动物性食品中常山酮检测方案(生化耗材)

引领分析科技尽在北京谱朋-企业QQ：40061 65163 引领分析科技尽在北京谱朋-企业QQ：40061 65163动物源食品中常山酮残留量的测定一高效液相色谱法(GB 29693-2013) 简介 常山酮(Halofuginone)，为新型广谱抗球虫药，对多种鸡球虫均有较强的抑杀作用，在养鸡业使用较多。 本方法参照GB 29693-2013，建立了动物源食品中常山酮残留分析的高效液相色谱法。本方法适用于鸡的肌肉和肝脏组织中常山酮残留量的检测。方法中利用安捷伦Bond Elut Plexa高级聚合物固相萃取小柱对样品进行净化，并利用安捷伦专利的Poroshell 120 EC-C18 快速柱对目标物进行快速分析，方法检测限为5ug/kg；定量限为12.5ug/kg。在12.5-250ug/kg的添加水平下，常山酮的回收率为72.0%-91.0%， RSD<7%(n=6) 样品前处理 称取试料(4±0.04))g，于50mL离心管中，加胰蛋白酶50mg，加水2mL(肝脏组织)或水10mL(肌肉组织)，涡动1min，用10%碳酸钠溶液调pH至8.0，于40℃水浴下酶解3h；取出，放至室温，加10%碳酸钠溶液2mL，涡动1min，加乙酸乙酯20mL，涡动1min，在冰水浴中静置3min，立即3000rpm离心2min ，将上清转入另一离心管中。下层液用乙酸乙酯20mL重复提取一次，合并两次上清液(乙酸乙酯相)于同一离心管中；加入0.125mol/L乙酸铵溶液10mL，振摇1min，静置2min。将上层乙酸乙酯相移入另一离心管中，再加0.125mol/L乙酸铵溶液10mL，重复萃取一次，合并两次水相至同一离心管中，于40℃氮吹，除尽残余乙酸乙酯，备用。 图1.固相萃取操作流程图 引领分析科技尽在北京谱朋-企业QQ：40061 65163 表1流动相梯度表 液相色谱仪： 安捷伦1200， DAD检测器 色谱柱： Poroshell 120 EC-C18 100*4.6mm*2.7um (P/N. 695975-902) 流动相： 等梯度洗脱； 检测波长： 243nm： 流速： 1mL/min： 进样量： 25uL； 柱温： 30°C： 运行时间： 13min。 流动相/ 时间(min) 0.05 mol/L乙酸铵 水溶液(%) 乙腈(%) 0 76 24 5 76 24 5.1 0 100 9 0 100 9.1 76 24 13 76 24 DAD1A Sig-243，4 Refoff (HALOFUGINO..HALOFUGINONE-2014-05-29-Q2014-05-29 18-41-55201405290000004.D) mALJ 40- 常山酮 20- 0- 图2. 500ug/L常山准标准品色谱图和光谱图 图4.常山酮基质空白与添加回收色谱图(鸡肉基质) 8838181188881488-8 38号：83 图5..红色：500ug/L常山酮标准样品；蓝色：刘鸡肝中常山酮添加水平为125ug/kg 图6.常山酮基质空白与添加回收色谱图(鸡肝基质) 图7.色谱系统重现性(以鸡肝基质为例) 125 ug/kg添加水平鸡肝样品连续进样(n=6)，，常山酮峰面积RSD值为1.09% 常 山 ，IDAD1A Area 0.19545675*Am t+0.585873 图8.常山酮基质匹配标准曲线和线性范围(鸡肝基质，50~1000ug/L) 引领分析科技尽在北京谱朋-企业QQ：40061 65163 表2.鸡肉空白样品加标回收率 Spike level Recovery(%) Average recovery(%) RSD(%) 76.69 12.5ug/kg (n=3) 70.09 72.62 4.90 71.09 85.30 125ug/kg (n=3) 85.98 84.61 2.15 82.55 84.74 250ug/kg (n=3) 93.29 91.36 6.45 96.05 表3.鸡肝空白样品加标回收率 Spike level Recovery(%) Average recovery(%) RSD(%) 82.86 12.5ug/kg (n=3) 81.55 82.02 0.89 81.64 82.67 125ug/kg (n=3) 85.50 82.95 2.92 80.68 85.39 250ug/kg (n=3) 85.55 85.72 0.50 86.21 订货须知： Agilent 可控针阀 (Part No. 12131005) Agilent Vac Elut20固相萃取装置 (Part No. 12234103) Agilent Mega Bond Elut Plexa固相萃取小柱500mg， 6mL (Part No. 12259506)Agilent Poroshell 120 EC-C18色谱柱， 100mm ×4.6mm (Part No. 695975-902)