，5 mL×2次正己烷除脂，静置分层，弃去正己烷层，取3 mL水层净化。 SPE柱净化 （1）活化：C18固相萃取柱使用前依次用5 mL甲醇、5 mL水活化。 （2）上样：将待净化液加入已活化好的固相萃取柱中，以2 mL/min的流速过柱，弃去滤液。 （3）淋洗：用5 mL水淋洗固相萃取柱，弃去淋洗液，抽干5 min（真空压力22 KPa）。 （4）洗脱：用5 mL 5%氨化甲醇洗脱固相萃取小柱，收集洗脱液。 （5）重新溶解：洗脱液于45 ℃氮吹吹干，用1 mL甲醇定容，0.45 μm微孔滤膜过滤，供HPLC测定。 五、添加回收结果 牛奶基质中氟苯尼考添加水平（5 mg/kg）的回收结果 表2 牛奶基质中氟苯尼考添加水平（5 mg/kg）的回收结果 目标物 进样次数 回收率(%) 平均回收率(%) RSD(%) 氟苯尼考 1 97.55 101.02 3.20 2 100.51 3 105.02 图1 添加水平为5 mg/kg牛奶基质中氟苯尼考的液相色谱图 液相色谱条件 色 谱 柱：ZKAT-C18（5 μm ，120 Å，4.6×250 mm，订货号：152200542） 检 测 器：UV3000型紫外/可见光检测器 检测波长：UV 224 nm 流 动 相：乙腈/水 = 17/83（v/v） 流 速：1.0 mL/min 柱 温：25 ℃ 进 样 量：20 μL 六、结论 采用此方法进行乳制品中氟苯尼考含量的液相测试，添加回收率达到101.02%，表明AE.SPE-C18固相萃取小柱及ZKAT-C18柱适于乳制品中氟苯尼考的纯化和测试。 附：相关产品 产品名称 规格描述 包装数量 订货号 ZKAT-C18 5 μm ，120 Å，4.6×250 mm 1支 152200542 AE.SPE-C18 500 mg/6 mL 30支/盒 S02-0506 2mL螺纹透明样品瓶 32×11.6mm 100个/盒 AE134425 微孔滤膜 单膜，13 mm,0.45 μm 200片/盒 AE1360101